Способ получения сорбента для разделения олигонуклеотидов

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА ДЛЯ РАЗДЕЛЕНИЯ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ, включаю ций обработку кремнезема подиэтиленимином и раствором эпоксидной смолы или дибромэтана в диоксане, отличающийся тем, что, с целью повьшения селективности и разрешающей способности сорбента дополнительно осуществляют обработку йодистым метилом в ацетонитриле. (Л

COlO3 СО8ЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (l9) (I t) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

AO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3670634/23-26 (22) 08. 12. 83 (46) 07.05.85. Бюл. И 17 (72) С.И. Ястребов (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт молекулярной биологии (53) 543.544(088.8) (56) G.В. Сох, С.R. Loscombe, .I

М.J. Slucntt, К. Sugden, I.A. Upxield.

The preparation, properties and ваше applications of bonded ionexchange packings based on microparticulate silica gel for HPLC.

J. Chromofogr, 1976, ч. 117, р. 269276.

04жцеров В.И., Ямщиков В.Ф. Хроматография олигонуклеотидов на пористых носителях, моди4ицированных полиэтиленимином. — "Биоорганическая химия", 1983, т. 9, Ф 9, с. 12481253.

4(5t) В 01 J 30/48; В 01 Р 15/08 .G О1 N 30/08 (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА

ДЛЯ РАЗДЕЛЕНИЯ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ, включающий обработку кремнезема полиэтиленимином и раствором эпоксидной смолы или дибромэтана в диоксане, отличающийся тем, что, с целью повьвпения селективности и разрешающей способности сорбента; дополнительно осуществляют обработку йодистым метилом в ацетонитриле.

11539

Изобретение относится к материалам для жидкостной хроматографии и может быть использовано в ;интезе сорбентов для разделения и анализа олигонуклеотидов. 5

Цель изобретения — повышение селективности и разрешающей способности сорбента.

Сущность предложенного способа заключается в следующем.

Высушенный в вакууме силикагель обрабатывают раствором полиэтиленимина в эгиловом спирте, перемешивают, 15 дегазируют,фильтруют, отмывают этиловым спиртом. Полученную композицию сушат и обрабатывают раствором эпоксидной смолы или дибромэтана в диоксане. После следующей промывки

20 сорбента и сушки на него воздействуют избытком иодистого метила в ацетонитриле, дегазируют и кипятят реакционную смесь, промывают ацетонитрилом и окончательно высушивают.

Пример 1. Синтез сорбента.

2 r силохрома С-80 с удельной поверхностью 80 и /г, предварительно высушенного в вакууме при 190 С в течение 3 ч, помещают в круглодонную кол- 30

16у на 100 мл и заливают 20 мл 107.— ного раствора полиэтиленимина (молекулярная масса 35 тыс.) в этиловом спирте. Хорошо перемешивают на встряхивателе 3 мин, дегазируют» 35 . оставляют на 40 мин и повторяют встряхивание. Затем силикагель на фильтрующей воронке промывают этиловым спиртом (6 х 30 мл) и сушат при

90 С в вакууме в течение 2 ч, пере- . 4О носят в круглсдонную колбу на 100 мл, добавляют 20 мл 107.-ного раствора . .эпоксидной смолы ДЭГ-1 в диоксане, встряхивают 2 мин, дегаэируют, оставляют на 12 ч. После этого носитель. 45 промывают последовательно диоксаном (3 х 30 мл), спиртом (3 х 30 мл), ацетонитрилом (3 х 30 мл), спиртом (2 х 30 мл), сушат в вакууме при

90 С в течение 2 ч. Переносят в круг" 5О лодонную колбу на 100 мл, добавляют

50 мл 507-ного раствора иодистого метила в ацетонитриле, перемешивают на встряхивателе 3 мин, дегазируют, кипятят 2 ч и оставляют на 12 ч при комнатной температуре. Промывают сорбент ацетонитрилом (3 х 30 мл), этиловым спиртом (3 х 30 мл), сушат при 90 С в течение 2 ч.

76

Содержание азота в полученном сорбенте по элементному анализу составляет 1,47, что соответствует емкости 1,0 мг-экв/г.

П р и и е р ?. Синтез сорбента.

Синтез проводят аналогично примеру

1, но вместо раствора эпоксидной смолы берут 107-ный раствор 1,2-дибромэтапа в диоксане. После обработки иодистым метилом и сушки, сорбент заливают 50 мл смеси диметилбензиламина и ацетонитрила (1:1), встряхивают 2-3 мин, дегазируют и оставляют на 10 ч. После этого носитель промывают на воронке с фильтрующим дном ацетонитрилом (Зх 30мл), этиловым спиртом (3 х 30 мл), водой

{3 х 30 мл), сушат при 100 С 2 ч.

Содержание азота в полученном сорбенте по элементному анализу составляет 1,4%, что соответствует

1,0 Mr-arcs/r.

Полученный сорбент испытывали на жидкостном хроматографе высокого . давления модели 332 фирмы "Альтекс" (CUIA). В качестве элюита испольэовали 0,1 М КН РО,, рН б,5; 30% МеСИ, скорость потока 0,5 мл/мин. Использовали сорбенты с размером частиц

10 мкм, колонки 3,2 х 250 мм.

Селективность сорбента определяют по известной формуле коэффициент селективности; олигодезоксинуклеотид;

d (ÑÀÀGÑÑÒÑÑÀ);

d (GTGTTACCCAA);

d (AAAAACGCTTACAA);

1 (GAAAGGTGAATAA); время удерживания декадеэоксинуклеотнда; время удерживания х-ro олигодезоксинуклеотйда; время выхода неудерживаемого на колонке вещества. где е(„„1 х х=1; х = 2

1 х= 3; х=4;

Коэффициенты селективности предлагаемого,известного и фирменного сорбента Partisil SAX приведены в табл.1.

Partisil SAX - сорбент фирмы Whatman (США), представляющий собой сильный анионообменник, наиболее часто используемый для выделения олигонуклеотидов.

1153976

Таблица 1

Коэффициент се лектив-, Коэффициент селективности сорбента ности

Таблица 2 предло- иэвест- Part.isil женного ного SAX

Partisil

SAX

Известный сорбент

Ко эффициенты разрешающей способПредложенный сорбент

1,833 2,140 о(1,2 2,543

oL 1,3 4,304

g 1,4 7,456

3,286

1, 583 ности

3,333 5,571

1,4

1,3

5,3

1,2

0,89 2,5 б,б

4,3

2,3

9,7

К1Ч где R

t ч

Составитель С. Староверов

Редактор А. Сабо Техред Т.Дубинчак Корректор И. Эрдейи

Заказ 2570/7 Тираж 541 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35,Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Селективность представляет собой отношение чистого времени удерживания двух компонентов и ее можно определить непосредственно иэ хроматограммы.

Отношение времени удерживания двух компонентов (о ) на предлагаемом сорбенте больше, чем на известных, что позволяет получать значительно лучшее разделение предложенных олигонуклеотидов.

Коэффициент разрешающей способности .сорбента вычисляют по формуле

W + W

1 коэффициент разрешающей способности; время- удерживания у«го олигодезоксинуклеотида; время удерживания декадезоксинуклеотида; ширина пика декадеэоксинуклеотида; ширина пика у-го олигодеч эоксинуклеотида.

Сравнение коэффициентов разрешаю5 щей способности сорбентов предложенного, известного и Partisil SAX даны в табл. 2.

С помощью коэффициента разрешающей способности можно количественно определить степень разделения веществ.

Из данных, приведенных в табл.2, видно, сто самая высокая степень разделения олигонуклеотидов достигается на предложенном сорбенте, что делает возможным полное разделение всех четырех олигонуклеотндов в отличие от известных сорбентов.

Таким образом, предложенный способ получения сорбента позволяет повысить селективность и разрешающую способность сорбента по сравнению с извест" ными, что повышает качество раэделения и анализа смесей олигонуклеотидове

Способ получения сорбента для разделения олигонуклеотидов Способ получения сорбента для разделения олигонуклеотидов Способ получения сорбента для разделения олигонуклеотидов 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к методом газовой хроматографии, а иКленно к использованию различных неподвижных фаз для газохроматографического разделения органических соединений
Наверх