Способ получения аналогов линкомицина и клиндамицина

 

СПОСОБ ГОЛУЧЕИМ АНАЛОГОВ ЛИНКОМИЦИНА И КЛИНДАМИЦИНА общей формулы Сн. Л I о (I с 1JH-CH N Н Wсн . ОН где R - этил или бутил, отличающийся-тем, что в присутствии катализатора гидрируют соединение общей формулы ,

СОКИ ООВЕТСНИХ

Ш I IN lit lk

РЕСПУБЛИК (1% (И) ГОСУ АРСТВЕНН HOM

4 bN ИТЕТ ССОР

Л\Ю ЭЕЙ и й

ОПИСАНИЕ ИЗО6РЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ вЂ” в-сн, ° ОН

СОХ (21) 3444858/23-04 (62) 3210609/23-04 (22) 19.08.81 (23) 21. 11. 80 (31) 096652, 148 056 (32) 23. 11. 79, 19.05. 80 (33) US (46). 23.07 ° 85. Бюп. 9 27 (72) Роберт Дейвид Виркенмайер (US) (71-) Две Апдлюн Компани (US) (53) 547.458.2(088 ° 8) (56) Патент CRA Р 3496163, кл. 260-210, 1970.

Augustine R. L„ Catalytic Hydrogenatoin. Marcel Pekker INC. N-У, 1965, р. 104-106. (бР+С 07 Ц 5 08 15/Ûß4.,3j1 К 31/445 (S4) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАЛОГОВ

Ш Ю* формулы Я (-Н

Ъ

0 Н -а

Н

С- Н-СН где R< — этил или бутил, отличающийся -тем, что в присутствии катализатора гидрируют соединение общей формулы где К„ имеет укаэанные значения

Х вЂ” 7 fS f — хлорметил-t-тио- о(-линкосаминид.

Пр корит ет; по приз на к ам:.

23.11.79 при R - этил:

19.05.80 при R„бутил.

1169543 ной формулы Я

СН

О HC-C1

II 1

МН-СН

Пример 1. Амид-4-Нис-этил10 -1-пипеколиновой кислоты 7-CgMTJI

НС (соединение У), где МТЛ вЂ” метил-1-тио- о -линкосаминад.

Часть 1. 3

ОН где К Et, Bu.

С,Н, О - He1+ +7-С1 — МТЛ

С.

ОН

-СН

С,ц (2Н 5 о ясов

II

М

С+ 7- С1-ИХЛ ИЗ

0Н

50 ках в системе CHCE . метанол (6:1) показывают, что весь исходный материал превращен в два более полярных вещества, находящихся в соотношении 1:1. В целях отделения ка55 тализатора реакционную смесь отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме с получением белого мягкого кристаллического ве1

Изобретение относится к способу получения новых соединений аналогов линкомицина и клиндамицина структурК охлажденному до 10 С раствору

67 r (0,357 моль) аминокислоты НС9 (С,А 51,1643а, 1957) и 71,5 r (0,714 моль) тризтиламина в 2,5 л ацетонитрила одной порцией добавляют 47,6 r (0,354 моль) изобутилхлор;формиата. Эту смесь (раствор) перемешивают при 10 С в течение 1 ч. о

Раствор Б приготовляют растворением 97,7 г (0,357 моль) 7С9-МУЛ в теплой смеси 1500 мл ацетона и

1500 мл воды, охлаждают до 30 С и одной порцией добавляют к раствору

А. Реакционную смесь перемешивают при 25 С в течение 18 ч, ацетон и

Смесь из 4,05 r (0,01 моль) исходного материала, 40 мл воды, 60 мп метанола, 1,0 мл 37Х-ного хлористого водорода и 8,0 г катализатора на основе двуокиси платины восстанавливают в гидрогенизаторе

Парра под давлением 3,4 кг/см в течение 3 ч. Данные ТСХ реакционной смеси на силикагелевых пластин2

Цель изобретения - получение, основанное на известном методе, новых антибиотиков, обладающих более сильными бактериостатическими свойствами по сравнению с широкораспространенными аналогами линкомицином и клиндамицином. ацетонитрил удаляют в вакууме. Белый, мягкий остаток отфильтровывают и кристаллическое вещество собирают и высушивают с получением 95 r чистого продукта, Переработкой фильтрата путем хроматографии получают еще 10 г продукта. Общий выход составляет 73Х.

Подсчитано: С 50,42; Н 6,22;

И 6,92, S 7,92, CI 8,76.

С Н 5 СИЯО 5 °

Найдено: С 50,67; Н 6,40;

N 6,64; S 7,90; CI 8,70. (el CHCCI: (С-1,0) + 293 С

Часть II.

1169543 4 превращают в свободное основание, хроматографируют на еиликагеле с использованием в качестве растворителя СНС! метанол (6:1).

Получают менее полярный из двух, упомянутых в части II, продуктов.

Его превращают в хлористоводороднокислую соль и перекристаллизовывают иэ ацетона и воды. Этому изомеt0,ру можно приписать структуру VA

ОН

С2Н5 ч Зтиеризация,О

М С-7-С2-ИТЛ "

С2Н5

vA Зиимеризация О ф ЧС

С - 7- C 2-МТЛ

Сж,Н5 С2П5 р Зпинеризация 0

0Н Ч H Н

vA /идфояиз 2 5

v Ги Цюолиз

g Зпимеризация 0

N м

Он v6 Н Н

3 щества, которое отфильтрбвывают с сохранением получаемого фильтрата.

Белое твердое вещество, оказавшееся более полярным из двух полученных продуктов согласно ТСХ восстановленной смеси, перекристалли-. зовывают из воды, с получением желаемого продукта Ч 57,930 с тд„

222-224 С и выходом 25-35Х.

Подсчитано: С 45,63, Н 7,21, N 6,26; S 7,17; С 15,85.

С17Н92С? я ОНайдено: С 4Е,77; Н 7,44;

N6,,39, S 7,21, CI 16,17. (о )Р Н.О: (С-1 О). +176е

Абсолютная конфигурация и стереохимия целевого продукта были определены рентгено-структурным анализом . Согласно примеру 1 получают соединение VA. Сохраненный согласно части II примера 1 фильтрат концентрируют.досуха в вакууме и остаток

Соединения У и УА можно также гидро- . лизовать с получением аминокислот

У и УЕ соответственно, которые за40 тем можно эпимеризовать известили

С2Н5

О Н-СС1 п l

С-ВН-С-н

К НО О

VA

И-Сн, Получаемые эпимеризацией транос-изомеры УВ и УС выделяют обычными приема ми кристаллизации или хроматографии приемами в соединения VF u VG соответственно. Последние можно связать с любыми описанными линкосаминидами

1169543

C4Hg

О

g-r- d>-мтп

s-eH

ОН (Og Н 2Й2И20ф {Х2Н20) 4Б9 СНз

ИА р

M С- NH- С.п.

Цо О

ОН

{C 1y HggCi Kg0g 8 X Hgg),а

С- -Ci NTB

Пример 2. Амид 4-цио-и-бу1

Смесь 4,0 г (0,0093 моль) исходного материала, 40 мл воды, 40 мл метанола, 2 мл 37Х-кого хлористого водорода и 8,0 r катализатора на основе двуокиси платины восстанавливают с помощью гидрогенизатора Парра при давлении 3,4 кг/см2 в течение 18 ч.

В целях удаления катализатора отфильтровывают реакционную смесь и фильтрат концентрируют в вакууме с получением масла янтарного цвета.

Последнее растворяют в 20 мл раствора CHCt и метанола (2: 1} и в целях нейтрализации присутствующего хлористого водорода добавляют достаточное количество триэтиламина. Этот раствор хроматографируют на силикагеле с применением системы растворителей СНС1 . метанол (2:1). Получают фракции двух главных продуктов. Фракции, содержащие быстрее продвигающийся. материал, собирают и выпаривают в вакууме с получением белой твердой фракции А.

Фракцию А из предыдущего опыта превращают в ее хлористоводороднокислую соль тем же образом, что и фракцию Б. Получают продукт с выходом 25-35Х который на основе данных ЯМР-спектра в основном оказы; тил-L-пипеколиновой кислоты i-CfMTJI;

QQHg ц

) 5

H-С-Ci 1

О с-кн-с-н (х) н а

I 2

П НО

Ъ

Фракции, содержащие медленнее )родвигающийся материал, собирают и выпаривают в вакууме с получением белой твердой фракции Б, которые растворяют в незначительном количестве воды и добавляют достаточное количество 37Х-ного хлористого водорода в целях доведения значения рН до 2. Затем проводят кристаллизацию. Твердый материал собирают и перекристаллизовывают из воды с получением белых кристаллов желаемого продукта с т. пл.

224-226 С и выходом 25-35Х.

Подсчитано: С 47„99) Н 7,63;

30 N 5 89: S 6 75 Ñ 14 92

С,НЗ2С,М,0,8.

Найдено: С 47,97; Н 7,42;

И 6,23, S 6,90; CI 14,87-. а МеОН: + 178а (С-1,0) °

35 Структура подтверждена данными анализа ЯМР-спектра.

П о и м е р 3. Амид-4-q))c-n-бутил-D-пипеколиновой кислоты.7,.-.:O-MTJ1. вается идентичным с продуктом из фракции Б.

Минимальная бактериостатическая концентрация (ИБК) соединения V и клиндамицина относительно аэробиых бактерий представлена в табл.1, 1169543

МБК, мк г/мп

Организм

Штамм ндамицин Соединение Ч

6685

25

0,5

6686

6687

0 25

6688

25

6689

0,5

6690

0,25

6691

-10

6692

>25

>25

6693

78

6694

1 25

>25

6695

-10

-39

6696

39

6675

0,5

0,5

746

40,5

0,5

571

78

570

719

20

3389

20

694

6,25

152 а 0,12

153

С0,5 с 0,12

4 0,12

3213

)50

50

Staphy fococcus aureus

Staphy tococcus

epidermidis

streptococcus faecatis

streptococcus pyogenes

Streptococcus viridans

DipIococcus pneumoniae I

DipIococcus pneumoniae II

Escherichia coIi (0,12

c 0,12 (0,12 (0,12

Таблица 1

1169543

МБК, мкг/мл

Штамм

Организм 50

>50

50

6,25

50

126

50

95.

МЕК,.мкг/мл

Организм

ЧС

Клиндамицин

Соединение Ч

6513

0,06

0,12

6428

0,06

0,25

6864

3,9

2,0

6862

7„8

15,6

2,0

6512

0,5

6518

0,12

0,03

6326

0,06

0,05

247

0,06

0,12

6509

0,06

0,12

6329

0,06

0,12

6508

7,8

7,8

6510

С0,03

0,06

Proteus vuIgaris

KIebsieIIa pneumonia

SaImoneIIa schottmueIIeri

Pseudomonas aeruginosa

Указанные испытания проводятся следующим образом.

Значение МБК обоих соединений относительно аэробных бактерий определяют методом последовательных разведений. В качестве питательной среды используют бульон из мозга и сердца. Пластинки инкубируют при 37 С в течение 20 ч.

Штаммы Saureus VC 6685-6696, выделяющиеся в клинических условиях, Bactегоides fragiIis

Bactегоides meIaninogenicus г

Bactегоides distasonis

Bactегоides melaninogenicus

Coostridi perfrindens

CIostridium novyi В

CIostridium tertium

CIostridium cadaveris

Продолжение табл.! линдамицин Соединение являются устойчивыми к одному или более торговым антибиотикам. Символ

UC означает зарегистрированный товарный знак коллекции The Upjohn

Company CuIturure CoIIection, в г. KaImazoo в.штате Мичиган, из которой по запросу можно получить указанные культуры.

МБК клиндамицина и соединения Ч относительно грам-положительных и грам-отрицательных анаэробных бактерий представлена в табл. 2.

Т аблица 2

1169543

Продолжение табл.

МБК9 мкг/мл

ЧС

Организм

2,0

0,5

6505 0 Оз

6 0,03

« 0,03

6521

6506

0,25

0,06

0,50

6507

6834

7,7

3,9

6857

125

250

6858

3,9

3,9

6860

500

500

6861

2,0

3,9

0,12

6564

0,06

6575

0,06

0,03

6515

2,0

2,0

6522

0,50

1,0

5920

0,25

0,25

6516

0,12

0,12

0,06, 0,06

6324

6052

3,9

15,6

0,06

0,06

0,50

0,25

6258

0,06

0,05

Peptococcus manus

4 0,03

0,06

0,12

0,12

СЕовСгЫизш вогйеЕЕИ

CIostridium rentani

CIostridium 6otuginum А

CIostridium 8ifermentans

CIostridium diHiciIe

Propionibacterium acnes

Eubacterium Ишовцш .Eubacterium centum

Actinomyces naes2undii

Fusobacterium nucIeatumi

Fesobacterium varium

Fusobacterium necrophorum 6568

Peptococcus авассЬаго)Ьй сив 6214

Peptococcus aегоgenes 6319

pertostreptococcus апаетоЬии 6321

Указанные испытания проводят следующим образом.

Приготовляют серию разведений соответствующего антибиотика в отношении 1:2 в бульоне Шедлера (по

1,0 мл), а затем добавляют 9,0 мл

Клинд ц Со дине„„е V расплавленной при 47 С агаровой среды Вуилкенса Чалгрэна. После смешивания с антибиотиком агаровую среду выливают на чашки Петри (100 мл

К20 мм) и перед засевом последние выдерзивают в течение ночи. Культу14

1169543

Клиндамицин

Соотношение

5,7(4,2 + 7,8 2

12,3(8,8 + 17,3) Подкожно

Перорально

Подкожно

1+5 и 10

2,3(1,6+3,3 ) 0,25, 10

Подкожно Перорально

3,3(2,6 + 4,2)

12,3(10,2+14,8) 4,2

2,9(2,0+

+0,4,1)

320

320

+ЭД, мг/кг йО ры засеивают штрихам на чашки с агаром Вуилкенса-Чалгрэна и, выращивают их в течение 48 ч при 37 С.

Собирают газон микробов и готовят суспензию клеток в бульоне Педлера до мутности 0,5 Nafarfand Standard (10 клеток/мл) . Полученную суспенS зию пипеткой переносят в резервуары аппарата Steers repIicator и из него около 1-2 мкл наносят на поверхность агаровых.пластинок. После высыхания посеянной суспензии в течение нескольких минут пластинки помещают в сосуд (85X N, 107. Н, SX СО ) о и инкубируют при 37 С в течение

72 ч. МБК означает минимальную концентрацию действующего начала, задерживающую рост бактерий, причем очень тонкая пленка бактерий, т.е. менее

3 колоний, считается отрицательным результатом.

Агаровая среда Вуилкенса-Чалгрэна.

Растворитель — следующие компоненты, г, в 1000 мл дистиллированной воды (рН 7,0, 7,2):

Триптиказа 10

Гелисат 10

Дрожжевой экстракт 5 глюкоза 1

NaCI 5

Микроорганизм и способ применения действующего начала

Указанные испытания проводят следукщим образом.

Группы по 10 обычных лабораторных мьппей штамма CF 1 весом 18-20 r внутрибрюшинным путем заражают приСвободный от аргинина 1

Натриевая соль пи5 ровиноградной кислоты 1 . Агар 15

Добавляют растворы гема и витамина К с получением окончательной

10 К0НпеНТра Н 5 MKr/ìë гемина и витамина К„. Выдерживают автоклав при

121 С в течение 15 мин в аэробных условиях. Основной раствор гема:

0,5 г гемина + 10 мл 1 н. МаОН +

15 + 990 мл Н . Выдерживают автоклав при 121 С в течение 12 мин. Добавляют 10 мл основного раствора на литр среды. Основной раствор витамина К . 0,05 мл раствора витамина

20 К + .20 мл 957.-ного этанола. Стерилизуют фильтры. Добавляют 0,2 мл основного раствора на литр среды.

Среднее значение ЛД (внутрибрюшинно у мышей) соединения У из двух

25 идентичных определений составляет

592 мг/кг,что приблизительно в два раза превышает ЛДSo клиндамицина

НС1, т.е. острая внутрибрюшинная токсичность соединения Y приблизи3б тельно в два раза меньше, чем у клиндамицина НС1.

Испытания на защиту мьппей. Методика приведена в табл. 3.

Таблица 3 близительно 100 дозами ЛД п нормированных суспензий клеток бактерий, которые предварительно замораживали при -170 С, а затем быстро размоо раживали и должным образом раэбавля1169543

l6 ли. Сразу-же начинают лечение и проI должают его в течение 4 сут (препа-. рат вводят раз в день, первый суточный период равен единице. Группы необработанных зараженных мышей служат в качестве вирулентного контроля культуры.

Через 7 дн. после начала лечения выживших животных умерщвляют и вычисляют среднюю ЗД антибиотика и его 953-ный доверительный интервал в пересчете на смертность среды обработанных животных согласно методу Спэрмена и Карбера с помощью

ЦВМ 360. P-Цис-изомер УА при испытании с рассмотренным в связи с табл. 1 бульоном из мозга и сердца оказывает антибактериальное действие. Результаты испытаний представлены в табл. 4.

Таблица 4

Значения МБК, мкг/мл, UI у различных бактерий представлено в табл. 5.

Таблица

БК VI

Микроорганизм!

0,125

S. aureus

0,25

570

746

0,062

S. faecalis

0,25

694

0,008

152

$,pyogenes

D, pneumoniae

41 0,016

45 31,2

58 7,8

Е. coIi

К, pneumoniae

VC МБК, мкг/мл

Микроорганизм

S schottmueIIeri 126 31 2

250

Б, aureus

Ps. aeruginosa

95 >125

1000

570

125

746

Испытания проводят по методу, указанному в примере 1. Действие вещества VI испытывали на обычныс лабораторных мышах, которых для этой цели заражали бактериями, причем его сравнивали с действием Ч.

Результаты опытов показывают, что на D. pneumoniae и вещество III в мьппах и вещество Ч? оказывает гораздо. большее действие чем вещество У. Против S. aureus u

4 Я. ЬешоВу испв вещество VI обладает в основном такой же активноСтьв как и вещество Ч.

S. fecaIis

694 >1 000

62,5

152

S, pyogenes

D.pneumoniae

Е. coIi

К.pneumoniae

62,5

21000

>1000

S schottmueIIeri 126

>1000

Ps. aeruginosa

95 p1000

Составитель Ю. Белоусов

Редактор В. Данко Техред Л.Мартяшова Корректор В.Бутяга

Заказ 4633/57 Тираж 354 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4