Способ криоконсервации спермиев тутового шелкопряда

 

СПОСОБ КРИОКОНСЕРВАЦИИ СПЕРМИЕВ ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА путем введения спермиав в криопротектор, замораживания и последукмцего хранения , отличающийся тем, что, с целью повьпаения оплодотворяющей способности спермиев, замораживание и хранение спермиев ведут в копулятивных сумках, извлеченных из оплодотворенных самок, при температуре жидкого азота. сл с

„„Я0„„1168170

COIO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (sl) А 01 К 67 04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

rIO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ. т

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ,/

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВ

Cb

QO 3 (21) 3633158/30-15 (22) 09.08.83 (46) 23.07.85. Бюл. Ф 27 (72) Л.А.Бегма, А.А.Бегма, А.З.Злотин и В.Н.Кириченко (71) Украинское научно-производственное объединение "Укрплемгрена" (53) 638 ° 240(088.8) (56) Осташко Ф.И. Глубокое замораживание и дпительное хранение спермы производителей. Киев, "Урожай", 1978, с. 254.

Шевякова И.И. Искусственное осеменение тутовово шелкопряда. Автореф. канд.дис. Ташкент, 1960, с. 17. (54) (57) СПОСОБ КРИОКОНСЕРВАЦИИ

CIIKPNHEB ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА путем введения спермиев в криопротектор, замораживания и последующего хранения, отличающийся тем, что, с целью повышения оплодотворяющей способности спермиев, замораживание и хранение спермиев ведут в копулятивных сумках, извлеченных из оплодотворенных самок, при температуре жидкого азота.

1168170

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к шелководству, и может быть использовано в селекционной и племенной работе с тутовым шелкопрядом. S

Цель изобретения - повышение оплодотворяющей способности спермиев тутового шелкопряда при длительном хранении.

Пример. Сразу же после полу- 10 чения копулятивных сумок их помещают в криозащитную среду следующего состава: сахароза 11,5 r, глицерин

5 мг, желток куриного яйца 20 мл, вода 100 мп. Затем копулятивные сумки 1з со средой помещают в холодильник при

+5 С на 5 ч. Замораживание проводят в форме гранул объемом 0,2 мл в ячейках фторопластовой кассеты, о охлажденной в парах азота до -80 С. 20

В каждой грануле замораживают одну копулятивную сумку. После полной кристаллизации гранулы переносят в жидкий азот (-196 C), в котором их о хранят. 25

Для оттаивания замороженную гранулу помещают в 2 9Х-ный раствор лимоннокислого натрия, предварительно подогретого до 40 С. После этого флакон сразу же переносят в водную 30 баню при 25 С.

Биологическую полноценность спермиев тутового шелкопряда определяют по следующим показателям: активность спермиев определяют Визу- 35 ально (под микроскопом с увеличением 100-200 раэ) и выражают в процентах живых спермиев; выживаемость спермиев определяют.по ГОСТ 20 909.4-75, принятому для спермиев быков, gp показатель выражает время жизни спермиев в часах при оптимальных условиях (4 = 25 С).

Оплодотворяющую способность спермиев определяют epasy же после отта- 15 ивания копулятивных сумок. Для этого оттаивающую копулятивную сумку помещают в 2,9Х-ный раствор цитрата натрия, прокалывают пастеровской микропипеткой, отсасывают спермии, а затем вводят пипетку в копулятивное отверстие неоплодотворенной самки и вдувают спермии внутрь отверстия самки. Одновременно неоплодотворенных самок той же партии осеменяют спермой, полученной из копулятивных сумок без замораживания (опыт I). Базовым контролем (опыт ф) служит естественное осеменение самок путем спаривания их с самцами. Продолжительность спаривания 120 мин.

Опыты проводили с породой Б-1 ул. в 1981"82 гг. Проведено две серии опытов по приведенной методике замораживания спермиев тутового шелкопряда. В первом опыте спермии хранили

30 дн, во втором — 180. Осеменяли по

50 самок на вариант. Результаты опытов замораживания на качество спермиев тутового шелкопряда представлены в табл. 1.

Данные табл. 1 свидетельствуют о том, что в процессе замораживания по разработанной методике сохраняется живыми до 50Х спермиев (до замораживания подвижных в опыте

53,5Х, после оттаивания 34,58Х, в опыте - 80X до замораживания и

38,9Х после оттаивания).

Результаты оценки оплодотворяющей способности спермиев при искусственном осеменении представлены в табл. 2.

Из приведенных данных видно, что спермии тутового шелкопряда, хранящиеся по предлагаемому способу по оплодотворяющей способности не уступают контрольно, используемым для осеменения сразу после извлечения из копулятивной сумки (беэ замораживания).

Таким образом, предлагаемый способ длительного хранения спермиев тутового шелкопряда позволяет сохранить их высокую биологическую активность в течение длительного времени хранения.

1168170

Таблица 1

Опыт при n = 20

Показатели

53,5 2 3,1

15,25 + 1,149

Качество замороженной спермы в копулятивных сумках: активность спермиев, Ж выживаемость, ч

Качество замороженной спермы вне капсул: активность спермиев, Х выживаемость, ч

Качество замороженной спермы при 5 С (по известному способу):

0 активность спермиев, Ж выживаемость, ч

Таблица 2

Среднее количество яиц в кладке, шт.

Оплодотворенные яйца в кладке, Х

Вариант хранения спермиев

Всего Оплодотворенные

43,7 + 2,1

197,8

207,0

44,8 1,5

Естественное осеменеккеспаривание (базовый опыт й) 548,3 543,7

99,2 +0 ° 1

Составитель И. Марченко редактор Н. Бобкова ТехредС.Мигунова Корректор О. Тигор

Заказ 4529/4

Тираж 743

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35 ° Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Качество незамороженной спермы: активность спермиев Х выживаемость, ч

Осеменение размороженной спермой Осеменение свежей спермой (без хранения, опыт I) 453,0

462,2

34158+4э381

3,08 +0,256

14,25+1,24

1,03 q0,18

80,1 + 4,72

8,78 7+ 2,61

38,9 + 6,11

2,78 + 0,403

15,8 + 1,41

1,31 « . 0,20