Способ определения концентрации сердечных гликозидов в крови больного
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ СЕРДЕЧНЫХ ГЛИКОЗИДОВ В КРОВИ БОЛЬНОГО путем экстракции сердечных гликоэидов из плазмы крови дихлорметаном с последующим добавлением к экстракту суспензии донорских эритроцитов и инкубации, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повьшения точности способа, инкубацию проводят в течение 40 мин, после чего добавляют стандартный раствор АТФ с люциферин - люциферазной системой в соотношении 1:3, рассчитывают скорость распада АТФ по формуле V г где V - скорость распада АТФ в ё НМОЛЬ/МИН, К - количество АТФ в начале ре (Л акции; К,, - количество АТФ в конце реакс ции; t - время реакции и графически определяют концентрацию сердечных гликозидов в зависимости от скорости распада АТФ. 00 --1
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК
„„Я0„„118 080
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
H ABTOPGH0MY СЗИДЕТЕХ)ЬСТВУ.
Ч к1 К2
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3659617/13-28 (22) 12,08.83 (46) 23. 10.85. Бюл. Ф 39 (71) Ижевский государственный медицинский институт (72) В.В.Трусов, А.А.Зеленин, P.Á.ÊóðàøâHëè и Г.А.Шервашидзе (53) 615.711.5(088.8) (56) Gjerdrum К. Determination of
digitalis in blood. — In: In vitro
procedures with radioisotopes in
medicine. — Uiena, 1970, 167-174.
Lowenstein S.M. — А method for
measuring plasma lewels of digitales
glycosides. — Circulation, 1965, 31, 228-233. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ СЕРДЕЧНЫХ ГЛИКОЗИДОВ В КРОВИ
БОЛЬНОГО путем экстракции сердечных гликоэидов из плазмы крови дихлорметаном с последующим добавлением к (gi)4 G 01 N 33/48 // С 01 N 33/15 экстракту суспензии донорских эритроцитов и инкубации, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, инкубацию проводят в течение 40 мин, после чего добавляют стандартный раствор АТФ с люциферин — люцифераз-. ной системой в соотношении 1:3, рассчитывают скорость распада АТФ по формуле. где V — скорость распада АТФ в нмоль/мин;
К„ — количество АТФ в начале реакции;
K, — количество АТФ в конце реакции;
t — время реакции и графически определяют концентрацию сердечных гликозидов в зависимости от скорости распада АТФ.
Кт
V = = 30 нмоль/мин, где V — скорость распада АТФ в нмоль/мин, К вЂ” количество АТФ в начале ре1
25 акции, К, — количество АТФ в конце реакции. — время реакции.
По значениям скорости распада АТФ в зависимости от стандартной концентрации сердечных гликозидов строят калибровочный график и определяют концентрацию сердечных гликозидов.
Составитель Л,Шилина
Техред M.Надь Корректор М.Демчик
Редактор Г.Волкова Заказ 6543/50 Тираж 896 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
1 11870
Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, и может быть использовано в клинической лабораторной диагностике.
Целью изобретения является ускорение и повышение точности способа.
Пример. У больного берут 2 мл крови. в пробирку с ЭДТА, затем кровь центрифугируют, Процесс экстракции сердечных гликозидов в плазме 10 донора со стандартными концентрациями сердечного гликозида и в плазме больного производят путем воздействия на плазму дихлорметаном в соотношении 1Й .Содержимое пробирок сме- 15 шивают миксером и центрифугируют 5:5,5 мин на 1000 y . Затем 0,4 мл нижнего слоя смеси из пробирок переносят в пробирки 70х10 мм и выпаривают на водяной бане при 50-62 С в течение 15 мин. После этого добавляют 0,1 мл суспензии донорских эритроцитов, отмытых в физиологическом растворе, осторожно смешивают и о инкубируют в термостате при 37 С в течение 40 мин. По окончании инкубации субстрат охлаждают при 4-6 С в течение 5 мин, а затем вновь повышают до 24-25 С. Отдельно в полистиреновые пробирки берут 0,4 мл стандартного раствора АТФ в трисЭДТА буфере (О, 1 М, рН 7,75), при этом получают раствор АТФ, разбавлен80 2 ный в 4 раза с концентрацией
10 моль/л и добавляют 0,2 мл "ATP
-1
Monitorig Reagent" (люциферин — люциферазная система). Проводят контрольное измерение АТФ на люминомет,ре-1250 (IKB Nallac), а затем вводят эту смесь в пробирки с донорскими эритроцитами, прошедшими инкубацию со стандартами сердечного гликозида и с пробой больного. Через 15 мин после смешивания реакцию останавливают путем центрифугирования на
1000 в течение 3 мин. Проводят измерение на люминометре-1250. При использовании указанного люминометра
1 мВ потока света соответствует
О, 1 нмоль АТФ, Рассчитывают скорость распада АТФ ло формуле
