Способ выделения триозида @ (25 @ )-фурост-5-ен-3 @ ,22 @ , 26 триола @ -26-0- @ - @ -глюкопиранозида

 

СПОСОБ ВЬЩЕЛЁНИЯ ТРИОЗИДА

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

4(5)) С 07 J 71/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ОН

0 G1c

КИа @1С-0

G1c (21) 3633140/23-04 (22) 06.07.83 (46) 23.06.85. Бюл. Р 23 (72) П.К.Кинтя, С.А.Швец, В.А.Наук и В.Ф.Калистру (71) Отдел генетики растений АН Мол» давской ССР и Институт зоологии и физиологии АН Молдавской ССР (53) 547.689.607 (038.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

Р 722121, кл. С 07 3 71/00, С 07 Н 15/24.

I где Glc — глюкоза, Rha — рамноза, о т л и ч а ю щ и й. с я тем, что семена баклажанов (Solanum melangena L.) подвергают экстрак„„SU„, 1162812 А

2. Владимиров Ю.А., Аргаков А И .

Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М., "Наука", 1972, с. 241-243.

3, Кононов В.Н., Голышев П.А.

Хачапуридзе Э.Л. Среда для замораживания спермы хряка. — "Свиноводство"

1975, 9 11, с. 26-28. (54)(57) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ РИ03ИДА ((25R)-фУРОСТ-.5-EH-3ф,224,2б тРИОЛА -26-0- 1-D-ГПЮКОПИРАНОЗИДА общей формулы ции смесью хлороформа и метанола в соотношении 2:1 с последующей хроматографией экстракта дистиллированнойводой на сефадексе G-50.

1162817 о д, 40

Изобретение относится к способу получения нового природного гликозида — триоэида ((252)-фурост-5-енгде Glc — глюкоза, Rha — рамноза.

Цель изобретения — способ выделения нового природного стероидного

20 гликозида — триозида ((25R) -фурост-5-ен-3р,224,26 триола)-26-0 †-D-глюкопиранозида, обладающего более выраженными антиоксидантными свойствами в процессе перекисного окисле- 25 ния липидов при консервации семени хряков-производителей.

Цель достигается тем, что согласно способу семена баклажанов (Solanum melangena L.) подвергают экст30 ракции смесью хлороформа и метанола в соотношении 2:i с последующей хроматографией экстракта дистиллированной водой на сефадексе G-50.

Выделенный целевой продукт контролируют в тонком слое силикагеля ТХС в системе хлороформ-метанол-вода

65:35:10 нижний слой Rf = 0,26.

Полученное вещество — порошок белого цвета с т.пл. 179-180 С, (о ) - 75 (с = 1,0, вода). Растворим в воде, метаноле, пиридине, нерастворим в серном эфире, хлороформе, ацетоне. Препарат не гигроскопичен, устойчив при хранении. В ИКспектре присутствуют полосы поглоще45 ния 3400 см широкая полоса, 900 см широкая полоса. Строение вещества формулы I доказано методами полного и частичного гидролиэа, ферментативного расщепления, перйодатного окис50 ления, метилирования и изучения полученных продуктов с помощью БХ-, ТСХ-, ГЖХ-, ИК-спектроскопии и массспектрометрии.

При полном кислотном гидролизе выделен и идентифицирован стероидный агликон — .диосгенин с t пл. 206-.

208 С, f<) 1 — 120 (с = 1 О, СНС15 ) .

-Зр,22о,26 триола1-26-О-p-D-глюкопиранозида, обладающего антиоксидатными свойствами, общей формулы

ИК-спектр 3400, 980, 920, 890, 680 см-", И 414 у.е., Rf = 0,45 в системе хлористый метилен-ацетон 49:1 ТСХ со свидетелем. В олигосахаридной части после гидролиза в виде производных ацетатов альдононитрилов методом

ГЖХ обнаруживают смесь D-глюкозы и L-рамнозы в соотношении 3:1.

Ферментативное расщепление 1-глю коэидазой проводит к триоэиду диосгенина, состоящему из D-глюкозы и

L-рамнозы (2:1). Последовательность присоединения моносахаридных остатков определяют с помощью частичного кислотного гидролиза 17.-ной

Н ЯО в метаноле, получая при этом три прогенина. При гидролизе монозида в моносахаридной части обнаружена одна молекула D-глюкозы, в биозиде — две молекулы D-глюкозы, а углеводная цепь триоэида состоит из смеси D-глюкозы и L-рамноэы в со отношении 2:1.

После метилирования прогенинов и последующего метанолиэа полученных перметильных производных метилгликозиды идентифицируют с помощью

ГЖХ. Обнаружены и идентифицированы следующие моносахаридные производные: для монозида — g и Э"метил-2,3,4,6-тетра-О-метил-0-глюкопиранозид, биозида — о и я-метил-2,3,4,6

-тетра-О-метил-D-глюкопиранозид и

Ы и р-метил-3,4,6-три-О-метил-глюкопиранозид, триоэида — g и я-метил-2,3,4-три-О-метил-L-рамнопираноэид, Ы,р-метил-2,3,4,6-тетра-О-метил-D-глюкопиранозид и g,p-метил-4,6-ди-О-метил-D-глюкопиранозид (1:1:1).

При метилировании и метанолизе соединения формулы l также обнаружены

Ы,р-метил-2,3,4-три-О-метил-L-рамно 1162817 пиранозид, g . р-метил-2,3,4,6-тетра-О-метил-D-глюкопиранозид и о ф-метил-4,б-ди-О-метил-D-глюкопиранозид (1:2:1).

Дополнительное подтверждение ре- 5 зультатов метилирования получают после перйодатного окисления гликозида формулы 7 и последующего кислотного гидролиза. При этом в гидролизате обнаружена только глюкоза. Конфигурацию гликозидных центров-опреде ляют по разности молекулярных вращений гликозида и его прогенинов.

Пример. 1 кг воздушно-сухих семян баклажанов (Solanum melangena L.) измельчают и экстрагируют смесью хлороформа и метанола в соотношении 2:1. Экстракт разбавляют водой, водно-метанольный слой отделяют в делительной воронке, концентрируют в вакууме, получая 36 г сухого остатка. 18 г сухого остаткананосят на колонку с сефадексом

G-5О, элюируют водой. Выделение целевого продукта контролируют в системе хлороформ-метанол-вода 65:35:10.

В результате трехкратного хроматографирования получают 2 r вещества формулы I, что составляет 0,4 от веса исходного сырья.

Об интенсивности развития перекисного окисления липидов (ПОЛ) судят по количеству продукта — малонового диальдегида (ИДА), который выражают в ммолях на 1 кг белка семени хря- З5 ка, с использованием молярного коэф-, фициента экстинции, равного

1,56 10э N " "с ь и опРеделЯют по ме.— тоду 2 ), В качестве основной среды для разбавления и замораживания се- 40 г белка, при замораживанииоттаивании

Виж-II — декстран контроль

Oь083+0 ° 001 Оь079 0ь003 Оь097+Oь004

Виж-II -декстран— структурный аналог

0,075+0,001 0,072 0,003 0,086+0,003

0,069+0, 001 0,066+0, 003 О, 071+0,003

Виж-II — декстран— триоз щ ((25R)-фурост-5-ен ь 3 рь 22Ы„26 триол)-26-О-а-D-глюкопиранозид мени хряков-производителей используют синтетическую среду по прописи

Кононова E3). Соединение формулы в составе указанной среды испытывается в концентрациях 0,001, 0,002 и 0,004 ., Оптимальная концентрация

О; 002 ..

В таблице приведены результаты действия триозида ((25R)-фурост-5-ен-Звь224,26 триола)-26-0-p-D-глюкопиранозида в концентрации 0,002Х на ПОЛ в семени хряка в сравнении со структурным аналогом — 3-Of-p-D-ксилопиранозил(1- 3)-О- 6-О-натрийсульфонато-в-D-галактопираноэил(1 ь4)-О-6-О-натрийсульфоната- -D-глюкопиранозил(! -ь 2) -О-6-О-натрийсульфонато-p-D-глюкопиранозил(1-ь 4)-0-6-0-натрийсульфонато-p-D-галактопираноэид 1)-25R-спиростан-2Ы,Ç ь15р-триолом в оптимальной концентрации 0,002Х.

Как видно из таблицы, при раэбав-лении семени хряка защитными средами, содержащими соединение формулы 1, наблюдается снижение уровня

ИДА, по сравнению с контрольной группой и со структурным аналогом во всех стадиях технологической обработки, особенно после замораживанияоттаивания, что указывает на выраженную антиоксидантную активность соединения общей формулы(Ц.

Таким образом, предлагаемым способом получают новое химическое соединение, присутствие которого в разбавляющей среде способствует ингибированию процесса перекисного окисления липидов при криоконсервации семени хряков-производителей.