Способ получения 1-нитро-9-оксиалкиламиноакридинов или их хлоргидратов

 

1, Способ получения 1-нитро-9-оксиалкиламиноакридинов общей формуN02 МН-СН(СН2)лОН лы где при R - Н, п 1, 2 или 3; при R - CgHy, п 1, или их хлоргидратов, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что раствор 1- -нитро-9-феноксиакридина в феноле об рабатывают оксиалкиламином или его хлоргидратом при их .соотношении . после чего нагревают до 60-100 С, полученную смесь охлаждшот и выливают в избыток неполярного органического растворителя, выпавший осадок о.тфильтровьшают и кристаллизуют из безводного полярного органического растворителя или их смеси с последующим S выделением целевого продукта в свободном виде или в виде хлоргидрата. W 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве неполярных органических растворителей используют этиловый эфир или бензол а S в качестве полярных растворителей при-j меняют метанол, этанол или их смесь.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„119 (51)4 С 07 D 219

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТ,Ф

I

1 к

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3270449/23-04 (22) 14.04.81 (31) P-223740 (32) 23.04.80 (33) PL (46) 15.11.85. Бюл. 9 42 (71) Политехника Гданьска (Р .) (72) барбара Высоцка-Скжэльа, Анджэй Льэдуховски и Чэслав Радзиковски (и) (53) 547. 835 ° 3. 07 (088 ° 8) (56) Патент Великобритании N 1093844; кл. С 2 С, 1967.

Naterue Medice Polone, 1976 (8), 237-251. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 1-НИТРО-9-ОКСИАЛКИЛАИИНОАКРИДИНОВ ИЛИ ИХ ХЛОРГИДРАТОВ. (57) 1, Способ получения 1-нитро-9-оксиалкнламиноакридинов общей формум ян — сн(сн,)„он

l где при R — Н и 1, 2 или 3» при R — С2Н, и 1, или их хлоргидратов, о т л и ч аю шийся тем, что раствор 1-нитро»9-феноксиакридина в феноле обрабатывают оксиалкиламином или его хлоргидратом при их .соотношении 1:1 после чего нагревают до 60-100 С, полученную смесь охлаждают и выливают в избыток неполярного органического растворителя, выпавший осадок от— фильтровывают и крнсталлизуют из безводного полярного органического растворителя или их смеси с последующим выделением целевого продукта в сво» у бодном виде или в виде хлоргидрата.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а— ю шийся тем, что в качестве неполярных органических растворителей используют этиловый эфир или бенэол а в качестве полярных растворителей применяют метанол, этанол или их смесь.

1192620

Изобретение относится к области получения новых производных акридинового ряда, а именно 1-нитро-9-оксиалкиламиноак1 идинов общей формулы

1 10 ЪН вЂ” СН(СИИ 1 0Н

К где при R — - Н, и 1, 2 или 3; при R — С Н, n или их хлоргидратов, обладакщик противоопухолевой активностью.

Цель изобретения - разработка на основе известного метода сцо-.оба получения новых соединений, обладающих ценными фармакологическими св. йствами.

Пример 1. 6,4 г 1-нитрз-9-феноксиакридина растворяюз в 20 г фенола, добавляют 2 г хлоргидрата

2-аминоэтанола и подогревают при о

80 С в течение 40 мин. После охлаждения смесь, полученную в результате реакции, разбавляют эфиром и мецленно выливают в излишек сухого эфира, подкисленного эфирным раствором хлористого водорода. Выпавший осадок фильтруют и промывают сухим эфиром и кристаллизуют из безводного этанола. Получают темно-желтые кристаллы хлоргидрата 1-нитро-9-(2-гидроксио этиламино)акридина с т.пл. 170 С с разложением. Выход 91%.

Хромйтографический анализ.

На нейтральной окиси алюминия

60F254 (Merck).ïî системе бензол: ацетон: метанол (3» 1: 1) R g О, 6.

На силикагеле (Merck) по системе бутанол:уксусная кислота:вода (4:1:1)

Ы 0,45.

Вычислено, : С 56,47; Н 4,42.

N 13,17., С) Н 4М. О С1

Найдено, : С 56,44; Н 4,40

N 13,03.

Пример 2. 3,16 r 1-нитро-9-феноксиакридина растворяют в

15 мл фенола, добавляют 1 r хлоргидрата З-аминопропанола, после чего подогревают при 60 С в течение о

0,5 ч, После охлаждения смесь, полученную в результате реакции, растворяют в сухом бензоле н медленно выливают в излишек сухого бензола. Выпавший оранжевый осадок фильтруют, несколько раз промывают на воронке сухим эфиром и выкристаллизовывают из смеси этанол/эфир. Таким образом получается хлоргидрат 1-нитро-9-гидроксипропиламиноакридина с т.пл. о

180 С с разложением ° Выход 88%.

Хроматографический анализ.

На нейтральной окиси алюминия (Merck) по системе бензол:ацетон: метанол (3:1:1) Ы = 0,55.

19 HB. силикагеле (Мегс1) по системе бутанол:уксусная кислота:вода (4:1:1)

ВХ = 0,45.

Вычислено, %: С 57,53; Н 4,83;

N 12,58

15 С щН ьОрИаС1

Найдено, : С 57,63; Н 4,97;

N 12,43.

Пример 3. 3,9 r 1-нитро

-9-феноксиакридина растворяют в

20 мл фенола, добавляют 1,1 мл 2-амино-1-бутанола, после чего подогревают в течение 20 мин при 90 С.

Затем смесь, полученную в результате реакции, медленно выпивают в охлажденный эфир, часть растворителя отгоняют. Выпавший осадок выкристал». лиэовался из смеси петролейный эфир бензол, Получено основание 1-нитро-9-гидроксиметилпропиламиноакридина с т.пл. 187 С. Выход 99 . Указанное о основание можно превращать в соответствующие соли с ацидификацией соответ ствующими неорганическими кислотами, например как в примерах 1, 2 и 4, 35 или органическими кислотами, например молочной, лимонной, метасульфокислотой и т.п.

Хроматографический анализ.

На нейтральной окиси алюминия

4 (Merck) по системе бензол;ацетон:метанол (3:1:1) Rf = 0,7.

На силикагеле (Merck) по системе бутанол:уксусная кислота:вода (4:1:1)

Rf = 0,6

Вычислено, : С 58,67; Н 5,21;

N 19,08.

Сп H(e О. И. С1

Найдено, : С 58,80; Н 5,ll;

N 11,84 °

50 Пример 4. 6,4 r 1-нитро»9-феноксиакридина растворяют в

30 мл фенола, добавляют 2,4 r хлоргидрата 4-амино-l-бутанола, после чего подогревают в течение 20 мин при о.

55 100 С. После охлаждения смесь, полученную в результате реакции, выливают в излишек (1,5 л) сухого охлажденного эфира, 1192620

Выпавший оранжевый осадок выкристаллизовывался из метанола с добав.! кой эфира. Получен хлоргидрат 1-нитро-9-(1-гидроксибутнло)аминакридина с т.пл. 168 С с разложением. Выход

90Х..

Хроматографический анализ.

На нейтральной окиси алюминия (фирмы Мерк) по системе бенэол:аце- тон:метанол (3:1:1) Rf = О,65.

На силикагеле (фирмы Мерк) по системе бутанол:уксусная кислота:вода (4:1:1) Rf 0,50.

Вычислено, Х: С 58,671 Н 5,21;

N l2,08.

Сп Н1в Оэ@зС1.

Найдено, Х: С 58,69; Н 5,20;

N 12,16.

Группа соединений согласно изобретению обладает противоопухолевой активностью, которая является подобной, а в большинстве тестов даже более высокой по сравнению с известными соединениями этой группы. Кроме того, предлагаемые соединения не проявляют рвотных .свойств, а также не влияют на периферическую кровь.

Противоопухолевые свойства рассматриваемой группы соединений, а именно 1-нитро-9-гидроксиалкиламиноакридинов, многократно исследовались описанными тестами in vitro u in vivo.

Метод in vitro.

Торможение прорастания семян сердечника - тест роста.

На чашке Петри диаметром 80 мм помещают по возможности равномерно 20

25 семян сердечника на двух слоях промокательной бумаги. Затем на чашки ,наливают 30 мл раствора исследуемого соединения с концентрацией 1 мг/мл, а на контрольные чашки - дистиллированную воду. Чашки инкубируют в те» чение суток при 20-30 С, после чего измеряют длину ростков.

Эффект торможения выражается в процентах уменьшения средней длины исследуемых ростков по сравнению с контрольными.

Процент торможения прорастания семян сердечника для рассматрнвае мой группы соединений 87-94Х, Метод Миямура праховые клетки

Эрлиха) Метод заключается в определении торможения активности-дегидрогеноз раковых клеток Эрлиха (5xl0 в мл) исследуемыми соединениями, мерилом" чего является диаметр зоны невосстановленного окислительно-восстановительного красителя (ресазурина), образовавшийся вокруг цилиндра с 1Хным раствором исследуемого соединения после пятичасовой инкубации при

87 С.

Соединения, для которых эона торможения составляет не менее 20 мм, 1б считаются активными.

Рассматриваемые соединения выявляют исключительно высокую активность в этом тесте, причем она составляет в среднем 31-33 мм.

15 Тканевая культура (линия КВ), Исследования проводились по методу тканевой культуры, разработанному Иглем и Фоули, модифицированному Смитом и его сотрудниками.

Опыт проводился на опухолевых клетках человеческого происхождения с так называемой линии КВ с использованием питательной среды Игла с добавкой 10Х-ной телячьей сыворотки.

Тесты производились в пробирках, прививаемых 4 мл взвеси (40-80 тыс. клеток), что равнозначно с 40-80 мг клеточного белка.

Рост культуры определялся прирос том клеточного белка; Это определение проводилось фотометрически с использованием реактива Фолина-Сикаль тана методом, разработанным Оямой и др °

Одновременно с прнвитием пробирок клетками добавлялось 0 9 мл водного раствора исследуемого еоединения таким образом, чтобы концентрация составляла: 100; 10; 1 0,1; 0,01;

0,001; и 0,0001 мг/мл питательной среды. Пробирки инкубировались при

37 С. По истечении 72 ч определялся прирост клеточного белка в пробирках, в которые добавлялся препарат, а также в контрольных пробирках.

Каждая концентрация исследовалась параллельно но двум пробам.

Определялись такие концентрации вещества, при которых обеспечивается торможение прироста клеточного белка на 50Х - LD ä ипи ЕЭ 0.

Процент торможения рассчитывался по формуле:

55 Остаточное количество клеточного белка по контролю — концевое количество белка клеточного в тесте

Х торможения )00

92620 6

С-934, т.е. l»нитро-9-гидроксибутиламинакриди:.а, при дозах 0,2-0,4 процент ..торможения составлял 45-60.

Фармакологические исследовАния.

Проводились исследования токсичности острой и кумулятивной, а также основных фармакологических свойств в следующих тестах; острая токсичность и определение максимально пере10 носимой дозы; кумулятивная токсич- . ность; влияние на систему кровообращения; влияние на гладкие мьппцы; влияние на центральную нервную систему; иммуносупрессивное действие.

15 Острая токсичность (LD ) и максимальная переносимая доза (MTD) определялись на крысах Wister, кроликах (обоего пола) и на мышах Albino

Swiss (самки)

20 . Соединения вводились в брюшину (у всех трех видов животных) и в же- . лудок (у крыс и кроликов), Продолжительность наблюдения составляла

48 ч. В табл. 1 приведены следующие значения LD 5o MTD при введении соединения С-857.

Та блица 1

Ilopoïûòíûå животные оральное ведение

So, ?"?ТПу

/кг мг/кг

23,4 15

7,5 69,1 30

7 5 69,0 20

9,2

Крыса

Кролик

ll 4 е-45

Исследования in vivo в этом тесте рассматриваемой группы соединений проводились многократно. Так, напри- 0 мер, для препарата с кодовым символом

С-857, т.е. 1-нитро-9-гидроксиэтнламинакридина, установлено торможение роста саркомы Sa-180 в зависимости от следующей дозы: при дозах 0,2-0,8 мг/5

/кг процент торможения составлял соответственно 44»86. Подобным образом для препарата, обозначенного символом

S 11

Остаточное количество клеточного, белка по контролю — начальное количество клеточного белка по контролю.

В соответствии с общепринятыми нормами активными считаются такие соедИнения, в которых LDp/ЕР .о

1 ?ц м/мл, Соединения I тестировались этим методом несколько раз, Например, ЕР 0 для одного препарата этой группы,с кодовым символом С-857, т,е. 1-нитро-9-гидроксизтиламинакри дина, составляет 0 0007 р г/мл.

Иетод in vivo.

Торможение роста мьппиной сарко-; мы Крокера (Sa-180).

Для опытов применялись мыши в возрасте около 3 мес. весом около

25 r. Их прививали срезом опухоли (Sa-180) и делили на группы: одну контрольную - 18 штук и две до четырех групп "леченных" по восемь штук каждая.

Исследуемые соединения в соответствующих дозах вводились в брюшину после предварительного определения максимально переносимой дозы (NTD). В качестве оценки противоопухолевого действия исследуемых соединений, принималась процентная разница между средними весами опухолей

Контрольных мышей и мьппей, получающих препарат, с учетом при этом токсических эффектов исследуемого соединения, Оценка токсичности охватывает потерю веса леченных животных по сравнению с контролем, число павших животных с контролем, а также микроскопические гистопатологические иссл дования. Активными считаются такие соединения, которые по крайней мере дважды тормозили рост опухолей более

40%, не вызывая при этом ни падежа животных(2 штук), ни средних потерь веса()4 r)..умулятивная токсичность, Опыт проводился на нескольких группах крыс (по 20 шт.), которым исследуемое соединение вводилось в течение 14

14 дней в дозах, представляющих собой

1/100 ?Л, Затем животные умерщвлялись, после чего производилась микро" скопическая оценка мышечных органов и брюшной полости, Следует полагать, что исследуемый препарат кумулируется в минимальной степени — смертельность животных, получавших лекарство, по сравнению с контролем составила около 5%. Не наблюдались также ни потеря веса животных, ни изменения в их внешнем виде и поведении, 1192620

Таблица 2

0,2

0,3

0,6

О, 006 (He la) 67

0,0007 (Hela ) бб

С-857

92 31

0,2

0,4

0,6

С-867

92 24 0,001

0,2

0,4

0,8

С-933

75 21

0,001

0,2

0,4

60

0,8

С-934

84 28 0,005

0,2

0,4

100

0,8

ВНИИПИ Заказ 7180/61 Тираж 383 Попписное

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

Исследование, касающееся влияния на систему кровообращения и гладкие мышцы, проводилось на крысах, которым вводилось соединение С-85j в дозах от 0,01 до 20 мг/кг. Препарат не вызывал заметных изменений исследуемых сердечно-сосудистых параметров, т.е. не влиял на артериальное давление, на частоту деятельности сердца, не моделировал кривой ЭКГ и !О не влиял на частоту и амплитуду дыхания. Лишь в самой высокой дозе (20 мг/кг) препарат выявлял слабое спазмолитическое действие на кишку и мочевой пузырь крысы in situ. 15

Препарат не выявлял заметного и направленного действия на центральную нервную систему. В дозах 1/201/2 LD он не выявлял болеутоляющего и антиконвульсивного действия и су- 20 щественного торможения подвийости, но наблюдалось незначительное влияние на гексобарбиталовый наркоз.

Ледакрин (Nitracrine) 78 36 0,006

Препарат лишь после многократного введения в дозах около 1/5-1/10 LD

Исследование подострой токсичности препарата С-857 проводилось на кроликах, которым в брюшину впрыскивалая препарат в дозе 1/120 LD>0.

После 21 дня было установлено незначительное снижение абсолютного веса селезенки и печени, а также рост числа лейкоцитов. Остальные гематологические определения не отличались от определений, выполненных у нормаль" ных животных.

В табл, 2 представлен сопоставительный анализ биологических исследований,Ледакрина с соединениями 1 при внутрижелудочным введении препарата °