Способ выявления фракции хондроитинсерных кислот
СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ФРАКЦИИ ХОНДРОИТИНСЕРНЫХ КИСЛОТ путем электрофоретического разделения гликозаминогликанов в полиакриламидном геле с последующим окрашиванием, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени, прокрашивание электрофореграмм проводят в 0,010 ,2 н. растворе риванола в течение 40-10 с соответственно.
СОЮЭ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
<<>1 С 01. N 33/48
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР (2 I ) 3655412/28-13 (22) 11. 08. 83 (4б) 30.05.85. Бюл. № 20 (72) П.И.Исаев (7 1) Волгоградский государственный медицинский институт (53) 543.545(088.8) (56) Ривкина В.Б., Чукаева Д.Г., Цимаркина Г.Е. Злектрофоретический анализ гликозаминогликанов мочи в полиакриламидном геле. "Лаб. дело, 1974, № 10, с. 597-600 (прототип).
„„SU„„3 8931 (54) (57) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ФРАКЦИИ
ХОНДРОИТИНСЕРНЫХ КИСЛОТ путем электрофоретического разделения гликозаминогликанов в полиакриламидном геле с последующим окрашиванием, î T л и, ч а ю шийся тем, что, с целью сокращения времени, прокрашивание электрофореграмм проводят в 0,010,2 н. растворе риванола в течение
40-10 с соответственно.
Составитель Н. Гуляева
Редактор E.Копча Техред С.йовжий КорректорА.Зимокосов
Заказ 3579/44 Тираж 897 . Подписное
ВНЯИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä, ул.Проектная, 4
1 :11589
Изобретение относится к медицинской химии и касается электрофоретического исследования гликозаминогликанов в биологических жидкостях в клинике, а также в других областях народного хозяйства, где применим аналитический электрофорез в геле.
Цель изобретения — сокращение времени.
П р и и е р 1. Выявление фракции 10 хондроитинсерных кислот мочи. Приме-. няют отечественный прибор для электрофореэа ВЭФА-1. В качестве, разделяющего носителя берут 103-ный полиакриламидный гель, приготовленный по сле- 15 дующей прописи: раствор акриламида (акриламид 28 г, бисакриламид 0,735 г, вода до 100 ) — 3 ч; трие -соляный буфер рН 8,9 (трис 36,6 г; 1 í. НС0
48 мл; ТЕМЕД 0,23 мл, дист. вода 20 до 100 мл) — 1 ч; вода — 1 ч; персульфат аммония 0,14Х-ный — 4 ч. Полйме. ризацию гелей проводят под лампой дневного света в течение 30-40 мин в стеклянных трубках размером 100 мл 25 х 5 ..мм, Вместо разделяющего геля берут сефадекс G-200 по 5 мг на трубку.
Сверху наслаивают 0,3 мл нативной мочи, а на нее электродный трис -глициновый буфер рН 8,3 с ионной силой
0,02. Состав буфера: трис 0,75 г; глицин 3,6 г; дист. вода до 1000 мл.
Электрофорез проводят в течение 1,52 ч при силе тока 2-2,5 мА на одну трубку или по достижении пигментной полоски мочи 20 мм от нижнего края трубки. После окончания разделения столбики геля извлекают из трубок
31 2 и помещают в 0,01 н. раствор риванола
1 на 40 с, после чего появляется белое окрашивание в том месте, где находится фракция хондроитинсерных кислот, примерно 10-15 мм от нижнего края геля. Другие гликозаминогликаны не определяются.
П р и и е р 2. Выявление фракции хондроитинсерных кислот в лекарственном препарате "Румалон" (СФРЮ) Применяют отечественный прибор для электрофореза ПЭФА-1. В качестве разделяюще го носителя берут 10Х-ный поли а к рил-. амидный гель, приготовленный по следующей прописи: раствор акриламида (акриламид 28 г, бисакриламид 0,735 r, вода до 100 мл) — 3 части; трис -соляный буфер рН 8,9 (трис Зб,б г; 1 н.
HC(48; ТЕИЕД 0,23 мл; дист. вода до 100 мл) — 1 ч.; вода — 1 ч, персульфат аммония 0,143-ный — 4 ч. Полимеризацию гелей проводят под лампой дневного света в течение 3040 мин в стеклянных трубках размером
100х5 мм. Вместо разделяющего геля берут сефадекс С-200 .5 мг на трубку.
Сверху наслаивают 0,01-0,02 мл препарата "Румалон" (СФРЮ). Далее сверху наслаивают трмс -глициновый буфер рй
8,3 с ионной силой 0,02 и в этом же буфере проводят электрофорез е течение 1,5-2 ч при силе тока 2-2,5 мА на одну трубку. Затем гели извлекают из трубок и помещают в 0,1 н. раствор риванола на 30 с, после чего появляется белое окрашивание.хондроитинсерных кислот в 10 мм от нижнего края геля.
