Питательная среда для культивирования бифидобактерий штамма @ @ n 1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БИФИДОБАКТЕРИЙ ШТАММА BACTERIUM BIFIDUM № 1, содержащая источник азотистых соединений, соевый экстракт , сернокислое железо, хлористый натрий, лактозуS агар-агар, отлича.нгщаяся тем, что, с целью повышения выживаемости бифидобактерий в качестве источника азотистых соединений используют ферментативный гидролизат лошадиного сывороточного альбумина с содержанием амннного азота 160-700 мг) при следующем содержании компонентов , мас.%: Сернокислое железо 0,0002-0,001 0,4-0,6 Хлористый натрий . соевый 3,0-7,0 экстракт 0,8-t,2 Лактоза W 0,075тО,1 Агар-агар с Ферментативный гидролизат лошадиного сьюороточного Остальное альбумина О) со 00
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК (!9) (11> (51)4 С- 12 N 1/20, С 12 R 1:01 -:р
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ (54) (57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ
КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БИФИДОБАКТЕРИЙ
ШТАММА BACTERIUM BIFIDUM У содержащая источник азотистых
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ll0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЦТИЙ
Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТБУ (21) 3600085/28-13 (22) 03.06.83 (46) 15.07.85. Бюл. Ó 26 (72) Н.П. Ефимова, А.М. Ивакина, Г.Д. Борискина, Л.А. Пределина и В.А. Несчисляев (71) Пермский ордена Трудового
Красного Знамени научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (53) 577. 15(088.8) (56) Гончарова Г.И. К методике культивирования Bacterium bifidum. — :.
"Лабораторное дело", 1968, В 2, с. 100-102.
Регламент производства бифидумбактерина сухого 1214-81. соединений, 10Х-ный соевый экстракт, сернакислое железо, хлористый натрий, лактозу, агар-агар, отличающаяся . тем, что, с целью повышения выживаемости бифндобактерий,-в качестве источника азатистьы соединений используют ферментативиый гидролизат лошадиного сывороточного альбумина с содержанием аминнаго азота 160-700MrX при следующем содержании компонентов, мас.X:
Сернокислое железо 0,0002-0,001
Хлористый натрий . О;4-0,6
1ОХ-ный соевый экстракт 3,0-7,0
Лактоза 0,8-1,2
Агар-агар 0,075-.0,1
Ферментативный гидролизат лошадиного сывороточного альбумина .Остальное
1167198
Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для производства препарата — бифидумбактерина.
Цель изобретения — повышение вы живаемости бифидобактерий.
Сущность изобретения заключается в следующем.
Питательная среда включает сернокислое железо, хлориотый натрий, 10 лактозу, соевый экстракт и агарагар и содержит в качестве источника азотистых соединений гидролизат сывороточного а ьбумина при следующем содержании компонентов 15 на 1 л среды, вес.Х:
Железо сернокислое 0,0002-0,001
Натрий хлористый 0,4-0,6
10Х-ный соевый экстракт 3,0-7,0 20
Лактоза 0,8-1,2
Агар-агар 0,075-0,1
Альбуминовый гидролизат с содержанием аминного азота 160-200 мгХ Остальное 25
Известно, что сывороточный альбумин содержит значительное количество цистеина, что позволяет отказаться от введения данного компонента в состав альбуминовой среды и исполь- З0 зовать в качестве активатора ферментативной активности бифидобактерий более дешевый компонент — сернокислое железо. Соевый экстракт, получаемый . из кормового соевого шрота, содержит витамины группы В и используется в ка-.честве витаминной добавки.
Приготовление альбуминового гидролизата.
На 1 л альбуминовой фракции бел- 40 ков лошадиной сыворотки, получаемой после высаливания глобулинов, добавляют 220 г сернокислого. аммония и тщательно перемешивают до полного рарастворения соли. Полученный раствор 45 фильтруют через фильтровальные кассеты в мешках из технического волокна.
Осадок альбуминов в мешках помещают под механический пресс для более полного удаления иэ него смачиваю- . 50 щей жидкости. Степень отпрессовки альбуминов является достаточной, "е когда осадок белка, приобретает желтовато-оранжевый цвет и становится ломким. Отпрессованный альбумин . 55 счищают с мешков и хранят при 4 С не
0, более 30 дней. Сухой альбумин закладывают в вискоэные гильзы по 80
100 r в каждую, помещают в диализационные ванны с проточной водопроводной водой (температура воды +5-10 С).
Диализ длится 20-24 ч до достижения
О,ЗХ-ной концентрации сульфата аммония в растворе.
Содержание белка в диалиэате составляет 13-16Х. Диализат разводят дистиллированной водой до 5Х содержания альбумина.,Добавляют панкреатин
10 г на 1 л, хлороформ 20-30 мл на
1 л.
Гидролиз ведут в течение 40-48 ч при 450С с периодическим перемешиванием до прекращения нарастания аминного азота. В процессе гидролиза
РН поддерживают на уровне 8,0-8,5, добавляя 20Х-ный раствор NaOH. При " прекращении. нарастания аминного азота (420-600 мгХ) гидролизат декантируют, устанавливают с помощью трихлоруксусной. кислоты РН 4,7, кипятят 10 мин, фильтруют через миткаль. В готовом гидролизате устанавливают РН 7,0 с помощью
20Х-ного раствора NaOH и стерилизуют при 110. С 30 мин.
Пример 1. Альбуминовый гидролиэат разводят до содержания аминного азота 160 мгХ дистиллированной водой, С помощью 20Х-ного раствора
Na0H устанавливают РН 7,6.К 800 мп гидролизата добавляют 0,002 г сернокислого железа, 4 r хлористого натрия, 0,75 r агар-агара.
Кипятят 10 мин и добавляют 8 г лактозы н 30 г 10Х-ного соевого экстракта. Объем среды доводят до.
1.л добавлением альбуминового.гидролиэата с таким же содержанием аминного азота (160 мгХ). Среду стерио лизуют при 110 С в течение 30 мин.
П р и м е. р 2. Альбуминовый гидролизат разводят до содержания аминного азота 180 мгХ дистиллированной водой. Устанавливают РН
7,8 с помощью 20Х-ного раствора NaOH.:
К 800 мл .гидролиэата добавляют
0,005 r сернокислого железа, 5 r хлористого натрия 0,8 г агар-агара.
Кипятят 15 мин и добавляют 10 r . лактозы и 50 г 10Х-ного соевого экстракта. Объем среды доводят до
1 л добавлением альбуминового гидролизата с содержанием аминного азота
280 мгХ. Среду стерилиэуют при 110 С в течение 30 мин, Количество выросших колоний бифидобактерий до и после лиофильной сушки в зависимости от лрименяемой
10 среды представлено в таблице.
Количество колоний в разведениях
Среда.
Суспензия
1 о
Сухой препарат
10 10 10 10 . 10
1+1 18+2
1+1 14+2
Альбуминовая
5+1
1+1
5+1
18+2
Блаурокка (контроль) 1+1
5+1
5+1
15+1
Составитель В. Голимбет
Техред М. Герг ель Корректор В. Синицкая
Редактор М. Товтин
Заказ 4389/27 Тираж 525 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", r, Yaropop ул. Проектная, 4
1167198 4
Пример 3. Альбуминовый гид" зкстракта. Объем среды доводят до ролизат разводят до содержания 1 л добавлением альбуминового.гидаминного азота 200 мг дистиллиро- ролизата (аминный азвт 200 мгХ). ванной водой. С помощью 20 -ного Среду стерилизуют при 100 С в течео раствора NaOH устанавливают, рН 7,8. ние 30 мин.
К 800 мл гидролизата добавляют
0,01 г сернокислого железа1 6 r хлористого натрия, 1,0 г агар-агара.
Кипятят 10 мин и добавляют 12 г . лактозы и 70 г 10 -ного соевого
