Способ подготовки биологической ткани к исследованию в растровой микроскопии

 

СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ К ИССЛЕДОВАНИЮ В РАСТРОВОЙ МИКРОСКОПИИ,путем ее фиксации, обезвоживания с последующей обработкой драгоценным металлом, отличающийся тем, ЧТО, с целью вьщеления всех структур поверхности, ткань послефиксации обрабатывают 0,5-2%-ным раствором хлорвда олова, а обработку драгоценным металлом проводят в 0,5-2%-ном растворе хлорида золота, при ЭТОМ каждую обработку ведут в течение 1-2 ч. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3460645/28-13 (22) 01.07.82 (46) 23.07.85. Бюл. Р 27 (72) E.H. Медвецкий и Л.В. Кейсевич (71) Киевский научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной хирургии и Киевский государственный институт усовершенствования врачей (53) 616-0,89.9(088.8) (56) Ровенский Ю.А. Растровая электронная микроскопия нормальных и опухолевых клеток. M. "Медицина"g 1979, с, 36-41.

Рыбаков А.Г. Растрбвая электронная микроскопия сосудов и крови. М., "Медицина", 1976, с. 23-26. (Рц > G.01 N 1/28, А 61 В 10 00 (54) (57) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ К ИССЛЕДОВАНИЮ В РАСТРОВОЙ МИКРОСКОПИИ, путем ее фиксации, обезвоживания с последующей обработкой драгоценным металлом, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью выделения всех структур поверхности, ткань после фиксации обрабатывают

0,5-2Х-ным раствором хлорида олова, а обработку драгоценным металлом Проводят в 0,5-27.-ном растворе хлорида золота, при этом каждую обработку ведут в течение 1-2 ч.

1 1 1:688

Составитель В, Чистяков

Техред С.Мигунова

Редактор О. Бугир

Корректор M. Роэман

Заказ 4607/36 Тираж 897

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал IIIIII "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к биологии " . и медицине и предназначено для подготовки биологических объектов к исследованию на растровом электронном микроскопе (РЭМ). S

Цель изобретения — выявление всех структур поверхности.

Способ осуществляется следующим образом.

Образец ткани фиксируют по приня.тому в электронной микроскопии методу, отмывают от фиксатора и на

1-2 ч при комнатной температуре погружают в 0,5-27-ный раствор хлорида олова15 в 1Х-ной кислоте (d = 1.,18), служащий сенсибилизатором поверхности, и 15-20 мин промывают в листиллированной воде для создания коллоидной пленки двухвалентного олова 20 (SnC1, + Н,О - $п(ОН)С1 + НС1, повышающей равномерность образования металлического покрытия и создающей условия для восстановления ионов металла. Затем на 1-2 ч переносят пре- 25 парат в 0,5-27-ный раствор хлорида драгоценного металла, например золота (SnC1 + AuC1 - БпС1 + Au), причем образующееся при этом металлическое покрытие и ионы металла, откладывающиеся внутри ткани, обеспечивают электропроводность образца по всей его толщине и на поверхности, что препятствует возникновению очагов статического электричества; отмывают препарат в дистиллированной воде, обезвоживают одним из способов, применяющихся в электронной микроскопии, и изучают на растровом электронном микроскопе.

3

t8 2

Пример. Предназначенный для исследования фрагмент ткани, например, поджелудочной железы или печени промывают для очистки поверхности от загрязняющих веществ и фиксируют в 1-3Х-ном растворе глутарового альдегида в 0,1М фосфатном буфере. 3атем его отмывают забуференным изотоническим раствором хлористого натрия и для окончательной фиксации переносят в 17.-ный раствор четырехокиси осмия в 0,1 M фосфтаном буфере.

Вновь тщательно отмывают в дистиллированной воде.

Фиксированную ткань на 1-2 ч погружают в 1Х-ный раствор хлорида олова в 17.-ной соляной кислоте, в течение

15-20 мин отмывают в дистиллированной воде, на 1-2 ч помещают в 1Х-ный раствор хлорида золота и вновь 1520 мин отмывают в дистиллированной воде, После этого подготовленный таким образом препарат обезвоживают в спиртах восходящей крепости от 30 до

100 С, наклеивают его на подложку и изучают на растровом электронном микроскопе.

Опытным путем установлено, что если концентрация хлорида олова или хлорида золота в растворе менее

0,5Х, препарат свойств электропроводности не нриобретает, а при концентрации более 27. возникают искажения изображения.

Изобретение позволяет выявить все структуры поверхности ткани, повысить разрешающую способность микроскопа, кроме того, исключить использование чистых драгоценных металлов и специальной вакуумной аппаратуры.