Штамм микроскопического гриба @ @ 35219-продуцент фенолаз

 

Штамм микроскопического гриба Mycelia sterilia ИБР 35219 (коллекция Центрального Музея промьшшенных микроорганизмов института ВНИИгенетика коллекционный номер ЦМПМ F-236) - продуцент фенолаз. СО

СОЮЗ СО8ЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

П9) О I ) ГОСУДАРСТНЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3609333/28-13 (22) 17.06.83 (46) 15.06.85. Бюл. N 22 (72) С.В. Дурмишидзе, Г.Н. Пруидзе, Л.Л. Квачадэе и P.Â. Зухбая (71) Институт биохимии растений

АН ГССР (53) 577. 15 (088.8) (56) Зухбая P.Â., Прундзе Г.Н.

Фенолазы микромицетов и перспективы их использования в чайной промьппленности. — Тезисы докладов республиканской научно-технической конференции. Улучшение качества чая и выработка новых видов чайной продукции (21-26 ноября 1982 г. Сухуми). Тбилиси, 1982, с. 3 1-32.

2. Зухбая P,Â. и др. Селекция микроскопических грибов, продуцентов фенолаз. Сообщения АН СССР, 108, У 1, 1982, Биохимия.

4(53> С 12 М 9/02 С 12 N 1/14 // (C 12 N 9/02; С 12 R 1:645) (54) ШТАММ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ГРИБА

МУСЕ1.ХА STERILIA ИБР 35219 - ПРОДУЦЕНТ ФЕНОЛАЗ. (57) Штамм микроскопического гриба

NyceIia steriIia ИБР 35219 (коллекция Центрального Иузея промьпплен ных микроорганизмов института

"ВНИИгенетика" коллекционный номер

ЦМПМ F-235) — продуцент фенолаз.

1161549 2

ВЯИИПН Зайаз 3938/31 Тираа 525 Подаисаае

Изобретение относится к микробиологической промышленности, представляет собой новый штамм, используемый для получения фермента — фенолазы, который может быть применен для интенсификации технологических процессов при переработке чая в ! производстве сухих и жидких концен-,; тратов чая. s, Способностью биосинтеза фенолаз 10 обладают многие микроскопические грибы. Однако они в основном катали- .. зируют реакции гидроксилирования монофенолов и окисления п-фенолов, не каталиэируя окисление о-дифенолов. 15

Предлагаемый штамм Nyceria steriTxa ИБР 35219 был выделен из микрофлоры чайного растения.

Данный штамм характеризуется аспорагенностью при выращивании иа 2р агаризованных средах и при глубинном культивировании, что исключает возможность загрязнения среды его спорамиe

Штамм имеет следующие морфологические и физиологические характеристики. Растет хорошо на средах:

Чапека, Сабура, чайном, картофельноглюкозном и сусло"агаре,а также на естественных питательных субстратах.

На чайном агаре хорошо развивается воздушный мицелий серовато-бело- го цвета, рыхло-войлочный, высоко поднимающийся на поверхность среды.

Центр колоний не рыхлый, приземистый. Строма не окрашена, гифы трех типов: толстые — до 10 мкм, густо гранулированные утолщенные — до

5мкм, слегка гранулированные; тонкие с мелкими каплями жира и митохроматина. Хламидоспоры отсутствуют, линейный рост колоний на сусло-агаре по дням: 3-й день — 29 мм, 5-й день — 48 мм, 7-й день — 72 мм, 10-й день — 91,5 мм.

Отношение к углеводам: лучше всех усваивает глюкозу, сахароэу., крахмал, в меньшей степени фруктозу и лактозу. Из источников азота хорошо усваивает аммонийные соли, (NH4) SO н (NH4) НРО4 Биосинтезу фенолаэ способствуют ионы микроэлементов меди и молибдена. Итамм хорошо растет в широких пределах рН вЂ” от 3,5 до 6,8.

Оптимальной температурой роста является 28+2 С.

Пример. Для получения фенолаз используется водно-минеральная среда с чайным экстрактам в качестве индуктора. Посевным материалом служит 48-часовая культура штамма, выращенная глубинным спо собом, на среде следующего состава,X: глюкоза 3, (NHö) SO 0,5;

NgSO4 7H 0 0 25; 1 Н Р04 Oð5; Àpo> жевой экстракт 1,0 САМБО„ 5Н О 0,27, 4)ь Мо Ом ° 4НтО 0,009.

Культйвйрование происходит при

28 + 2 С на качалке, делающей

210 об/мин, Питательной средой для ферментации служит среда следующего состава,X: глюкоза 5, (NH4), SO4 0,5, HgSO4 ° 7Н. О 0,25 KHgPOq 1,0, чайный экстракт 0,2; Со80 5Н О 0,?7; (ИН ) Ио О ° 4Н, О 0,009. Культивирование проводят в тех же условиях в течение 42 ч.

Активность биосинтезируемой фенолаэы определяют следующим образом.

Реакционная смесь содержит

0,25 мл фермента, 0,25 мл дистиллированной воды, 0,07 N пирогалолл или 0,27.-ный чайный танин в 2 мл

0,1 И цитрат-фосфатного буфера рН 5,8. Смесь инкубируют на термостатируемой качалке (100 об/мин) в течение 1 ч. Через 1 ч снимают спектр поглощения образовавшегося окисленного субстрата, экстрагированного и-бутанолом при 430 нм длине волны. Активность фенолазы выражают в условных единицах (изме,нение спектра поглощения на 0,001 за 1 мин).

Активность продуцируемой штам- мой NyceIia steriXia ИБР 35219 фенолазы равняется от 100 до

170 аЕ мин 1 на 1 мг белка.