Способ выделения ингибитора трипсина
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (51)5 А 61 К 35/78
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ . Н ASTGPCH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ .
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР (21) 3617660/13 (22) 08,07.83 (46) 30.12.91. Бюл. tu 43 (71) центральный научно-исследовательский и проектно-технологический институт механизации и электрификации животноводства Южной зоны CCCP (j2) 10,ф.Новиков, Н.Н.Новиков, В.Е.Соколова, И.В.шаповал, Н.И.Пройдак, Ж.А.Любецкая, В.Н.Сухинин, Н.ф.Маслова и Н.В.Потапова (53) 542.978(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
М 962302, кл. С t2 N 9/50, 1982.
{54)(57) СПОСОБ ВЬЦЕЛЕНИЯ ИНГИБИТОРА ТРИПСИНА путем коагуляции сока вегетативной массы люцерны и афинной
Изобретение относится к биохимической промышленности и касается выделения ингибиторов протеиназ с высокой степенью чистоты, Цель изобретения - упрощение способа.
Пример. Люцерну в стадии бутонизации скашивают, измельчают, от- жимают сок, нагревают до 85 С. Скоагулированные белки осаждают центрифугированием, супернатант используют для биоспецифической хроматографии на трипсин-сефарозе.
Опыт проводят в колонке объемом
265 см (150N15)., Колонку с сорбентом заполняют порцией супернатанта
„„SU„„1162081
2 хроматографии супернатанта HB специфическом сорбенте, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве сорбента используют трипсин-сефарозу, сорбирсвание ингибитора трипсина проводят равными порциями супернатанта, соответствующими наружному объему сорбента в колонке, до насыщения сорбента ингибитором, .сорбент последовательно промывают водой до удаления пигментов, 0,12-0,15 M ацетатным буфером с рН 6,0-7,0 и 0,2-0,3 М хлористым натрием до полного элюирования неспецифически связанных белков и водой )1о полного удаления солей, затем д смывают ингибитор трипсина 0,070,08 M уксусной кислотой. (коричневого сока), равной 250 мл
9аю4 (наружный объем сорбента) .
Каждур. порцию выдерживают в колон- ф ке 180 с соответственно времени ф связывания ингибитора с трипсином. Ю
Всего используют 17 порций суперна- Я) танта общим объемом 4,2 л. Полноту насыщения трипсина ингибитором определяют в отдельном опыте. Пигменты удаляют 8 объемами воды, неспецифически связанные белки десорбцируют
1О объемами 0,15 М ацетатного буферного раствора с 0,3 И NaC1, рН 7. 4
)1есорбцию осуществляют 0,15 И ацетатным буферным раствором с 0,3 М
NaC1 и рН 7. NaC1 удаляют промывкой
6 объемами воды. Ингибируют, элюи- руют 0,08 М уксусной кислотой.
1162081
Техред М.Моргектал . Корректор Л.Пилипенко
Реда ктор Т. Вар га нова
° «ю ю
Заказ 4672 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
У Ю ФВ
Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðîä, ул.Гагарина, 101
Ия 4,2 л супернатанта получают
53 мг ингибитора трипсина, электрофоретически гомогенного.
Полученные препараты ингибитора нетоксичны..
Внутривенное введение препарата в дозах 50 мг, что является 20-кратной лечебной дозой, не выэнвало гибели крыс.
