Способ прижизненного определения @ клеток и клеточных органоидов

 

СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ рН КЛЕТОК И КЛЕТОЧНЫХ ОРГАНОИДОВ , включающий прижизненное окрашивание клеток индикаторным красителем нейтральным красным и их по следующее фотометрирование, отличающийся тем, что, с целью повьшения точности определения, клетки фотометрируют в двух длинах волн, одна из которых соответствует изобестической точке спектра поглощения , а другая находится в области максимума спектра поглощения; нейтральной формы красителя по соотношению оптических плотностей определяют долю нейтральной формы красителя, по (Л которой судят о величине рН.

(Л) (11) СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

4(51) С 01 N 3/06

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ, (21) 3288537/30-15 (22) 17.03.81 (46) 15,02.85, Бюл. У 6 (72) Л.Л. Литинская, Т.А. Оглоблина, А.M. Векслер, Ю.P. Хруст и Л. Х. Эйдус (71) ИГУ им. М.В. Ломоносова (53) 578.088.78(088 ° 8) (56) 1. Сорокина З.А., Холдова Ю.P.

Об интерпретации данных, получаемых с помощью селективных микроэлектродов. - "Цитология", 1968, В 10, с.10.

2,. Piclc U., Avron M. Neutral reel

response as à measure of the pH gradient across chloroplasts membranes

in the ligt, FEBS Letters 65,3,348352, 1976 (прототип). (54) (57) СПОСОБ ПРИЖИЗНЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ рН КЛЕТОК И КЛЕТОЧНЫХ ОРГАНОИДОВ, включающий прижизненное окрашивание клеток индикаторным красителем нейтральным красным и их последующее фотометрирование, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности определения, клетки фотометрируют в двух длинах волн, одна из которых соответствует изобестической точке спектра поглощения, а другая находится в области максимума спектра поглощения нейтральной формы красителя по соотношению оптических плотностей определяют долю нейтральной формы красителя, по которой судят о величине рН.

1139997

Составитель N. Мирзаев

Редактор Н. Горват ТехредС,Легеза Корректор А. Обручар.

Тираж 897 Подписное

BHKKIH Государственного комитета С1 СР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д, 4/5

Заказ 254/32

Филиал ПЛП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к измерите тельной технике и может быть использовано в биологии и медицине для измерения рН в клетках и их органоидах. 5

Известен способ определения рН в клетках, основанный на использовании специальных микроэлектродов, ввеквмык в клетку (1) .

Недостатками известного способа f0 являются нарушение целостности клеточной мембраны при введении микроэлектродов, невозможность точной локализации положения микроэлектродов, что не позволяет измерять рН 15 внутри отдельных органоидов.

Известен также способ определения рН, основанный на использовании витального индикаторного красителя нейтрального красного (НК) и после- 20 дующей фотометрии окрашенных .хлоропластов.в длине волны 530 нм Ц.

Недостатком этого способа является низкая точность определения, так как результаты фотометрии отра- 25 жают не только изменение рН, но и изменение концентрации красителя в исследуемых органоидах.

Цель изобретения — повышение точ. кости огределения рН в единичной клетке или ее органоиде, Поставленная цель достигается тем, что согласно способу прижизненного определения рН клеток и клеточных органоидов включающему nput

35 жизненное окрашивание клеток индикаторным красителем нейтральным красным и их последующее фотометрирование, клеткй фотометрируют в двух длинах волн, одна из которых соответствует изобестической точке спект ра поглощения, а другая находится в области максимума спектра поглощения нейтральной формы красителя, по сост к ношению оптических плотностей определяют долю нейтральной формы красителя, по которой судят о величине рН.

Пример 1. Препарат и объектами, например .фибробластами китайского хомячка в культуре, окрашивают прижизненно 0,01%. НК, затем устанявливают на столик микрофотометра МЦФБ-1, который позволяет измерять оптические плотности в длинах волн 470 и 450 нм. Фотометрический зонд совмещают с центром одной из лизосом, аккумулирующих НК. Далее измеряют оптические плотности в указанных длинах волн, берут отноше. ние оптических плотностей и по калибровочной кривой находят соответствующий рН, равный 5,2. ,Пример 2. Препарат с теми же объектами окрашивают прижизненно

0,1% НК, устанавливают на столик микрофотометра МЦФВ-1 и фотометриру. ют в тех же длинах волн совмещ1ая

1. фотометрический зонд с участком цитоплазмы одной из клеток. По соотно. шению измеренных оптических плотностей и по калибровочной кривой находят рН 6,8. ! .

Пример 3. Препарят с объектами, например эмбриональными клетками почки свиньи в культуре, окрашивают прижизненно 0,01% НК, затеи устанавливают на столик микрофотометра МПФВ-1 и.многократно фотометрируют в тех же длинах волн, совмещая фотометрический зонд с центром одной из лизосом. При каждом измерении по отношению измеренных оптических плотностей и по калибровочной кривой находят рН и прослеживают динамику этой величины в отдельной лизосоме: рп изменяется от 4,5 до б.8.