Способ определения активности пероксидазы

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПЕРОКСИДАЗЫ путем добавления к пробам, содержащим пероксидазу, перекиси водорода и 5-аминосалициловой кислоты, инкубации реакционной смеси и спектрофотометрирования, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, после инкубации в реакционную смесь добавляют этанол или ацетон в количестве 32-48 об.%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU<„, 367502

4(5!1 6 01 8 33 34

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

fl0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3601049/28-13 (22) 06.06.83 (46) 15.07.85. Бюл. 1Ф 26 (72) С.П.Смотров, Н.А.Савченко, И.Г.Шанявский и П.М.Аширов (71) Таджикский государственный университет им. В.И.Ленина (53) 543.866(088.8) (56) Маркелов И.М. и др. "Лабораторное дело", 1982, У 11, с. 29-31. (56) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПЕРОКСИДАЗЫ путем добавления к пробам, содержацим пероксидазу, перекиси водорода и 5-аминосалициловой кислоты, инкубации реакционной смеСи и спектрофотометрирования, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности определения, после инкубации в реакционную смесь добавляют этанол или ацетон в количестве 32-48 об.X.

1 16?502

Изобретение относится к биохимии, в частности к способу определения активности пероксидазы, и может быть использовано для решения различных задач, возникающих при иммунологи- 5 ческих исследованиях, например для количественного определения антигена или антител в пробе биологической жидкости.

Целью изобретения является повышение точности определения.

Пример 1, К девяти стандартным пробам пероксидазы, растворенным в 0,5 мл 0,01 M фосфатного буфера рН 6,0, добавляют по 2 мл субст- !5 ратной смеси, содержащей 11 нМ хромогена 5-аминосалициловой кислоты и

6 нМ перекиси водорода в фосфатном буфере рН 6,0. Каждую реакционную смесь инкубируют в течение 5 мин 20 при 20" С, а затем останавливают реакцию путем добавления в реакционную смесь 1 мл ацетона. Оптическую плотность окрашенных растворов измеряют на спектрофатометре СФ-26 в видимой 25 !

Оптическая плотность окрашенного раствора при. 460 нм

Концентрация без остановки реакции (известный способ) использованием останавливающего реагента пероксиэтилового спирта ацетона дазы, нг/мл

m — 7.

lA

М+ m

m э

0,03+0,01

0,05+0 01

0,09+0,01

0,17+0,02

0,23+0,03

0,31+0, 01

0,35+0,02

0,08+0,05 62,50

33,33

20,00

11, 11

1l,76

13,04

0,4+0,01

0,5

25,00 !

6,66

О, 10+0, 04

40, 00

0,06+0, 01

1,0

2,0

22,22

О, 15+0, 06 40,00

0,22+0,08 36,36

0 31+0 09 29,03

4,0

12,50

6,0

9,09

0,38+0,11 28,95

3,23

6,66

8,0

0,43+0,1!

24, 44

26,56

22,09

5,71

10;00

8,33

0,57+0,03

0,64+0, 17

5,26

5,17

16,0

20,0

4,05

5,54

0,74+0,03

0,86+0, 19

0,09+0, 02

О, 16+0,02

0,22+0,02

0,30+0,02

0,36+0,03

0,58+0,03

0,72+0,04. области спектра при длине волны

460 нм.

Пример 2. К девяти стандартным пробам пероксидазы, растворенным в 0,5 мл 0,01 И фосфатного буфера рН 6,0, добавляют по 2 мл субстратной смеси, содержащей 11 нМ хромогена 5-аминосалициловой кислоты и б нМ перекиси водорода в фосфатном буфере рН 6,0. Каждую реакционную смесь инкубируют в течение 5 мин при 20 С, а затем останавливают реакцию путем добавления в реакционную смесь 1 мл этилового спир1 а. Оптическую плотность окрашенных растворов измеряют на спектрофотометре СФ-26 в видимой области спектра при длине волны 460 нм.

Примеры иллюстрируются таблицей, в которой представлены сравнительные данные по измерению оптической плотности при определении активности пероксидазы предлагаемым и известным способами.

1167502

Составитель Н.Гуляева

Редактор И.Рыбченко Техред О.Неце Корректор M.Ðoçìàí

Тираж 897 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4!5

Заказ 4427/42

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Из таблицы видно, что коэффициент вариаций измерений оптической плотности во всем интервале концентраций пероксидазы, полученных известным способом, выше коэффициентов вариаций измерений, полученных предлагаемым способом. Это говорит том, что предлагаемый способ обладает повышенной точностью и достоверностью определения по сравнению с известным.

Применейие предлагаемого способа определения активности пероксидаэы при построении калибровочной кривой позволит повысить точность иммуноферментного анализа в 2,5 раза.

Способ определения активности пероксидазы Способ определения активности пероксидазы Способ определения активности пероксидазы 

 

Похожие патенты:

Иммунологический способ ]щгностики актишости туберкулезнош пшцбсслф1'sji'd^ju-s" 5!1изобретение относится к облас- 1 ти медицины и касается тшунологических способов диагностики активности туберкулезного процесса.известен способ оценки гзт путем учета цитотоксжческого эффекта, развивающегося при добавлении иммунных лимфоцитов испытуемого организма к клеткам-мишеням, например макро(|)агам» обработанним туберкулином.с целью повышения специфичности и чувствительности способа лимфоциты добавляют к макрофагам животного, зараженного туберкулезом.пример. эксперимент выполняют на мышах линии ва1ь/с. 20 мышей за 21 и 28 дней до исследования заражают 0.1 мг культурыhi7^v , 20 мышей - за 1,5 месяца до опыта вакцинируют i мг бцк и 20 мышей берут в качестве контроля. макрофаги из перитонеальной полости от зараженных, вакцинированных и контрольных мышей вы-10152025ращивают в течение 48 час в плоскодонных пробирках (в каадую пробирку вносят по 200-250 тыс.макрофагов в i мл среды 199 с 20^ сыворотки крупного рогатого скота и 10/0 лактальбумина;. затем в пробирк-й добавляют лимфоциты также от зараженных, вакцинированных и контрольных животных в соотношении 100 жизнеспособных лимфоцитов на i макрофаг (лнк4'оциты получают из лимфоузлов "выдавливанием^, шзнеспособность их оценивают при окраске 0, 1^ трепановым синим и 0,1^ эозином), 2*10*^ жизнеспособкшх лимфоцитов добавляют в каждую пробирку с макрофагами в i nji среды 199 с 15^ лактальбумина, через i сутки соеду заменяют на новую порцию с 2% сыворотки «рудного рогатого свота и 10^ лайтальоумина. результаты реакции оценивают еще через 48 час по формуле^ -ь . 1оо:й, а // 424430
Изобретение относится к облас- 1 ти медицины и касается тшунологических способов диагностики активности туберкулезного процесса.Известен способ оценки ГЗТ путем учета цитотоксжческого эффекта, развивающегося при добавлении иммунных лимфоцитов испытуемого организма к клеткам-мишеням, например макрО(|)агам» обработанним туберкулином.С целью повышения специфичности и чувствительности способа лимфоциты добавляют к макрофагам животного, зараженного туберкулезом.Пример

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для диагностики ранних отклонений в иммунном статусе новорожденных

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к методам иммунохимического определения гаптенов (ксенобиотиков) в образцах биологического происхождения и объектах окружающей среды, и может быть использовано для выявления высокоаффинных поли- и моноклональных антител к водонерастворимым гаптенам

Изобретение относится к устройству для автоматического проведения иммуноанализа за несколько последовательных этапов по меньшей мере, одного биологического вещества из множества биологических образцов, а также к способу и реактивам для использования указанного прибора

Изобретение относится к анализам и, в частности к катализируемому осаждению репортера через активированный конъюгат для усиления детектируемого сигнала, вследствие чего улучшается детекция и/или количество аналита в образце

Изобретение относится к анализам и, в частности к катализируемому осаждению репортера через активированный конъюгат для усиления детектируемого сигнала, вследствие чего улучшается детекция и/или количество аналита в образце

Изобретение относится к области медицины, медицинской техники, ветеринарии, экологии и может быть использовано для определения биологически активных веществ в любых биологических жидкостях, окружающей среде, пищевых продуктах, в частности в диагностике вирусных, бактериальных, паразитарных и соматических заболеваний, а также для контроля эффективности лечения
Изобретение относится к медицине, а именно к детской хирургии и клинической иммунологии, и может быть использовано для диагностики спаечной болезни брюшины у детей, оперированных по поводу острого аппендицита

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и может быть использовано для оценки состояния иммунной системы беременной женщины

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики хронического простатита

 

Наверх