Способ определения активности пероксидазы
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПЕРОКСИДАЗЫ путем добавления к пробам, содержащим пероксидазу, перекиси водорода и 5-аминосалициловой кислоты, инкубации реакционной смеси и спектрофотометрирования, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, после инкубации в реакционную смесь добавляют этанол или ацетон в количестве 32-48 об.%.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
„„SU<„, 367502
4(5!1 6 01 8 33 34
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
fl0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3601049/28-13 (22) 06.06.83 (46) 15.07.85. Бюл. 1Ф 26 (72) С.П.Смотров, Н.А.Савченко, И.Г.Шанявский и П.М.Аширов (71) Таджикский государственный университет им. В.И.Ленина (53) 543.866(088.8) (56) Маркелов И.М. и др. "Лабораторное дело", 1982, У 11, с. 29-31. (56) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПЕРОКСИДАЗЫ путем добавления к пробам, содержацим пероксидазу, перекиси водорода и 5-аминосалициловой кислоты, инкубации реакционной смеСи и спектрофотометрирования, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности определения, после инкубации в реакционную смесь добавляют этанол или ацетон в количестве 32-48 об.X.
1 16?502
Изобретение относится к биохимии, в частности к способу определения активности пероксидазы, и может быть использовано для решения различных задач, возникающих при иммунологи- 5 ческих исследованиях, например для количественного определения антигена или антител в пробе биологической жидкости.
Целью изобретения является повышение точности определения.
Пример 1, К девяти стандартным пробам пероксидазы, растворенным в 0,5 мл 0,01 M фосфатного буфера рН 6,0, добавляют по 2 мл субст- !5 ратной смеси, содержащей 11 нМ хромогена 5-аминосалициловой кислоты и
6 нМ перекиси водорода в фосфатном буфере рН 6,0. Каждую реакционную смесь инкубируют в течение 5 мин 20 при 20" С, а затем останавливают реакцию путем добавления в реакционную смесь 1 мл ацетона. Оптическую плотность окрашенных растворов измеряют на спектрофатометре СФ-26 в видимой 25 !
Оптическая плотность окрашенного раствора при. 460 нм
Концентрация без остановки реакции (известный способ) использованием останавливающего реагента пероксиэтилового спирта ацетона дазы, нг/мл
m — 7.
lA
М+ m
m э
0,03+0,01
0,05+0 01
0,09+0,01
0,17+0,02
0,23+0,03
0,31+0, 01
0,35+0,02
0,08+0,05 62,50
33,33
20,00
11, 11
1l,76
13,04
0,4+0,01
0,5
25,00 !
6,66
О, 10+0, 04
40, 00
0,06+0, 01
1,0
2,0
22,22
О, 15+0, 06 40,00
0,22+0,08 36,36
0 31+0 09 29,03
4,0
12,50
6,0
9,09
0,38+0,11 28,95
3,23
6,66
8,0
0,43+0,1!
24, 44
26,56
22,09
5,71
10;00
8,33
0,57+0,03
0,64+0, 17
5,26
5,17
16,0
20,0
4,05
5,54
0,74+0,03
0,86+0, 19
0,09+0, 02
О, 16+0,02
0,22+0,02
0,30+0,02
0,36+0,03
0,58+0,03
0,72+0,04. области спектра при длине волны
460 нм.
Пример 2. К девяти стандартным пробам пероксидазы, растворенным в 0,5 мл 0,01 И фосфатного буфера рН 6,0, добавляют по 2 мл субстратной смеси, содержащей 11 нМ хромогена 5-аминосалициловой кислоты и б нМ перекиси водорода в фосфатном буфере рН 6,0. Каждую реакционную смесь инкубируют в течение 5 мин при 20 С, а затем останавливают реакцию путем добавления в реакционную смесь 1 мл этилового спир1 а. Оптическую плотность окрашенных растворов измеряют на спектрофотометре СФ-26 в видимой области спектра при длине волны 460 нм.
Примеры иллюстрируются таблицей, в которой представлены сравнительные данные по измерению оптической плотности при определении активности пероксидазы предлагаемым и известным способами.
1167502
Составитель Н.Гуляева
Редактор И.Рыбченко Техред О.Неце Корректор M.Ðoçìàí
Тираж 897 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4!5
Заказ 4427/42
Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4
Из таблицы видно, что коэффициент вариаций измерений оптической плотности во всем интервале концентраций пероксидазы, полученных известным способом, выше коэффициентов вариаций измерений, полученных предлагаемым способом. Это говорит том, что предлагаемый способ обладает повышенной точностью и достоверностью определения по сравнению с известным.
Применейие предлагаемого способа определения активности пероксидаэы при построении калибровочной кривой позволит повысить точность иммуноферментного анализа в 2,5 раза.
