Способ подготовки биопсийного архивного материала из парафиновых блоков для электронно-микроскопического анализа
СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОПСЙЙНОГО АРХИВНОГО МАТЕРИАЛА ИЗ ПАРАФИНОВЫХ БЛОКОВ ДЛЯ ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОГО АНАЛИЗА, включающий депарафинизацию ксилолом или толуолом, проведение через серию растворов этанола понижающейся концентрации, осмирование, обезвоживание и заливку в эпоксидные смолы, отличающийся тем, что, с целью улучшения сохранности ультраструктур тканей, проведение материала через этанол осуществляют последовательно в 100%-ном растворе спирта 25-30 мин, в 96%-ном 10-15 мин, в 70%-ном 10-15 мин, дважды промывают материал в 8-10%-ном растворе сахарозы в течение IQ-15 мин, затем помещают материал в 2,4-2,5%-ный раствор глутаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2, повторно промывают раствором сахарозы, осмйруют в 0,9-1,1%-ном растворе четырехокиси осмия на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2 55-60 мин, вновь промывают указанным раствором сахарозы, а затем обезвоживание производят в укаS занных растворах этанола с повышением концентрации и в двух сменах абсолютно (Л го ацетона по 15 мин.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
4(51) G 01 N 1 28
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ I
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
RO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3681568/28-13 (22) 17.11.83 (46) 07.07.85. Бюл. № 25 (72) Т. В. Павлова, И. Б. Бухвалов и Н. Т. Райхлин (71) Всесоюзный научно-исследовательский центр по охране здоровья матери и ребенка (53) 615.475 (088.8) (56) Sohannesen S. Ч. Use of paraffin material for elektron microscopy. Pathology dunal, part 2, р. 189 — 224. (54) (57) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОПСИЙНОГО АРХИВНОГО МАТЕРИАЛА
ИЗ ПАРАФИНОВ ЫХ БЛОКОВ ДЛЯ
ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОГО
АНАЛИЗА, включающий депарафинизацию ксилолом или толуолом, проведение через серию растворов этанола понижающейся концентрации, осмирование, обезвожива„„SU„„1165922 A ние и заливку в эпоксидные смолы, отличающийся тем, что, с целью улучшения сохранности ультраструктур тканей, проведение материала через этанол осуществляют последовательно в 100%-ном растворе спирта 25 — 30 мин, в 96%-ном 10 — 15 мин, в
70%-ном 10 — 15 мин, дважды промывают материал в 8 — 10%-ном растворе сахарозы в течение 10 — 15 мин, затем помешают материал в 2,4 — 2,5%-ный раствор глутаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2, повторно промывают раствором сахарозы, осмируют в 0,9 — 1,1%-ном растворе четырехокиси осмия на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2 55 — 60 мин, вновь промывают указанным раствором сахарозы, а затем обезвоживание производят в указанных растворах этанола с повышением концентрации и в двух сменах абсолютного ацетона по 15 мин.
1165922
Составитель С. Качкачева
Texpeд И. Верее Корресор A. Тяско
Тираж 897 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Редактор О. Головач
Заказ 4300/34
Изобретение относится к медицине в частности к патологической анатомии, эмбри. ологии и гистологии, и может найти применение в практической медицине и биологии.
Цель изобретения — улучшение сохранности ультраструктур тканей.
Пример 1. Проводят изучение ультраструктуры плаценты женщины с эклампсией и плаценты женщины с нефропатией П: Парафиновые блоки хранились в течение 1,5 лет
Из них после просмотра контрольных. срезов, окрашенных гематоксилин-эозином, вырезают интересующие участки около 1)(1 мм и проводят через 2 смены ксилола по 2 ч.
После этого проводят через 2 смены абсолютного этанола по 25 мин в 2 сменах
96Я-ного этанола по 15 мин, в 2 сменах
70Я-ного этанола по 15 мин, промывают дважды 10о -ной сахарозой по 15 мин, дофиксируют 2,5о-ным раствором глутаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2, промывают указанным раствором сахарозы, осмируют 1Я-ным раствором Оз04 на 0,1 М фосфатном буфере с рН 7,2 60 мин при комнатной температуре, вновь промывают указанным раствором сахарозы, обезвоживают в этаноле 70Я-ном, 96Я-ном, 100Яном) и 2 раза в абсолютном ацетоне по
15 мин, заливают в эпоксидную смолу как обычно.
При этом удается получить картину практически идентичную картине до заливки образца в парафиновые блоки, присущую плаценте при данной патологии.
Пример 2. Проводят изучение тех же образцов плаценты, что и в, примере 1. Однако для промывки используют 8о -ную сахарозу (10 мин). Осмируют 0,9о/о-ным О,Оч
55 мин. После просмотра в электронный микроскоп получают результаты, аналогичные примеру 1.
Пример 3. Проводят изучение тех же образцов плаценты, что и в примерах 1 и 2.
Однако для осмирования используют 0,7 /оный раствор О ;Оа и 2 /о-ный раствор глутаральдегида. Во время просмотра в электронный микроскоп не удается получить сохранившихся участков для изучения патологии и получения фотографий.
Пример 4. (сравнительный) . Для сравнения предлагаемого способа с известным кусочки тех же плацент проводят по известному способу. После депарафинизации 0 ксилолом и проведения через 2 смены
100Я-ного этанола кусочки фиксируют в
2Я-ном водном растворе Оа04 в течение
2 ч при комнатной температуре, после чего обезвожи вают и заливают в эпоксидную смолу как обычно. Полученные результаты не позволяют в полной мере изучить образцы и получить хорошие микрофотографии
Изучение ультраструктуры образцов ткани, подготовленных по предлагаемому способу (примеры 1 и 2), показывает ее хорошую сохранность и идентичность ультраструктуре на микрофотографиях образца ткани плаценты, который готовится по известному способу для электронно-микроскопического анализа до закладки ткани на хранение в архив (свежий биоптат).
Таким образом, использованная концентрация сахарозы для промывки (8 — 10Я-ная является оптимальной. При меньших концентрациях наблюдается гидратация тканей, а при больших — с мор щивание, что в том и другом случаях приводит к нарушениям сохранности тканевых структур.
При концентрации глутаральдегида меньше
2,4Я возможна недофиксация объекта, а выше 2,5о4 приводит к неоднородной фиксации ткани.
Использование растворов четырехокиси осмия выше и ниже выбранных границ концентраций не приводит к хорошей сохранности ультраструктур.
