Способ получения аминопроизводных тетрациклононана или их солей
Способ получения аминопроиэводных тетрациклоионана общей формулы Т: V. х A-NHz R. где Кд - атом водорода или С -С -алкял , А - 1,2 - этиленовая группа или группа формулы -CH-R2, где Rj - атом водорода, С -С -алкил , диклогексил, фенил-С -С -алкил , 4-С -С -алкилфешш , 4-Ci-С (.-алкоксифенил или 4 хлорфенил,причем при значении A-CH-R, по крайней мере один кз R и Rj - не атом водорода. или их солей, отличающийс я тем, что, прризнодное тетрациклононана общей формулы II: где R имеет указанное значение, - метиленовая группа или простая связь, X - цианогруппа, карбамоильная группа или группа общей формулы III: О) RrCl-N-R где R2 имеет указанное значение Rg - атом водорода, оксигруппа или группа формулы Mg-Y, где Y - атом брома или иода, причем при значении В О1 метиленовая группа, R2 О ) атом водорода, а при значеся нии В - простая связь по со крайней мере один из R и R2 - не атом водорода, подвергают восстановлению боргидридом натрия в присутствии хлористого кобальта или хлористого никеля, или водородом в присутствии родия на окиси алюминия при значении В - простая связь, X - группа указанной формулы (ill), где R - метил и Rj - оксигрупца , или алюмогидридом лития с последукишм вьщелением целевого продукта в свободном виде или в виде соли.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Х llATEHTY г => — R з
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
fl0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 2699554/23-04 (22) 22.12.78 .(31) 53446/77 (32) 22. 12.77 (33) Великобритания (46) 15.05.85. Бюл. N 18 (72) Дуглас Линтин Своллоу (Великобритания) (71) Империал Кемикал Индастриз
Лимитед (Великобритания) (53) 547.233.07(088.8) (56) 1. Патент Великобритании
В 1180749, кл. С 2 С, опублик. 1970. .2. Бюлер К., Пирсон Д. Органические синтезы. И., "Мир", 1973, ч. 1, с. 482.
3. Там же, с. 477-480. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ А1ЯНОПРОИЗВОДHbK ТЕТРАЦИКЛОНОНАНА ИЛИ ИХ СОЛЕЙ, (57) Способ получения аминопроизводных тетрациклононана общей формулы l: где К, — атом водорода или C -C -алкил
А — 1,2 — этнленовая группа или группа формулы -СН-R<, где
R — атом водорода, С -С—
-алкил, циклогексил, фенйл-С -С -алкил 4-С -С -ал6 6 килфенилу 4-С, -С -алкоксифенил или 4-хлорфенил, причем при значении А-СН R» по крайней мере один из R, и
R — не атом водорода, „„80 „„1156591 А
4 t511 С 07 С 87/40
С 07 С 87/455 // А 61 К 31/135 или их солей, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, производное тетрациклононана общей формулы IE: где R имеет указанное значение, 1
? — метиленовая группа или простая связь, Х вЂ” цианогруппа, карбамоильная группа или группа общей формулы III: где R имеет указанное значение, Фй
R — атом. водорода, оксигруппа или группа формулы Mg-Y Э и где Y — - атом брома или иода, seaaL причем при значении  — (д метиленовая группа, R2— атом водорода, а при значе- вд нии  †.простая связь по крайней мере один из R u.
R 2 не атом Водорода подвергают восстановлению боргндридом натрия в присутствии хлористого кобальта или хлористого никеля, или водородом в присутствии родня на окиси 3 алюминия при значении В - простая связь, Х вЂ” группа указанной формулы (III), где R — метил и R — оксигруппа, или алюмогидридом лития с последующим выделением целевого продукта в свободном виде или в виде соли.
1 156 59-1
K2 C=N K3 (п) Изобретение относится к способу получения новых химических соединений — аминопроизводных тетрациклононана общей формулы: где R — атом водорода или С„-Сз-алкил;
A — 1,2 — этиленовая группа или
15 группа формулы — СН-К, где
R — атом водорода, С„-С—
-алкил, циклогексил, фенил-С -С -алкил 4-С -С -алкил1 ь
20 фенил, 4 — С.,-С -алкоксифенил или 4-хлорфенил, причем при значении А — СН-R по крайней мере один из R и .
R> — не атом водорода, или их солей, обладающих анти25 вирусным действием.
Аминопроиэ водные тетрациклононана, например 8-аминотетрацикло(4,3,0,0, Ь T
0 ) нонаи, обладают выраженным антивирусным действием (1 f.
Однако данное соединение обладает недостаточно высокой функциональной активностью при низких концентрациях препарата, например соединение не оказывало противовирусного действия 35 в концентрации 50 мкг/мл.
Известна реакция восстановления оКсНМоВ кетонов боргидридом натрия при нагревании в инертном органическом растворителе с образованием сост 40 ветствующего амина { 23, а также реакции восстановления оксимов, амидов или нитрилов с помощью алюмогидрида лития или водородом в присутствии родня на окиси алюминия при нагревании 45 в инертном органическом растворителе, таком как низший спирт t3 j.
Цель изобретения — разработка способа получения новых аминопроизводных тетрациклононана, обладающих по- 50 вышеиным антивирусным действием.
Указанная цель достигается новыми химическими соединениями — аминопроизводными тетрациклононана общей формулы (1) или их солями,: обладаю- 55 щими противовирусным действием.
Указанные соединения получают способом, основанным на известных реакциях и заключающемся в том, что производное тетрациклононана общейформулы: где К, имеет указанное значение
 — метиленовая группа или простая связь;
Х - - цианогруппа, карбамоильная группа или группа общей формулы: где R имеет указанное значение, R — атом водорода, оксигруппа или группа формулы Mn-Y, где Y — атом брома или иода, причем при значении В-мети- . леновая группа, R — атом водорода, а при значении  — простая связь по крайней мере один из К„ и
К - не атом водорода, подвергают восстановлению боргидридом натрия в присутствии хлористого кобальта или хлористого никеля или водородом в присутствии родия на окиси алюминия при значении  — простая связь, Х— группа указанной формулы (Ш), где
R — метил и R — оксигруппа, или алюмогидридом лития с последующим выделением целевого продукта в свободном виде или в виде соли.
Пример 1. 8-(2-аминоэтил) тетрацикло(4,3,0,0 +,0 ) нонана гидрохлорид.
Из магния (12,0 г) и иодистого метила (7 1,0 r) в эфире (400 мл) получают раствор метилмагнийиодида.
Эфир отгоняют и заменяют сухим толуолом (300 мл). К раствору толуола добавляют 8-цианотетрацикло(4,3,0,.
0,0 )нонан (58,0 г), который по данным газожидкостной хроматографии является смесью экзо- и эндоизомеров в соотношении 3,6:1. Смесь нагревают с обратным холодильником до тех пор, пока не вступит в реакцию весь нитрил (около 6 ч). Этот раствор охлаждают до комнатной температуры и к нему медленно при перемешивании добавляют суспензию
156591 ком газообразного хлористого водоро да. Таким образом получают осадок 8-(2-аминоэтил)тетрацикло-(4,3,0,0 ", 0 ) нонана хлоргидрата, который отфильтровыва эт, промывают эфиром, высушивают и перекрнсталлизовывают из изопропилового спирта. Продукт имеет т.пл. 265,5--.266 C. Получают
33,4 r целевого продукта (выход
10 41,8X), Пример 2. В условиях, описанных в примере 1, с использованием соответствующего галоидного алкила, галоидного арилалкила или галоидари15 ла, получают следующие соединения (см.табл. 1) .
Та блица !
CH +2 !
Галоид
229-231
61,24
Хлор
185-187
Бензоат
16,7
Бромистый 4-пропил — Сн (С ъ), — (c»ã ) д © хлор
-Oo
-©-"
) О(И . Бензоат
Q (" Ц Бензоат
175-178
Бензоат
18,76
Бромистый цикло-. гекснл
114-116
Бензоат
28,0
Бромистый фенилпропил!
48-150
10,51
Бромбенэол
Бензоат
158-160
26,7
:h -хлорбромбензол
Бензоат
198-201
17, 1
26,5 и -броманизол
188- 191
П -бРом толуол
18,5
2 7-219
Экэо-8-(1-оксиминс этил) тетрацикло (4,3,0,02,0 )нонан (3,0 г) растворяют в сухом эфире (20 мп) при комнатз 1 алюмогидрида лития (7,6 г) в безводном эфире (200 мл).
Смесь нагревают в течение 6 ч, охлаждают до комнатной температуры, а избыток алюмогидрида лития разлагают осторожным добавлением воды каплями при сильном перемешивании.
Затем добавляют разбавленный раствор едкого натра (15 мл раствора 18,6 г едкого натра в 50 мл воды) для разложения комплекса Гриньяра. Осадок затем отфильтровывают и тщательно промывают эфиром. Объединенные жидкости и промывные части высушивают
1 над безводным карбонатом калия, отфильтровывают и обрабатывают избытИодистый этил — CH2CН3
Бромистый пропил .— QP ZСН2СНg
Пример 3. Экзо-8-(t-аминоэтил)тетрацикло(4,3,0,0,0 ) нона- на гидрохлорид.
Т.плавления, С Выход, Ж
1156591 ной температуре и добавляют каплями с перемешиванием к нагреваемой с обратным холодильником суспензии алюмпгидрида лития (1,0 г) в сухом эфире (50 мл). Когда добавление заканчива- 5 ют, смесь нагревают еще в течение
16 ч, охлаждают и осторожно каплями добавляют воду для разложения избытка алюмигидрида лития. Осадок отфильтровывают от органической фазы и тщательно промывают эфиром. Органическую фазу и промывку соединяют, высушивают с использованием безводного поташа, фильтруют и обрабатывают избытком сухого хлористого водорода в эфире.
Таким образом получают осадок зкзо-8-(1-аминоэтил)тетракцикло(4,3,0,0 4, 0 ) нонана хлоргидрата, который затем перекристаллизовывают из изопропилового спирта. Перекристаллизованный продукт имеет т .пл. 54-255 С.
Получают 1,1 r целевого продукта (выход 32,5X).
Экзо-8-(1-оксиминоэтил)тетрацикло (4,3,0,02 4,0= ) ноиан, используемый в качестве исходного материала, получают следуяцим образом.
8-цианотетрацикло (4, 3,0, 02, Оз ) нонан (29 г) обрабатывают метилмагнийиодидом, полученным из магния 30 (6,0 r ) и иодистого метила (35,5 r).
Этот раствор охлаждают ниже 5 C на ледяной .бане и добавляют холодный раствор ледяной уксусной кислоты (25 мп) в воде (25 мл) каплями с пе- g5 ремешиванием и охлаждением. Температуру поддерживают не выше 15 С. К густой суспензии добавляют воду (150 мл) и перемешивание продолжают, пока твердые элементы не растворятся.
Органическую фазу отделяют, промывают три раза водой (50 мл), высушивают с использованием сульфата магния и фйльтруют. Толуол упаривают на роторном испарителе и оставшееся мас-gg ло перегоняют в вакууме. Получают смесь экэо- и эндо-8-ацетилтетрацнкло(3,4„3,0,0,О ) нонана, т.кип. 66 С/0,5 мм.
Указанное ацетильное производное М11 (16,2 г) растворяют в этаноле (60 мл), к раствору добавлякп хлоргидрат гидроксиламина (7.,6 г), безводный ацетат натрия (t2,3 г). Смесь нагревают с обратным холодильником и иебольши- Ы ми порциями добавляют воду, пока твердые частицы не растворятся окончательно. Кипячение продолжают в течение 21 ч, а затем раствор охлажда- ют на ледяной бане. Кристаллическое белое. твердое вещество отфильтровывают. Перекристаллизация из смеси. зтанола и воды (70:30) дает экзо-8-(1-оксиминозтил)тетрацикло(4,3,0,0 4, О )нонан, т.пл. 103-104"С. . Пример 4. 8-цианотетрацикло(4,3,0,0,О )нонан получают способом Холла (1960) ° Он представляет из себя смесь экзо- и эндо-изомеров, как показывает газожидкостная хроматография.
Изомеры разделяют газожидкостной хроматографией и получают чистый образец экзо-изомера. Однако эндоизомер получают только с 80Х-ной чистотой. Раздельное восстановление их в эфире при помощи алюмогидрида лития дает чистый экзо-8-аминометилтетрацикло(4,3,0,0 4,0 ) нонан, т.пл. хлоргидрата 270-271 С и 801ной чистоты эндо-изомер, т,пл. хлоргидрата 274-276" С.
Пример 5. Экзо-8-аминометил-эндо-8-метилтетрацикло (4, 3, О, О +, 0 > ) нонана гидрохлорид.
Экзо-8-циано-эндо-8-метилтетрацикло(4,3,0,0 4,0 )нонан (2,0 г) медл нно добавляют к суспензии алюмогидрида лития (О,б r) в диэтиловом эфире (25 мл). Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 16 ч.
Избыток восстанавливающего агента разрушают осторожным добавлением во-. ды. Белый осадок отфильтровывают, хорошо промывают эфиром, промывки и фильтрат объединяют, высушивают с использованием безводного поташа и обрабатывают избытком хлористого водорода, растворенного в эфире.
Получают экзо-8-аминометил-эндо-8метилтетрацикло(4 3 О 02,4 Оз т)нона на хлоргидрат, который после перекристаллизации из иэопропанола/этилацетата (25:75 o6/o6) имеет т.пл, 245-246 С. Получают 0,7 г целевого продукта (выход 26,97).
Эк э о-8-циа но-э ндо-8-мет илт етрацикла(4,3„0,0 О ) конан, используемый в качестве исходного материала, может быть получен способом Шраузера и P,Ãëîêíåðà. Для получения чистого материала необходима интенсивная очистка капнллярной хроматографией.
Гаэожидкостиая хроматография показала 95Х экэо-нитрнла, 57.. эндо-нитрида.
7 1156
Пример 6. Эндо-8-аминометил- .
-экэ о-8-метцлтетрацикло (4, 3, 0, 0, 0 i ) нонана гидрохлорид.
Эндо-8-циа но-эк з о-8-метилтетрацикло-(4,3,0,0 +,0 )нонан (80 . эндо-циано-иэомер, 500 мг} восстанавливают алюмогидридом лития (0,5 г) аналогично примеру 5. Получают эндо-8-аминометил-экэо-8-метилтетрацикло-{4,3,0,02,03 ) нонана хлоргидрат (80 эндоаминометнл, 20 экзо-аминометил), т.пл. 222 С. Получают 0,2 r целевого продукта (выход 31,9 ).
Эндо-нитриловый изомер, используемый в качестве исходного материала, получен следунзцим образом.
Бутиллитий (15,4 мл 1,43 10 М . раствора в тетрагидрофуране 0,022 M) медленно добавляют к раствору дииэопропиламина (2,22 r, 0,22 м) в сухом, тетрагидрофуране (10 мл) под азотом при 5-10 С и перемешивают в течение
15 мин. Этот раствор охлаждают до
-78 С и к нему добавляют 8-циано-тетрацикло(4,3,0,0,О ) нонан (3,045 г
0,022 М), растворенный в гексаметаноле (4„5 г). Смесь перемешивают 1 ч при -78 С. Раствор иодистого метила (3,55 г, 0,025 М) в сухом тетрагидрофуране (5 мл) добавляют каплями также при -78 С, смесь перемешивают о. 30 в течение 1,5 ч при этой температуре, а затем в течение 16 ч при комнатной температуре. Добавляют воду (20 мл), тетрагидрофуран упаривают, а оставшуюся смесь экстрагируют хлороформом (3 15 мл). Экстракт высушивают с использованием безводного сульфата магния, фильтруют, растворитель отгоняют. Остаток хроматографируют на силикагеле с толуолом в качестве элюента.40
Получают энцо-8-циано-экзо-8-метилтетрацикло(4,3,0,0 +,0 ) нонан (80 эндо-циано-изомера, 20 экзо-циано-.изомера по данным газожидкостной хроматографии), т. пл. 118-120 С/18 мм4
Пример 7. 8-(2-аминоэтил)тетрацикло(4,3,0,0,0 ) нонана гид1рохлорид.
8-цианометилтетрацикло(4,3,0,0, 0 .1) нонан (0,5 г) вочстанавливают алюмогидридом лития (0,5 г) в условиях, описанных в примере 5. Получают
8-(2-аминоэтил)тетрацикло (4,3,0,0", О )нанана хлоригидрат, т.пл. 252254 С. Получают 0,35 г: целевого 55 продукта (выход 55,8 ), 8-цианометилтетрацикло(4,3,0,0 4, 0> )конан, используемьй в качестве
591 8, исходного материала, получен следующим образом.
К раствору 8-цианотетрацикло(4,3, 0,0 +,0 }нонана (87 r) в четыреххлористом углероде (600 мл) добавляют пятихлористый фосфор (168 r).
Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 60 ч, охлаждают и выливают в смесь колотого льда и воды {1 л). Смесь перемешивают в течение 30 мин и отделяют органический слой. Его промывают 10Х-ным водным раствором карбоната натрия (200 мл) ° насыщенным соляным раствором (100 мл), а затем высушивают с использованием безводного карбоната калия. Фильтрат затем высушивают для удаления растворителя, а затем перегоняют для получения 8-циано-8-хлортетрацикло (4, 3,0,0,0 ) нонана, т.кип. 136140 С/20 мм, выход 8ЗЖ.
Полученный хлорнитрчл (13,45 г) растворяют в этаноле (60 мл), охлаж . дают до О С на льду и медленно добавляют раствор гидроокиси натрия (2,4 r} в воде (20 мл) с перемешиванием и охлаждением. Перекись водорода (27 мл 29 вес.Х/об раствора в воде) добавляют каплями и получают плотный белый осадок. Эту смесь перемешивают в течение 3 ч при О С, а затем 2 ч при комнатной температуре.
Белый осадок отфильтровывают и сохраняют. Фильтрат упаривают для удаления этанола, а водный остаток экстрагируют хлороформом (100 мл).
Органическую фазу высушивают, фильтруют и упаривают до получения белого твердого вещества. Это твердое вещество и белый осадок объединяют, перекристаллизовывают из этанола и получают 8-хлор-8-карбамоилтетра-цикло(4,3,0,0 +,0") конан, т. пл. 124-126 С.
Этот хлорамид (19,75 r) нагревают с обратным холодильником под азотом в смеси гидроокиси калия (16,8 г) и 11-пропанола (200 мл) в течение 40 мин. Пропанол выпаривают
1 а остаток распределяют между эфиром (100 мл) и водой (100 мл). Органическую фазу промывают насыщенным соляным раствором (50 ил),высушивают с использованием безводного поташа, фильтруют, растворитель упаривают.
Остаточное масло перегоняют под вакуумом до получения 8-оксотетрацикло, (4,3,0,0, О ) нонана, т.кип. 124130 С/29 мм..
9 1156
Гидрид натрия (2,4 г, промытый от масла) обрабатывают диметилсульфоксидом (100 мл) и подогревают под азотом до 75-80"С в течение 35 мин, Смесь затем охлаждают до комнатной температуры и каплями добавляют раст5 вор диэтилцианометилфосфоната (1?,7 r) в сухом тетрагидрофуране.
Смесь перемешивают в течение 30 мин.
Раствор указанного кетона (13,4 г) в смеси диметилсульфоксида,(100 мл) и тетрагидрофурана (100 мл), затем добавляют каплями и перемешивают в .течение 16 ч при комнатной температуре. Продукт выливают в воду (1000 мл1
15 н смесь экстрагируют эфиром (5-100 мл).
Объединенные экстракты промывают насыщенным соляным раствором, высушивают с. использованием карбоната калия, фильтруют и упаривают, При перегонке под вакуумом полу20 чают 8-цианометилентетрацикло (4, 3,0, 0,4, Оз ) нонан, т . кип. 138-140 С /
/18 мм.
Этот ненасьпценный нитрил (6, 17 r)
25 восстанавлив;;ют в атмосфере водорода при комнатной температуре и давлении в присутствии 5 вес.Z/âåñ палладия на угле (1,7 r) в растворе этанола (200 мл). Когда водород больше не абсорбируется, продукт отфильтровывают и растворитель упаривают для получения 8-цианометилтетрацикло(4,3,0, 0,0 )нонана, который анализируют масс/спектром, м/е=159, инфракрасным спектром и ЯИР-спектром, этот продукт 35 затем используют без дальнейшей очистки.
Пример 8. Энцо-8-{1-аминоэтил)тетрацикло(4,3,0,0,0 )нонана гидрохлорид. 40
К раствору эндо-8-(1-оксиминоэтил)-тетрацикло(4,3,0,0,0 )нонана
{1,0) в этаноле (50 мл) добавляют
5 вес.7/вес родий на окиси алюминия (0,3 г).Смеси гидрируют в автоклаве 45 при 60-65 С в течение 24 ч при давлении 50 атм водорода, фильтрация продукта с последующим осторожным выпариванием растворителя дает эндо-8-(1-аминоэтил)тетрацикла(4ь3 Оэ02 4эОЭ ") но- 50 нан в виде бледно-желтого масла.Хлоргидрат, т.пл. 265-266,5 С, при перекристаллизации из изопропанола.,получают .путем добавления эфирного раствора хлористого водорода к эфирному раст- 55 вору свободного основания.
Эндо-8-(1-оксиминоэтил)тетрацикло (4, 3,0,0,0 ")нонан, используемый
591 10 в качестве исхолного материала, получен с.педующим образом.
После получения экзо-8-(1-оксиминоэтил)тетрацикло(4,3,0,0 -,0 ) нонана аналогично примеру 3 остаются реакционные жидкости, которые содержат и экзо- и эндо-оксииэомеры. Упаривание этанола под вакуумом из раствора приводит к осаждению смешанных изомеров в виде липкого твердого элемента. Пробы этого материала (по
2,0 r каждый) подавались для сухой капиллярной хроматографии на 1,0 кг силикагеля (кизельгель 60,0; 0,630,2 мм размер частиц) с использованием смеси толуола и этилацетата в соотношении 9:I (вес/вес). Положение разделенных материалов на колонке определяют отбором проб, после чего следует тонкослойная хроматография.
Зоны колонки, содержащие чистый экзо- и чистый эндо-изомеры, вырезались и промывались отдельно этилацетатом. Выпаривание элюатов дает общий выход чистых изомеров приблизительно 1,2 r но действительный выход экзо- составляет от 0,8-0,2 r а эндо- 0,4-1,0 r в зависимости от соотношения изомеров образца, подаваемого в колонку.
После разделения укаэанным способом экзо-изомер имеет т.пл. 103.
103 С, а эндо-изомер — 80-83 С.
Пример 9. Экзо-8-(1-аминоэтил)тетрацикло-(4,3,0,0 +,0 )нонана хлоргидрат, получаемый по примеру 3, является смесью двух диастереоизомеров, каждый из которых в свою очередь является смесью двух оптических иэомеров. То же самое касается и эндо-изомера примера 8. Эти диастереоизомеры определяются как отдельные пятна на тонкослойной хроматографии на силикагелевых пластинах с использованием какой-либо из двух систем растворителя. Пятна можно увидеть в системе растворителя 1 либо при помощи иодового лара илн распрыскивания раствора церийаммоний нитрата в серной кислоте, после чего следует нагревание, либо в системе 2 при помощи 1 вес.X/îá нингидрида в бутаноле. Система 1: толуол/ r
/этанол/этилацетат/аммиак (уд, вес.
О, 880) 6: 4: 2: О, 25 об/об. Система
2: ацетон/аммиак (уд.вес.0,880) 40:
:0,5 об/об (см.табл.2).
1156 а б л и ц G 2
1 Система
Система
Показатели R
Верхнее экзо-лятно 0,48
Нижнее экзо-пятно 0,43
Верхнее эндо-пятно 0,48
0,60
0,54
0,51
Нижнее эндо-пятно 0,40
0,40
20
Таблица 3
Химический
Показатели сдвиг от тетраметилсилана, мил.доли 35
Верхнее экзо-пятно
51 9
Нижнее экзо-пятно
52,80
52,82
53,6
Верхнее эндо-пятно
Нижнее эндо-пятно
Разделение экзо-диастереомеров достигают следующим образом. 50
К раствору экзо-8-.(1-аминоэтил)-тетрацикло (4, 3,0, О, О ) нонана (32,2 г) в сухом эфире (250 мл) добавляют раствор L -(+)- винной кислоты (7,16 r 0,25 моль) в смеси этано-55 ла (100 мл) и сухого эфира (300 мл).
Осадок винной соли отфильтровывают, промывают сухим эфиром и подвергают
4 диастереомера могут также определяться по спектрам С -ЯИР резонан»з са от хирального атома боковой цепи, в то время как определение относительного содержания каждого изомера можно определить по высоте пика. Химические показатели сдвига каждого диастререомера меняются в зависимости от концентрации и типа соли, но
25 смесь основных хлоргидратов, полученная в примере 4, имеет следующие показатели см.табл.3).
591 12 фракциональной перекрис.таллизации из этанола пять раз. Конечным продуктом являлся чистый тартрат верхнего экзо-пятна (9, О г), который превращают через основание в хлоргидрат (4,3 r), т.пл. которого составляет
257-259"С.
Хотя не ожидалось, что этим способом можно осуществить отделение одного из оптически активных изомеров деастереомера, указанный продукт показал нулевое вращение при проверке в поляриметре, а спектр ЯИР с использованием оптически активного реагента показал, что эта смесь равных количеств оптических изомеров.
Добавление дальнейшей порции
L=(+)-винной кислоты (7, 15 г, 0,25 моль) к жидкости из первого осаждения приводит к получениюлипкого осадка, который после двух фракциональных перекристаллизаций из этанола с последующей конверсией до хлоргидрата дает чистый материал нижнего экзо-пятка. Перекристаллизация этого хлора хлоргидрата из этанола дает очень малый выход первой фракции (О, f2 r) и остаток (1,74 г).
Первая фракция оказалась оптически акт вной(с ) = +22, а согласно
2О о спектру ЯМР с оптически активным реагентом является чистым оптическим изомером.
Отделение нижнего экзо-пятна достигают путем переведения амина в основание из всех жидкостей, фракциональной перекристаллизации (всего
13,3 г), растворения в сухом эфире (100 мл) и добавления раствора 0-(-)-миндальной кислоты (6,2 г, 0,25 моль) в смеси этанола (10 мл) и сухого эфира (50 мп). Осажденную соль (14,6 г) фракционно кристаллизуют дважды из этилацетата, переводят в хлоргидрат и перекристаллизовывают из этанола до получения чистого хлоргидрата нижнего экзо-пятна (3,0 r), т.пл. 266-268 С. Этот продукт имеет нулевое вращение и представляет из себя, согласно ЯМР с использованием оптически активного реагента, смесь оптических изомеров.
Аналогичньй способ отделения применяют с использованием эндо-аминового основания (10,8 r), получаемого в примере 8. Ь-{+)-тартрат фракционально кристаллизуют пять раз из изопропанола до получения чистого тартрата моногидрата верхнего пятна
13,, 115659 (1,16 г) ° т.пл. 195-205 С. Остатки переводят обратно в основание. D-(-}манделат получают в эфире, содержащем немного спирта. Было получено три фракции. Фракцию 1 фракционально кристаллизуют 3 раза из этилацетата до получения чистого манделата верхнего эндо-пятна, т.пл. 191192 С (О, 38. г), в то время как фракции 2 и 3 соединяют и перекристалли- 10 зовывают 4 раза из этилацетата до получения чистого манделата нижнего эндо-пятна (1, 1 г), т.пл. 166-167 С .
Пример 10. Раствор экзо-8-(1-оксиминоэтил)тетрацикло(4,3,0,0 i .15
О ) нонана, полученного как в последней части примера 3, в смеси пиридина (35 мл) и уксусного ангидрида (30 мл) нагревают с обратным холодильником в течение 48 ч. Раствори- 20 тель удаляют под вакуумом, а черный осадок взбалтывают с эфиром (порции
3 50 мл). Фильтрацией удаляют черное твердое вещество, а фильтрат экстрагируют водным 10 вес.Е/об раствором 2 бикарбоната натрия (3 20 мл). Органическую фазу высушивают и упаривают, что дает коричневое масло (4,3 r) которое затем хроматографируют на си.ликагеле с использованием системы то-30 луол/эфир (9: 1 об/об) в качестве элюента. Фракции, содержащие материал пятна с Rf=0,36 на тонкослойных пластинах силикагеля, которые проявляют в системе толуол/этилацетат (9:
: 1 об/об), объединяют и упаривают, оставшееся масло кристаллизуют из петролейного эфира, т.кип. 40-60 С.
Таким образом получают шероховатое твердое вещество (0,6 18 r), которое 40 затем сублимируют до получения Е-изомера-8-(1-диацетиламиио}-этилендентетрацикло(4,3,0,0 >4,0 )нонана (0,60 г) (конфигурация, интерпретированная с помощью ЯМГ). Упаривание петролейного эфира из маточного раствора дает бесцветное масло, которое перегоняют под вакуумом для получения ж-изомера 8-(1-диацетиламино)этилидентетрацикло(4,3,0,0 4,0 )нонана, т. пл. 65-75 С (0,05 мм) (концентрация, ийтерпретированная с помощью
ЯИР).
Я-изомер (377 мг) гидрируют присутствии окиси платины (100 мг) в 55 этаноле (15 мл) при комнатной температуре и давлении. Когда теоретичеСкое Количество водорода абсорбиру14
Таблица 4
f0
СБСн
МНг
Абсолютная конфигурация
Диастереоизомер
Верхнее экзо-пятно
8 $, 10 S и 8 R 10 R
Нижнее экзо пятно
8 S 10 К и 8 R 10 $
Верхнее зндо пятно
8К 1ОКи8$, 10$
Нижнее э ндо-пят но
8R 10Ки8$, 10R ется реакционную смесь фильтруют и растворитель упаривают, оставляя бесцветную смолу. Экстрагирование ее кипящим петролейным эфиром (т.кип. 6080 С) и охлаждение экстрактов дают аморфное белое твердое вещество, т.пл. 112-128 С, которое является 8-(1-ацетиламиноэкил}тетрацикло(4,3,0, 024,0 7}нонаном.
Этот продукт подвергают гидролизу концентрированным спиртовым едким кали с охлаждением в течение 36 ч. После упаривания этанола, разбавления водой, экстрагирования эфиром, высушивания и осаждения эфирным раствором хлористого водорода получают 8-(1-:, -аминоэтил)тетрацикло(4,3,0,02 4,0З 7),.
1 нонана хлоргидрат. Этот продукт по данным тонкослойной хроматографии является смесью диастереомера нижнего экзо-пятна и диастереомера нижнего эндо-пятна. Получают 0,05 г целевого продукта (выход 1,1X}.
Этот продукт получен цис-гидрированием двойной связи известной стереохимии, позволяет интерпретировать абсолютную конфигурацию этих двух диастереоизомеров. Это в свою очередь позволяет интерпретацию абсолютной конфигурации диастереоизомеров верхнего экзо-пятна и верхнего эндо-пят-. на. Эти интерпретации представлены в табл.4.
15 1156591 16
Пример 11. Экзо — 8-(1-аминоэтил)тетрацикло(4,3,0,02 „0 ) нонана гидрохлорид.
Обрабатывают раствор 1,77 г экэо-8-(1-оксиминоэтил)-тетрацикло(4,3, 0,0,0")-нонана и 4,76 r гексагидрата. хлорида кобальта в 100 мл этанола при комнатной температуре 3,8 г боргидрида натрия маленькими порциями, при перемешивании и охлаждении, чтобы сохранить температуру ниже
20 С. После окончания прибавления смесь 2 ч перемешивают при комнатной температуре, затем 2 ч кипятят с обратным холодильником. Черную суспензию фильтруют через диатомитовую землю и бесцветный фильтрат упаривают в вакууме, остается липкое твердое вещество. Его распределяют между эфиром и 2 Н раствором гидроокиси натрия. Органическую фазу промывают насыщенным рассолом, сушат над безводным карбонатом калия, фильтруют и обрабатывают избытком эфирного раствора хлористого водорода. Полученный 25 белый осадок солянокислого экзо-8 †(1-аминоэтил)-тетрацикло(4,3,0,024,0Э )—
-нонана отфильтровывают, промывают эфиром и сушат. По данным тонкослойной хроматографии он является чистым, имеет величины Rf для двух экзо-диастереоизомеров, как приведенные в примере. б. Получают 1,59 r целевого продукта (выход 79,0 ).
Пример 12. Экзо-8-(1-амино35 этил) тет рацикло (4, 3,0, 0, 0 7) нонана гидрохлорид.
Используют методику и загрузку примера 7 с тем исключением, что гексагидрат хлорида кобальта заменяют гексагидратом хлорида никеля и всю реакцию проводят в течение 20 ч при комнатной температуре. Первоначальный солянокислый продукт. показывает следы примесей, которые удаляют кристаллизацией из изопропанола. Этот конечный продукт является чистым по данным тонкослойной хроматографии и имеет т.пл. 266-267 С.
p,нтивирусное действие предлагаемых S0 соединений изучают следующим образом.
Трахею 3-месячного хорька вскрывают с использованием асептических методов и разрезают оперечно на коль- 55 ца ткани, Получают 30-40 колец из одной трахеи. Каждое кольцо помещают в стерильную стеклянную испытательную трубку (9 ° 1 см) и погружают в 0 5 мл стерильной поддерживающей среды, содержащей соответствующую концентрацию испытываемого соединения. Конечные концентрации соединения составляют 45, 9, 1,8, 0 4, 0 08 мкг/мл и ноль. Для каждой концентрации используют три трубки. Трубки выдерживают с в течении суток при 37 С в опоре, которая мягко вращается, чтобы погружать каждое трахейное кольцо в питательную среду.
На следующее утро каждое кольцо осматривают под микроскопом, чтобы определить приблизительно, какое количество ресничек на внутреннем люмене кольца еще колеблется. Результат следующий: 4=100 ; 3=75 ; 2=50 ; 1=
=25, O=o .
Осмотр показывает, является ли соединение однотоксичным по отношению .к ресничатому эпителию. Затем трубку заражают путем добавления стандартизированного количества вируса гриппа и выдерживают в течение 2 ч при 37"С.
В течение этого времени вирус адсорбируется на клетках и проникает в клетки каждого кольца и начинается
t про;есс заражения. После 2 ч содержащие вирус жидкости сливаются,.кольца осторожно промывают свежей средой, а затем добавляется 0,5 мп среды, содержащее соединение. Затем нх выдерживают при 37 С, как и предыдущие, до последующего утра, когда происходит второй осмотр ресничатого эпителия. Результаты проверки незаряжен-, ной части показывают токсичность препарата, результаты проверки зараженной части без препарата показывают степень повреждения, вызванного вирусом, и результаты проверки обработки препаратом показывают степень защищенности. Среда удаляется из каждой-трубки и объединяется со средой из двух других трубок идентичной концентрации препарата. Объединенные пробы обрабатывают 0,3 мл стерильного бычьего альбумина плазмы, замораживаются при температуре — 20 С и хранят для дальнейшего титрования вируса. Свежий раствор препарата добавляют к каждому комплекту трех трубок и продолжают выдер кивание. указанный процесс повторяют еще три раза, так что из каждого раствора препарата и контрольных частей полу чается всего четыре порции среды.
11565
Таблица 5
Токсичность
Токсичная
Пример, 1Ф
Соединение
Активность
Минимальная
Минимальная акти вная концентрация, мк г/мл концентра цияя, мкг/мл
) 44
0,36
>110
744
0,36
Образцы замороженной среды оттаивают до 37 С и вирус, который они со- . держат, титруют в первичные почечные клетки теленка с использованием уже известного количественного способа гемоадсорбирования H. Б. Финтер. Поэтому является возможным сравнить и визуально и количественно действие испытываемого соединения на рост вируса гриппа в кусочках трахейного 10 ресничатого эпителия.
Все соединения, описанные в примерах, являются активными в этом тексте против вирусов гриппа A и А,„, а некоторые соединения являются также активными гротив вируса гриппа
А,. Таким образом, все соединения являются активными в этом испытании против вируса гриппа А z HK в концентрации 5 мкг/мл или ниже и имеют соотношение токсичность (активность от 9 до более, чем 550). Известное соединение 8-аминотетрацикло(4,3,0, 0,0 )нонан не является активным относительно вируса гриппа А2НК при 25 концентрации 50 мкг/мл (см.табл. 1).
Испытание вируса гриппа на мышах проводят следующим образом.
Две группы по 10 свободных от патогена самцов белых мышей весом 2022 r каждый, стоматически вводят испытываемое соединение, одной группе 125 мг/кг (2,5 мг/мышь), а другой группе 50 мг/кг (1,0 мг/мышь). Третья группа из 10 мышей не обрабатыва35 ется соединением и используется в качестве контрольной группы. Спустя
91 18 два часа мьппей помещают индивидуально в аэрозольную камеру и в течение
0,5 ч подвергают аэроэолированию вирусом гриппа. Час спустя после заражения, а затем 4 ч спустя после заражения мьш и в первых группах получают стоматически дозу испытуемого вещества. На следующий день те же мыши получают испытуемое соединение в
9 ч утра, в 13 ч и в 17 ч. Спустя
48 ч после заражения мышей убивают.; а легкие вырезают. Легкие иэ кажцой отдельной группы соединяют в две группы по пять, и после осмотра повреждений на поверхности легких, каждая иэ
6 групп гомогенизируется в смесителе со стерильным физиологическим раствором Ханкса. Гомс генаты центрифугируют для удаления обрезков ткани, а расплывшуюся часть помещают в бутылку и раэ бавляют 9 частями бычьего альбумина плазмы. Разбавленные всплывшие части затем хранят при температуре—
20 С до тех пор,пока концентрация вируса может быть анализирована количественным способом гемоадсорбции, . описанным выше. Таким образом, рост ,вируса в легких животных, обработанных препаратом, сравнивают с ростом вируса в мышах, не обработанных пре-. паратом.
В мьш ах, получивших описываемые соединения, не замечается явных признаков токсичности. Терапевтические свойства предлагаемых соединений представлены в табл.5.
1156591
Продолжение табл. 5
Токсичная
Соедине ииерв
)110
0,36
P- Н Н2
)63
25 (0,36
0,36
63
0,36
eHRCHRHН2 7
25
0,36
Р, КН2
Нет токсичНет актив-. ности при
50 мкг/мл ности при
50 мкг/ил
Составитель Ю. Хропов
Редактор А.Долинич Техред Ж.Кастелевич Корректор Г.Р
Заказ 3202/57 Тираж 384 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР но делам изобретений и открытий
113035, Йосква, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
Филиал ППП "Патент", r.ужгород, ул.Проектная, 4
Я,... СИ 2
I +3
К СИ 2 Н2 .% е ° е ©Hg ИН2 .I Н3
Минимальная активная концентрация, икг/мл
Минимальная концентрация, мкг/мя
