Вакцина против колибактериоза поросят

 

(19)RU(11)1149466(13)C(51)  МПК ⁶    _A61K39/108Статус: по данным на 17.01.2013 - прекратил действиеПошлина: учтена за 15 год с 30.07.1997 по 29.07.1998

(54) ВАКЦИНА ПРОТИВ КОЛИБАКТЕРИОЗА ПОРОСЯТ

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к способам получения вакцин, применяемых для профилактики колибактериоза (эшерихиоза) сельскохозяйственных животных. Колибактериоз (эшерихиоз) инфекционная болезнь, вызываемая энтеропатогенными эшерихиями, -широко распространен во многих странах мира и наносит значительный экономический ущерб животноводству за счет высокой смертности поросят как в первые дни жизни, так и в послеотъемный период, снижения привесов и потери продуктивности у переболевших животных. Основными методами борьбы с колибактериозом являются химио- и антибиотикотерапия. Однако возникновение резистентных форм энтеропатогенных эшерихий заметно снижает лечебную эффективность препаратов. В этой связи разработка средств специфической профилактики колибактериоза, в частности вакцин, имеет актуальное значение. Известно, что энтеропатогенные эшерихии обладают комплексом факторов вирулентности, из которых основными можно считать продуцирование термолабильных и термостабильных токсинов и гемолизина, наличие адгезионных антигенов К-88 и К-99. Наличие и степень выраженности этих факторов у эшерихий определяют и форму проявления колибактериоза у поросят: энтеротоксемическая, септическая и отечная. Первые две отмечают у поросят в первые дни жизни, последнюю в период отъема. В этой связи высокоэффективная вакцина против колибактериоза поросят должна обеспечить нейтрализацию основных факторов вирулентности энтеропатогенных эшерихий. Известна инактивированная квасцово-масляная вакцина против колибактериоза поросят, содержащая смесь штаммов эшерихий сероваров 08, 020, 054, 078, 0101, 0138, 0139, 0141, 0147 и 0149, формалин, минеральное масло, квасцы, сапонин, ланолин и толуол. Однако вакцина обладает ограниченным спектром действия в связи с отсутствием адгезионных антигенов и энтеротоксинов. Известна вакцина против колибактериоза поросят, содержащая термостабильный токсин и адъювант. Однако вакцина не обладает высокой эффективностью при различных формах колибактериоза в связи с отсутствием полного набора факторов, ответственных за широту иммуногенного спектра действия препарата. Известна вакцина против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, содержащая смесь 10 штаммов Escherichia coli сероваров 08, 09, 078, 0137, 0138, 0139, 0141, 0142, 0147, 0149 с концентрацией 24 млрд. микробных тел, инактиватор формалин и адъювант гидроокись алюминия. Вакцина не обеспечивает достаточно напряженного иммунитета у вакцинированных животных при энтеротоксемических формах колибактериоза. Кроме того, из-за большой концентрации антигена имеет высокую реактогенность и вызывает абсцессы в местах введения. Цель изобретения повышение иммуногенности вакцины против колибактериоза поросят и расширение спектра ее действия. Поставленная цель достигается тем, что вакцина против колибактериоза поросят, содержащая антигены эшерихий, консервант на основе формалина и тиомерсала и адъювант, дополнительно содержит бульон Хоттингера и физиологический раствор, а в качестве антигенов смесь штаммов Escherichia coli ВГНКИ N 305-37/10, E. coli ВГНКИ N 355-37/12, E.coli ВГНКИ N 357-37/12, E.coli ВГНКИ N 331-37/12, E.coli ВГНКИ N 359-37/12, E.coli ВГНКИ N 360-37/12, E.coli ВГНКИ N 299-37/10, E.coli ВГНКИ N 330-37/11 при следующем содержании компонентов на 1 л вакцины: Антигены эшер- рихий, клеток 7,7х10¹²-9,2х10¹² Гидроокись алю- миния,см³ 280-330 Формалин, см³ 2,8-3,5 Тиомерсал, г 0,13-0,18 Бульон Хот- тингера, см³ 100-160 Физиологичес- кий раствор, л До 1
Вакцина содержит штаммы эшерихий 8 серогрупп (08, 09, 078, 0138, 0139, 0141, 0147 и 0149), наиболее часто поражающие поросят. Штаммы содержат капсульные антигены К30, К80, К43, К81, К85, К88, К91, способны продуцировать гемолизин, термостабильные и термолабильные токсины. Штаммы эшерихий, используемые для изготовления вакцины, селекционированы по иммуногенной и антигенной активности. Штаммы Е.coli ВГНКИ N 305-37/10, E.coli ВГНКИ N 355-37/12, E.coli ВГНКИ N 299-37/10, E. coli ВГНКИ N 330-37/11, E.coli ВГНКИ N 357-37/12, E.coli ВГНКИ N 331-37/12, ET.coli ВГНКИ N 359-37/12, E.coli ВГНКИ N 360-37/12 депонированы в коллекции микроорганизмов Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов МСХ СССР. Штаммы обладают следующими свойствами. Морфологические свойства. Штаммы E. coli N 299-37/10, N 355-37/12, N 330-37/11, N 305-37/10, N 357-37/12, N 331-37/12, N 359-37/12, N 360-37/12 представляют собой мелкие грамотрицательные палочки без спор и капсул. Размер 1,5-2 мк, ширина 0,3-0,5 мк. Клетки штаммов N 305-37/10, N 360-37/12, N 330-37/11, N 331-37/12, N 359-37/12 подвижны за счет перетрихнально расположенных жгутиков. Культуральные свойства. На мясопептонном бульоне все штаммы образуют интенсивное помутнение через 6-8 ч роста при 37-38^оС. На МПА растут в виде матовых круглых, гладких мелкозернистых, слегка выпуклых колоний (S-форма) диаметром 2-4 мм. Ферментативные свойства. Все штаммы сбраживают лактозу за исключением штамма N 331-37/12, глюкозу, маннит, арабинозу, сорбит и сахарозу за исключением штамма N 305-37/10, N 360-37/12, N 299-37/10, рафинозу за исключением штамма N 360-37/12, дульцит за исключением штамма N 360-37/12. Все штаммы свертывают молоко и образуют индол. Штаммы N 305-37/10, N 357-37/12, N 330-37/11, N 355-37/12, N 360-37/12, N 331-37/12 обладают выраженными гемолитическими свойствами. Антигенная структура. Штаммы эшерихий имеют следующую антигенную структуру: штамм N 305-37/12 агглютинируется О-коли сывороткой 078 до титра 1: 6400 и сывороткой К80. штамм N 299-37/10 агглютинируется О-коли сывороткой 08 до титра 1:3200 и сывороткой К-43; штамм N 355-37/12 агглютинируется О-коли сывороткой 09 до титра 1:3200 и сывороткой К-30; штамм N 330-37/11 агглютинируется О-коли сывороткой 0138 до титра 1:6400 и сывороткой К-81; штамм N 357-37/12 сывороткой 0139 до титра 1:12800, штамм N 331-37/12 сывороткой 0141 до титра 1:12800 и сывороткой К-88 до титра 1:320 и К-85; штамм N 359-37/12 агглютинируется О-коли сывороткой 0147 до титра 1:6400; штамм N 360-37/12 сывороткой 0149 в титре 1:6400, сывороткой К-88 до титра 1:640 и сывороткой К-91. Вирулентность штаммов. Штамм N 305-37/12 имеет величину ЛД₅₀, для мышей равную 57 млн. штамм N 299-37/10 79, N 355-37/12 500, N 330-37/11 125, N 357-37/12 45, N 331-37/12 280, N 359-37/12 275, N 360-37/12 94 млн.микробных клеток суточной агаровой культуры. Токсические и токсигенные свойства. Штамм N 305-37/12 продуцирует термолабильный (ТЛ) энтеротоксин, штамм N 355-37/121 ТЛ и термостабильный (ТС) токсин, штаммы N 359-37/12, N 360-37/12, 331-37/12 образуют ТЛ и ТС токсины, штамм N 330-37/11 ТЛ токсин. Все штаммы обладают эндотоксином. П р и м е р 1. Способ изготовления вакцины против колибактериоза (эшерихиоза) поросят заключается в следующем. Штаммы эшерихий засевают каждый отдельно по 0,5 см³ во флаконы на 200 см³, содержащие 80-100 см³бульона Хоттингера, имеющего аминного азота 150-200 мг% триптофана 50-100 мг и рН 7,8-8,0. Штаммы выращивают в течение 8-10 ч при температуре 37-38^оС. Выросшие культуры проверяют на чистоту. Чистые культуры засевают из флаконов отдельно в наполовину заполненные бульоном Хоттингера 10-литровые бутыли и культивируют в течение 8-10 ч при температуре 37-38^оС, периодически встряхивая. Штаммы засевают в реактор группами с учетом их колициногенности. В каждый реактор засевают 5-7% от объема среды матровых расплодок, выращивают в течение 10-14 ч при температуре 37-38^оС, непрерывной аэрации и перемешивании. По окончании выращивания определяют рН, концентрацию микробных тел, чистоту культуры микроскопией и высевом на питательные среды. Полученную бактериальную массу в каждом реакторе разводят стерильным физиологическим раствором до концентрации 10 млрд. микробных тел в 1 см³, перекачивают и смешивают в одном реакторе. В реактор к смеси культур добавляют при включенной мешалке формалин, разведенный физиологическим раствором 1:1, с таким расчетом, чтобы его концентрация в культуре была 0,3% и тиомерсал в количестве 0,01% Инактивацию культуры проводят в течение 15-16 суток при температуре 37-38^оС. К инактивированной культуре добавляют стерильный 6%-ный раствор гидроокиси алюминия до концентрации 30% от объема и 0,05 г тиомерсала на 1 л вакцины и тщательно перемешивают. Затем доводят рН 10%-ным NaОН до 7,2-7,4, оставляют вакцину при температуре 18-20^оС и проводят контроль на стерильность. Проверенную на стерильность вакцину расфасовывают при включенной мешалке во флаконы, которые закрывают резиновыми пробками, обкатывают металлическими колпачками и этикетируют. Расфасованную вакцину проверяют на стерильность, безвредность и активность. Полученная вакцина имеет компонентный состав, приведенный в табл.1. П р и м е р 2. Полученную вакцину вводят внутримышечно двукратно супоросным свиноматкам за 1,5-2 месяца до опороса, а также поросятам перед отъемом в дозах: супоросным свиноматкам, 4-5 и 5-6 см³, поросятам перед отъемом 1-1,5 и 1,5-2 см³. Вакцину применяют в хозяйствах, неблагополучных по колибактериозу, для вакцинации супоросных свиноматок за 1,5-2 месяца до опороса, а также поросят перед отъемом. Вакцину вводят внутримышечно в область шеи с соблюдением правил асептики, двукратно с интервалом 10-15 дней в дозах, приведенных в табл.2. Молодняк вакцинируют перед отъемом не ранее чем в 21-дневном возрасте. Слабый молодняк вакцинируют в половинных дозах. Иммунитет наступает через 18-20 дней после первой дозы вакцины и сохраняется у взрослых животных в течение 5-6 месяцев, у молодняка 3-5 месяца. Испытание иммуногенных свойств вакцины проводили в 3 хозяйствах. Контрольные (невакцинированные) группы животных (супоросные свиноматки), а также родившийся молодняк находились в аналогичных условиях содержания, кормления и ухода в одних и тех же помещениях и в одно и то же время вместе с опытными животными, родившимися от вакцинированных свиноматок. Испытание проведено на 464 супоросных свиноматках. Результаты испытания показали (см. табл. 3), что поросята от вакцинированных матерей заболевают колибактериозом в среднем в 8,2% случаев против 32,6% в контрольной группе, болезнь у них протекает в легкой форме и отход поросят в этой группе был в 6,6 раза меньше, чем у поросят, родившихся от невакцинированных свиноматок. П р и м е р 3. Экспериментальную серию вакцины сравнивали по иммуногенной активности с вакциной-прототипом на 10 супоросных свиноматках (по 5 животных на вакцину). Две свиноматки служили контролем. Вакцинацию проводили за 1,5-2 месяца до опороса двукратно в дозах 4 + 5 с³ с интервалом между дозами 10 дней. Через 24 ч после рождения поросят заражали внутрибрюшинно контрольным штаммом E.coli 078 в дозе 2˙10¹⁰ клеток суточной агаровой культуры на физиологическом растворе. Результаты представлены в табл.4. Таким образом, результаты экспериментального заражения поросят от матерей, вакцинированных двумя вакцинами, свидетельствуют о преимуществе новой вакцины, где сохранность поросят составила 100% против 39% у вакцинированных вакциной-прототипом. Кроме того, вакцина-прототип имела повышенную реактогенность и вызывала абсцессы и свиноматок на месте введения. Предложенная вакцина обладает хорошо выраженными антигенными свойствами, а также широким спектром иммуногенности, что позволяет профилактировать колибактериоз поросят в различных регионах мира.

Формула изобретения

ВАКЦИНА ПРОТИВ КОЛИБАКТЕРИОЗА ПОРОСЯТ, содержащая антигены эшерихий, консервант на основе формалина и тиомерсала и адъювант, отличающаяся тем, что, с целью повышения иммуногенности и расширения спектра действия, дополнительно содержит бульон Хоттингера и физиологический раствор, а в качестве антигенов смесь штаммов Escherichia coli ВГНКИ N 305-37/10, E.coli ВГНКИ N 355-37/12, E.coli ВГНКИ N 357-37/12, E.coli ВГНКИ N 331-37/12, E.coli ВГНКИ N 359-37/12, E. coli ВГНКИ N 360-37/12, E.coli ВГНКИ N 299-37/10, E.coli ВГНКИ N 330-37/11, взятых в равных соотношениях при следующем содержании компонентов на 1 л вакцины:
Антигены эшерихий, клеток 7,7 · 10¹² 9,2 · 10¹²
Гидроокись алюминия, см³ 280 330
Формалин, см³ 2,8 3,5
Тиомерсал, г 0,13 0,18
Бульон Хоттингера, см³ 100 160
Физиологический раствор, л До 1

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3