Способ определения активности пероксидазы в биологических жидкостях
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПЕРОКСИДАЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ путем инкубации в фосфатном буфере с гваяколом и перекисью водорода с последующей регистрацией окрашенного продукта реакции, о т л и чающийся тем, что, с целью сокращения времени и упрощения определения , реакцию проводят на хроматографической бумаге, пропитанной последовательно смесью равных объемов буфера и цельного гваякола и смесью равных объемов биологической жидкостью с 3%-ной перекисью водорода при объемном соотношении этих смесей 1:1.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
4(51) С 01 И 33/48
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВЪ .;(21) 3567927/28-13 .,(22) 28.01 83
;(46) 23.06.85. Бюл, У 23
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTWI (72) P.Ä.Барабаш, Е.К.Ткаченко
I и Г.Н.Варава (71) Одесский научно-исследова .тельский институт стоматологии (53) 543.866 (088.8) (56) Левицкий А.П, Гукевич Е.К., Барабаш P.Ä. Определение пероксидазной активности в биологическом мате.риале. — "Укр.биохим.Ж.", 1979,,Р 3, т. 51, с. 289-292.
„„ЯО„„И 63267 (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПЕРОКСИДАЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ путем инкубации в фосфатном буфере с гваяколом и перекисью водорода с последующей регистрацией окрашенного продукта реакции, о т л й— ч а ю шийся тем, что, с целью сокращения времени и упрощения определения, реакцию проводят на хроматографической бумаге, пропитанной поI следовательно смесью равных объемов буфера и цельного гваякола и смесью равных объемов биологической жидкостью с ЗЖ-ной перекисью водорода при объемном соотношении этих смесей 1: 1.
1163267
Биологические
Цветовой Чистота Светлота тон (х) I цвета (у) цвета (р,7) жидкости
0 385
О, 429 Слюна
0,375
0,364
Сыворотка крови
Моча
О, 392
0,372
70,5
77,5
0,372
0,392
Молозиво
Молоко
0,364
0,375
77,5
60 5
Составитель Н.Гуляева
Техред Ж, Кас телевич
Редактор А. Сабо
Корректор И.Муска
Заказ 4100/45 Тираж 897 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4
Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии, и касается определения активности пероксидазы в биологических жидкостях экспрессметодом.
Целью изобретения является сакращение времени и упрощение определения °
Пример. Полоску хроматографической бумаги размером 1 7 см смачивают 0,,1 мл смеси растворов цельного перегнанного гваякола и
К:Na фосфатного буфера рН 7,6 в концентрации О., 1 моль/л 1: 1. Слюну пациента смешивают с равным объемом
37-ной перекиси водорода и 1 каплю этой смеси наносят на подготовленную полоску бумаги. Примерно через 40 с при комнатной температуре начинает развиваться окраска от светло-оранжевых до коричневых тонов, которую идентифицируют по соответствующим таблицам "Атласа цветов". По установленному номеру треугольной таблицы и цветового поля находят цифровые характеристики цвета (цветовой тор, чистота цвета, светлота цвета). При
25 С за 80 с полоска хроматографической бумаги окрасилась в оранжево-коричневый цвет, который идентифицировали по таблицам 3 и 15 "Атласа цветов". По установленному номеру треугольной таблицы (3 и 15) находят показатель цветового поля (4/4), а затем-по нему цифровые характеристики цвета (цветовой тон, чистота цвета, светлота 0 416, 0,382, 64 соответственно). При определении активности пероксндазы в слюне практически здоровых людей указанным способом цифровые показатели цветового поля находят в диапазоне 1/1-3/3
5 (цветовой тон 0,345-0,392, чистота цвета 0,346-0 375, светлого цвета (Ж) 86-70,5), у больных пародонтитом показатели цветового поля 3/310/10 (цветовой тон 0,392-0,546, 10 чистота цвета 0,375-0,389, светлота цвета. 70,5-37).
Использование предлагаемого способа сокращает время, необходимое на определение, а также обеспечивает упрощение способа. Кроме этого, предлагаемый способ положительно отличается от известного тем, что диапазон его показателей намного шире. Так, при работе с цельной слюной человека спектрофотометр не дает адекватных показателей вследствие его зашкаливания, в то время как заявляемый способ дает показа25 тели, пропорциональные увеличению концентрации фермента. В связи с тем, что при разведении фермента могут меняться его физико-химические свойства активность ероксидазы предпочтительнее определять в неразбавленных биологических жидкостях, например, в цельной слюне, Из приведенной таблицы видно, что слюна отличается от других биологических жидкостей человека значительно более высокой активностью пероксидазы, что делает этот объект предпочтительным при использовании предлагаемого способа.
