Дитиоацетилгидразон -камфорхинона, проявляющий противогипоксическую активность

 

Дитиоацетилгидразон a-камфорхинона проявляющий противогипоксическую активность.

Изобретение относится к новому химическому соединению, конкретно к дитиоацетилгидразону a-камфорхинона формулы (I) Указанное соединение является биологически активным и может быть использовано в качестве противогипоксического средства. Известно, что метиловый и этиловый эфиры диметил- и диэтилдитиокарбаминовой кислоты защищают мышей от гипоксической гипоксии (подъем в барокамере до высоты 10500-11000 м) [1] Наиболее активным из этих соединений является метиловый эфир диметилдитиокарбаминовой кислоты, эффективный в дозе 30 мг/кг. Однако это вещество характеризуется низким терапевтическим индексом (отношением ЛД₅₀/ЕД₅₀); последний составляет для него лишь 3,3. Известно использование в качестве антигипоксанта 2-амидинотиомочевины /гутимина/ [2] Из-за трудности синтеза в промышленных условиях и внедрения в производство рекомендация его к медицинскому применению отменена. При этом его противогипоксические свойства недостаточно высоки (см. табл. 1 и 2). Вопрос о лекарственной профилактике и терапии гипоксических состояний актуален, и проблема фармакологической защиты организма от гипоксии не может считаться достаточно разработанной. В связи с широким применением антигипоксантов в медицине /заболевания сердца и сосудов, шок, длительные перегрузки и т.д./ задача изыскания новых препаратов, повышающих устойчивость к гипоксии, особенно актуальна. Целью изобретения является расширение арсенала средств, повышающих резистентность к различным видам гипоксии. Предлагается соединение формулы I, обладающее противогипоксической активностью. Указанное вещество представляет собой кристаллы лимонно-желтого цвета, т. пл. 107^oC, не растворяется в воде, растворяется в диметилсульфоксиде. Вещество устойчиво при хранении, негигроскопично. Оно однородно по данным тонкослойной хроматографии, для очистки достаточна двукратная перекристаллизации. Условия тонкослойной хроматографии: адсорбент силуфол УФ /ЧСР/, растворитель для нанесения диэтиловый эфир, подвижный растворитель - этилацетат-гептан, 1: 1. Вещество образует на хроматограмме два желтых пятна /в УФ-свете зеленовато-черных/, соответствующие двум геометрическим изомерам, отличающимся конфигурацией относительно связи С N. Преобладающему α-изомеру в растворе соответствует величина R_f 0,84, а Е-изомеру - 0,62. Методом двухмерной хроматографии доказана способность первого изомера к превращению во второй в условиях хроматографирования. Строение вещества подтверждается данными элементного анализа, а также ИК- и ПМР-спектров. В ИК-спектре в КВr обнаруживается одна полоса карбонила при 1720 см^-1, а в растворе в хлороформе при 1713 см^-1, т.е. преобладает одна изомерная форма. По данным спектра ПМР в растворе исследуемое соединение существует в виде единственного изомера (Z), стабилизированного внутримолекулярной водородной связью. Спектр ПМР в ДМСО -д6, t, м.д. 2'-NH 2,64 /c. 1H/, 4-H 6,49 /д. 1Н/, SCH₃ 7,51 /c. 3H/, CH₂ 7,87-8,63 /м. 4Н/, 7-CH₃, 8-CH₃ 9,06 /c. 3H/, 9,08 /c. 3H/, 10-CH₃ 9,25 /c. 3H/. Спектр ПМР в СДСl₃, t, м.д. 2'-NH 3,06 /c. 1H/, 4-H 7,33 /д. 1Н/, SCH₃ 7,43 /c. 3H/, CH₂ 7,87-8,47 /м. 4Н/, 7-CH₃, 8-CH₃ 9,03 /c. 6H/, 10-CH₃ 9,13 /c. 3H/. ИК-спектр снят в хлороформе для 0,1 М раствора при толщине слоя 0,06 мм. Спектр ПМР снят для 12-20%-ный растворов, внутренний стандарт ГМДС. Соединение формулы I получают обычным методом путем конденсации a-камфорхинона с S-метиловым эфиром дитиокарбазиновой кислоты при нагревании в метиловом спирте Найдено, C 53,62; H 7,08; N 10,81; S 23,54. C₁₂H₁₈N₂OS₂. Вычислено, C 53,30; H 6,71; N 10,36; S 23,72. Пример. Смешивают при 50^oC растворы 2,15 г /12,93 ммоль/ α-камфорхинона в 15 мл метилового спирта и 1058 г /12,93 ммоль/ S-метилового эфира дитиокарбазиновой кислоты в 15 мл метилового спирта, нагревают до кипения и перемешивают 1,5 ч. После остывания до комнатной температуры выдерживают 3 ч, фильтруют, осадок промывают метиловым спиртом /2 мл/ и эфиром /2 мл/. Получают продукт реакции в виде кристаллов лимонно-желтого цвета, выход 2,68 г /76,6% от теории/, т.пл. 106-107^oC. После двукратной перекристаллизации из метилового спирта продукт (3,4-3,7 мг/г) получают в однородном состоянии, т. пл. 107^oC. Выход при одной перекристаллизации 82,5-86,5% Вещество дает йод-азидную реакцию, т. е. быстро обесцвечивает синюю окраску йода с крахмалом, что характерно для тиоацилгидразонов. По данным ТСХ вещество не содержит примесей исходных и других веществ. Ниже приведены результаты исследования противогипоксической активности и токсичности препарата. Противогипоксическая активность
Изучение противогипоксической активности соединения проводят на модели гипоксической и гемической гипоксии. Гипоксическую гипоксию осуществляют "подъемом" животных в барокамере с непрерывной приточно-вытяжной вентиляцией на высоту 11000 и 12000 м. Схема "подъема": сначала 5000 м за 1 мин, а затем каждые последующие 1000 м в 1 мин и так до 11 000 м /для мышей/ и до 12 000 м /для крыс/. Наблюдение за животными ведут в течение 45 мин с момента достижения заданной высоты. Регистрируют процент выживаемости исследуемых животных. Гемическую гипоксию моделируют внутрибрюшинным введением 2%-ного раствора нитрита натрия в дозе 200 мг/кг. Все опыты проводят на белых мышах-самцах массой 18-22 г и белых крысах массой 160-200 г. Исследуемое вещество вводят в виде тонкой суспензии на твине-80 и физиологическом растворе в дозе 50 и 100 мг/кг за 1 ч до "подъема". Контрольным животным вводят такой же объем физиологического раствора на твине-80. Регистрируют процент выживаемости животных на высоте. Результаты опытов приведены в табл. 1 и 2. Установлено, что исследуемое вещество повышает устойчивость к гипоксии у животных при профилактическом введении последнего. Так, если большинство контрольных животных погибает в момент "подъема" /90%/, то опытные животные выдерживают "подъем" и экспозицию на заданной высоте. Введение исследуемого вещества в дозе 50 мг/кг защищает от гибели до 70% мышей, а в дозе 100 мг/кг
80% исследуемых животных. Предварительное введение этого соединения крысам в тех же дозах также позволяет повысить устойчивость к гипоксии 70% животных, причем выявлено статически достоверное повышение устойчивости и при введении вещества в дозе 25 мг/кг /см. табл. 1 и 2/. Результаты исследования противогипоксической активности на модели с нитритом натрия показали, что профилактическое введение соединения в дозе 25, 50 и 100 мг/кг защищает от гибели 60-80% животных, в то время как в контроле зарегистрировано 10% выживших в данных условиях животных, причем контрольные и погибают раньше, чем опытные. Так, если в контроле длительность жизни составляет 22,3±2,4 мин, то продолжительность жизни опытных животных (в мин) 32,1±1,9 /доза 25 мг/кг/, 38,4±2,5 /50 мг/кг/, 41,2±3,0 /100 мг/кг/. Эффект сравнивают с гутимином, который в дозе 100 мг/кг увеличивает длительности жизни до 28,6±4,8 мин. Таким образом, исследуемое вещество вдвое увеличивает продолжительность жизни по сравнению с интактными /контрольными/ животными в дозе 100 мг/кг и в 1-1,5 раза по сравнению с гутимином. Результаты обрабатывают по критерию Пирсона "хи"-квадрат. В сравнении с метиловым эфиром диметилдитиокарбаминовой кислоты (эффективным в дозе 30 мг/кг и обладающим низким терапевтическим индексом - отношение ЛD₅₀/ED₅₀ составляет 3,3). Предлагаемое соединение имеет значительно большую терапевтическую широту (величина ЛД₅₀/EД₅₀ на мышах для него равна 10,9). Оно превосходит эти известные соединения также тем, что проявляет активность в меньших дозах 25 мг/кг. Острая токсичность
Острую токсичность определяют на белых мышах-самцах при внутрибрюшинном введении им препарата в виде тонкой суспензии на твине-80. Установлено, что при однократном внутрибрюшинном введении исследуемого соединения ЛD₅₀ 543,6±2,3 мг/кг. Токсичность данного соединения близка к токсичности гутимина. Таким образом, в результате проведенных исследований обнаружены высокая противогипоксическая активность предлагаемого соединения, его малая токсичность и достаточная фармакологическая широта. Полученные данные позволят использовать это соединение в экспериментальной фармакологии.

Формула изобретения

Дитиоацетилгидразон a-камфорхинона

проявляющий противогипоксическую активность.

РИСУНКИ

Рисунок 1