Способ получения производных дульцита или их солей

 

Способ получения производных дулыцита общей формулы СН -СН-СН-СН-Ш-СНп Х I I X о . ORi OR О где -f) - карбоксипропионил; или I - Д) - карбоксипропионил; или или R, - /Ь - Rj - Э (,-Р - R -р, - ацетил, карбоксипропионил; карбонетоксипропионил; карбоксИпропионил; фенилпропионил, g иди их солей, отличающий - с я тем, что соответствующий бензиловый эфир подвергают расщеплению действием водорода в присутствии в качестве катализатора палладия на угле при содержании палладия от 1,5 до 3,5% в безводном метаноле при 20-25 0. СО

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТМЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (SI) 4 С 07 D 303/16, 407/12//

A 61 К 31/335

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ " н патенту

СН вЂ” СИ вЂ” CH — CH — CH CH

\,,г б

О 0 ОР,, О где R„H R илн R „- Ь

R или R, — Р

Rg-P или R, — P

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3350453/23-04 (22) 03,11.81 (31) 2649/80 (32) 04.11.80 (33) HU (46) 15.01.86. Бюл. М- 2 (71) Хиноин Дьедьсер Еш Ведьесети

Термекек Дьяра PT (HU) (72) Илона Элекеш, Ласло Инштиториш, Кальман Медзихрадски, Ласло Етвеш, Хедвиг Медзихарадски, Каталин ди .Глериа, Янош Шугар, Жужан-ra Шомфаи-Релле, Шандор Экхардт, Иван Хиди и Шандор КерпельФраниуш (HU) (53) 547,427.3.07 (088.8) (56) Вейганд-Хильгетаг. Методы эксперимента в органической химии. М.:

Химия, 1968, с.368-369. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

ДУЛЪЦИТА ИЛИ ИХ СОЛЕЙ. (57) Способ получения производных дульцита общей формулы карбоксипропионил1 карбоксипропионил 1 — ацетил, карбоксипропионил1 карбометоксипро пио нил; карбоксипропионил; фенилпропионил, или их солей, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что соответствующий бензиловый эфир подвергают расщеплению действием водорода в присутствии в качестве катализатора палладия на угле при содержании палладия от 1,5 до 3,57. в безводном метаноле при 20-25 С.

1 2057 69 2

Изобретение относится к способу получения новых производных гекситов, а конкретнее новых производных дульцита, содержащих свободные карбоксильные группы, или, их солей, обладающих способностью подавлять раз витие злокачественных опухолей, Цель изобретения — получение новых производных ряда дульцита, содержащих свободные карбоксильные группы, обладающих усиленным подавляющим развитие злокачественных опухолей действием.

Пример 1. Получение катали-.

L затора палладий на угле.

А. О, 2 г хлористого палладия растворяют в 2 мл дистиллированной

5,7 н. хлористоводородной кислоты при нагревании, раствор разбавляют водой в пятикратном размере, затем добавляют 0,9 г активированного угля ("Mepx", для анализа) и суспензию кипятят в течение нес— кольких минут, Суспензив охлаждают, а затем подщелачивают (до рН 9), используя 207.-ный водный раствор гидроокиси натрия, встряхивая так, чтобы раствор над твердым веществом стал совершенно бесцветным.

Б, 0,2 г хлористого палладин растворяют в 2 мл дистиллированной

5,7 н.хлористоводородной кислоты при нагревании, раствор раэбанл.яют 8(мл дистиллированной воды и до= бавляют 9,0 г активированного угля ("Мерк"„. для анализа). Полученную суспензию подщелачивают описанным в пункте А путем.

Суспензии, полученные в соответст-. вии с методиками по пунктам А и Б, тщательно перемешивают, катализатор отфильтровывают, промывают до устранения хлоридов на фильтре и после этого промывают 200 мл 1 .-ного раствора уксусной кислоты. Мокрый катализатор сушат над концентрированной серной кислотой в эксикаторе. Получают катализатор, содержащий 2,4Е палладия на угле, Пример 2. Получейие 1„ 2—

5, 6-диангидро-3,4-бис(-карбокси,ilpoBHoHHJI) -дульцита.

1,6 г (3 ммоль) 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-(р-бензилоксикарбонилпро" пионил)-дульцита растворяют в 150 мл ухого метанола, к раствору добавляют 0,3 г катализатора, приготовлен1 лиза методом тонкослойной хроматогра20

ЗО ного по примеру 1, и полученную смесь гидрирувт до отбора теоретического количества водорода (1,5 ч}.

Катализатор отфильтровывают, раствор испаряют в вакууме, получающееся белое кристаллическое вещество суспендирувт в диэтиловом эфире и твердые частицы отфильтровывают. Полученное вещество подвергают перекристаллизации из смеси диэтилового эфира и петролейного эфира. Получают

1,0 г 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-(P карбоксипропионил) -дульцита; выход

967, T.ëë, 138-139 С. По данным анафии (йf = 0,15, с использованием смеси (9:2) бензола и метанола и проявлением И -нитробензилпиридинои продукт однороден.

Вычислено,7.: С 48,78; Н 5,73;

О 46,49.

-

Найдено,%: С 48,35; Н 5,25;

0 46,60, Эквивалентная масса: вычислено

173, найдено 180.

ИК-спектр: 3350 см (карбоксил), 1235 см (эпокси), бензильные и гидроксильные полосы отсутствуют, Растворимость: хорошо растворимо в спирте и тетрагидрофуране, плохо растворимо в диэтиловом эфире и воде, Пример 3. Получение 1,2-5,6диангидро-3-ф-карбоксипропионил)4-ацетилдульцита, 3,78 r (10 ммоль) 1,2-5,6-диангидро-3-(P-бензилоксикарбонилпропионил) -4-ацетилдульцита гидрируют аналогично примеру 2 до прекращения отбора водорода. Катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме, кристаллический остаток подвергают перекристаллизации из смеси тетрагидрофурана и этилацетата.

Полу;авт 2,5 r (выход 887.) 1,2-5,6диангидро-3-(P-карбоксипропионил)—

4-ацетилдульцита; Т.пл. 134 С. По данным тонкослойной хроматографии

Я 4 = 0,2 или 0,6 с использованием смеси (6:4) этилацетата и циклогексана или смеси (8:2) бензола и метанола соответственно и проявлением. -нитробензилпиридином) продукт однороден.

Вычислено,Ж: С 50,00; Н 5,59;

0,44,40, С„, Н„о

1205769

1О

55

Найдено,X: С 49,48; Н 5,26;

О 44,70.

Эквивалентная масса: вычислено (288 МВ 288,26), найдено 296, Пример 4. Получение 1,2-5,6диангидро-3-(P-карбоксипропионил) -4(P -карбометоксипропионил)-дульцита.

4,50 r (10 ммоль) 1,2-5,6-диангидро-3-(15-бензилоксикарбонилпропионил)-4(P-карбометоксипропионил)— дульцита гидрируют аналогично примеру 2 до отбора расчетного количества водорода. Катализатор отФильтровывают,и растворитель удаляют из фильтрата. Получают 3,1 (выход

86X) кристаллического 1,2-5,6-диангидро-3-(P-карбоксипропионил)-4(p -карбометоксипропионил)-дульцита;

Т.пл, 87-89 С. По данным тонкослойной хроматографии (К 1= 0,25 или

0,4, с использованием смеси (6:4) этилацетата и циклогексана или смеси (8: 2) бензола и метанола соответственно) продукт однороден.

Вычислено,l: С 49,72; Н 6,12;

0 44,16. qg Н О,о

Найдено,X: С 49,87; H 5,39;

0 43,91.

Эквивалентная масса: вычислено

362 (ИВ 362,34), Найдено 363.

II р и м е р 5. Получение 1,2-5,6диангидро-3(P-карбоксипропионил)—

-4-(p -фенилпропионил) -дульцита, 4,68 г (10 ммоль) 1,2-5,6-диангидро-3-(P бензилоксикарбонилпропионил)—

4-(p, ôåíèëïðîïèoíèë)-дульцита гидрируют аналогично примеру 2. Катализатор отфильтровывают, и растворитель удаляют иэ фильтрата, Получают 3,3 r (выход 84X).кристаллического 1,2-5,6-диангидро-3-(8-карбоксипропионил)-4-(p -фенилпропионил)— дульцита, Т.пл. 80 С. По данным тонкослойной хроматографии(К =

= 0,3 или,0,7 с использованием смеси (6:4) этилацетата и циклогексана или смеси (8:2) бензола и метано.— ла соответственно) гродукт однороден.

Вычислено, : С 60,31; Н 5,86

О 33,83.

С„Н„О, Найдено,/: С 60,60; Н 5,49;

О 34,50.

Эквивалентная масса: вычислено

373(ИВ 378,33), найдено 390.

Пример 6. Получение триссоли 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис(P-карбоксипропионил) -дульцита, 3,46 r (10 ммоль) 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-(В-карбоксипропионил)— дульцита растворяют в 20 мп 96% этанола, осторожно нагревая, раствор охлаждают и добавляют раствор

l,2 кг (10 ммоль) трис-(гидроксиметиламино) -метана в 10 мл воды. После отстаивания в холодильнике кристаллы отфильтровывают и высущивают в эксикаторе. Получают 3,7 r (выход 80 ) трис-соли.

Пример 7. Получение динатрий-1,2,-5,6-диангидро-3,4-бис-(Ðкарбоксипролионил) дульцита 2Н О.

246,29 r (1 моль) 1,2-5,6-диангидро-3,4-бис-(P-карбоксипропионил)дульцита, растворяют в 3360,3 мл (5 вес.X) бикарбоната натрия с постоянным перемешиванием при комнатной температуре до тех пор, пока не прекратится выделение двуокиси углерода, Полученный раствор отфильтровывают и лиофилизуют. Получают 426,29 r (l моль)(100%1 динатрий-1,2-5,6диангидридо-3,4-бис-(p -карбоксипропионил) -дульцита 2Н О. В стабильном негигроскопичном (при комнатной температуре) веществе определено число колец, которое составляет 99 .

ИК-спектр: 1725 см (сложный, эфирный карбонил), 1680 см (кислотный карбонил) . Характерная для кислотных гидроксилов полоса в 35002800 см отсутствует.

Вычислено,7.: С 39,447; Н 3,783.

С.ц К 60 о х<а 2Н О

Найдено, .: С 39,440; Н 3, 780.

Пример 8. Аналогично примеру 1 получают катализатор палладий на угле, но используют 0,25 г хлористого палладия. В результате получают катализатор с содержанием 1,5 . палл адия .

Пример 9. Аналогично примеру 1 получают катализатор, но используют,0,58 г хлористого палладия.

В результате получают катализатор с содержанием 3,5 палладия.

Пример 10. Аналогично примеру 2 получают 1,2-5,6-диангидро-3,4бис-ф-карбоксипропионил)-дульцит с использованием катализатора по примеру 8, Выход целевого продукта составляет 0,85 r (81,6X).

Ф 1205

Пример 11. Аналогично примеру 2 получают 1,2-5,6-диангидро-3,4бис-(Ркарбоксипропионил) -дульцит, используя катализатор примера 9. Вы" ход целевого продукта составляет 5

0,79 r (75,81 ° ).

Полученные соединения обладают более сильным подавляющим развитие злокачественных опухолей действием по сравнению fQ с известными производными дуль- цита, не имеющими свободных карбоксильных групп, например, 1,2-5,6диангидро-3,4-диацетилдульцитом (А ) и 1, 2-5, б-диангидро-3,4-бис-(/3-кар- 15 бометоксипропионил) -1дупьцитом (В ) .

Результаты испытаний приведены ниже.

Оценены терапевтические свойства следующих соединений: 20

А = .1,2-5,6-диангидро-3,4-диацетилдульцит.

В = 1, 2-5, б-диангидро-3,4 -бис(P -карбоксипропионил) -дульцит, С l,2-5,6-диангидро-3,4-бис-(pjфенилпропионил) -дульцит.

С-2 = 1,2-5,б-диангидро-3,4-бис." (Д -карбоксипропионил) -дульцит.

С-4 = 1,2-5,6-диангидро-3-(ркарбоксипропионил) -4-ацетилдульцит.

С-5 = 1,2-5,6-диангидро-3-(/)— карбоксипропионил -4-(P -карбометоксипропионил)-дульцит.

С-б = 1,2-5,б-диангидро-3-(P карбоксипропионил) -4- Р-фенилпропионил) -дульцит.

Указанные соединения, где А,B и С являются дисложными эфирами

Ь в 3,4-положении 1,2-5,6-диангидродульцитола (ДАД), не содержат никаких св ободных карбоксильных групп. Соединения С-2, С-4,,С-5 и С-6 также являются дисложными эфирами в 3,4-положении ДАД, но соединение С-2 содержит две, соединения С-4, C-5 и С-6 содержат одну карбоксильную группу °

Осуществлены,следующие,.исследования: а, Усвоение энзима, б. Тест на токсичность, в. Определение дозовой зависимос-. ти ингибирования роста опухоли, гематоксичности и летальных эффектов для близких соединений, полученной отдельно на одинаковых моделях.

769 б

r. Терапевтические индексы, полученные на различных твердых способных к трансплантации опухолях грызунов, д . Ингибирование роста опухоли в твердой системе Саркома 180; влияние отдельной и повторяемых инъекций. е) Мутагенность.

Полученные экспериментальные результаты представлены в табл.1-6. а. Усвоение знзима.

Соединение В пытались превратить в соединение С-2 с помощью энзимного гидролиза при следующих условиях;; время 0,5,1,0, 2,0, 4,0, 6,0, 24,0 ч, температура 37 С; буфер

1/15 М фосфат, Энзим: химотрипсин, трипсий, ацилаза 1, ацилаза П, Согласно оценке при вышеуказанных условиях все сложноэфирные связи соединения В расщепляются с одинаковой скоростью. Следовательно, метиловый сложный эфир не может быть се/ лективно разложен и трансформирован 1 в кислотную форму. б. Острая токсичность, В табл.l приведены данные по острой токсичности соединений.

Аб определяли на ноРмальных самцах мыши Sviss весом 27-31 г. После одной инъекции группа из 6 мышей при одной дозе была прослежена в течение 21 дня.

Ю„ определяли на крысах Мз1аг

Walker, больных раком. Инъекции лекарства давали через 24 ч после трансплантации опухоли группе из б крыс. и вели наблюдения в течение

10 дней.

Из данных табл.1 видно, что соединение С-2 наименее токсично из всех близких по структуре соединений, как для мышей, так и для крыс. в. Дозовая зависимость ингибирования роста опухоли, гематоксичности и летальных эффектов для близких соединений, полученная отдельно на одинаковых моделях.

Метод. Самцам крысы Wistar лекарства были введены через 24 ч после заражения 2 х 1От клетками Walker °

Эффективность определяли по дозам, вызывающим 502-ное ингибирование опухоли при взвешивании на десятый день. Дозы, приводящие к 50Ж-ному уменьшению гранулоцитов, оцененному на четвертый день, служили в каТаблица

Лекарство

ЛР„дг:.я ца мыши

SMissy мг/кг е. Отсутствие мутагенностч соединения С-2 в анализе салмонелла/микро сома.

Все испытуемые производные алкилнрующих сахарных спиртов эа исключением С-2 были мутагенны в штаммах

ТА 1525 и ТА 100 по результатам анализа салмонелла/микросома. Даже с использованием микросомных энзимов, полученных не только иэ печени крысы, но также из легкого крысы, почки мыши или печени хомяка, соединение С-2 не проявляет мутагенности к штаммам ТА 1535 и ТА 100. Соедине.ние С-2 также не проявляло мутагенности к штаммам ТА 1537, ТА 1538 и ТА 98 н присутствии или отсутствии смеси $ -9, полученной из печени крысы.

25., 5

52

I50

190

С-2

660

105

С-4

180

126

С-5

235

146

С-6

210 честве основы для сравнения гематок сичности. Отношение минимальной летальной дозы (hD, ) к минимальной эффективной дозе (ME3 = ED> ) рассматривали как терапевтический индекс. Результаты приведены в табл.2.

Согласно табл.2 соединение С-2 активно против опухоли н такой же . доэовой области, как производные близких по структуре соединений

А, В и С (Е Р5„= 13-1 7 мкмоль/кг), в то нремя как соединение С-2 более чем в дна раза менее токсично, чем все другие вещества, укаэанные здесь. Следовательно, терапевтический индекс С-2 н два раза предпочтительнее, индекса любого другого члена группы.

r. Терапевтические индексы. д. Ингибирование роста опухоли в твердой системе Саркома 180; влияние отдельной и повторяемых инъекций, Метод. Небольшие образцы твердой Саркомы 180 были инокулированы на кожу самца мьш и Swiss. Интраперитональное применение лекарства к группе из шести животных. начали на следующий день, на II-й день опухоли были удалены для оценки. Данные приведены н табл.4.

205769

Мутагенность соединений А, В и С представлена в табл. 5 и 6.

Согласно эксперименту соединение С-2 оказалось немутагенным, так

5 как концентрация соединения С-2 вплоть до -10 " микрограмм/пластинка не уменьшает числа бактериальных клеток, произрастающих в нормальной среде. Однако, соединение В ншзы»

t0 вает 10-14-кратное увеличение числа бактериальных клеток, произрастающих в нормальной среде.

С другой стороны, соединение В вызывало IO-14»êðàòíîå увеличение

15 числа ренерантных пластинок, в то время как высокая концентрация 10 микрограмм/пластинка, как было найдено, является токсичной.

Сравнения токсикологическнх свойств и фармакологических данных таблиц и мутагенности, экспериментон по усвоению энзимов видно, что свободные карбоксильные группы в соединениях С-2, С-4, С-5 и С-6 проявляют такие биологические свойства молекул, которыми не обладают молекулы, не содержащие свободных карбоксильных групп.

1205769

Т а б л и ц а 2

Исследование доэовой зависимости ингибирования роста опухоли, гематоксичности и летательных эффектов

Белые

Ованной

Е14,—

Лимф. /ES

Гран,, мг/кг

5,6

17

2595

1,3

33

3,6

28

12,5

22

110

190

С-2

6,4

35

5,5

105

С-5

50

5,7

126

С-б

8,2

70

8,5

146

Ф .Терапевтический индекс, указанный в Декларации относительно соединений А.и С-2.

Табл ица 3

Терапевтические индексы, полученные на различных твердых трансплантируемых опухолях грызунов

Лекарс во

Терапевтический анвапо

Ф индекс

11. 1 / %о

er y о45 / ь1

8,5

1,9

15,7 (13) 4,3

2,3-(3,4) 7,4

3,1

8,0

3 5

6,4

2,6

6 5

1,9

С-2 132 38 64 4,8

5,0

5,0

3,8

17,8 2,5

15,2 4,0

4,1

С-6 25 17 16341

+ Величины, указанные в скобках, опубликованы и в тоже время модифицированы в результате повторения экспериментов.

С-4 32

С-5 40 нгибиро- . ание опуоли им пл антио

alker у

Ý90Ы9 г/кг х1 интра" перитонально, ЛВ„,i

/ 19оч4/

Тер инд

Л1) 4о елые имфоциы крови ho

5Мф ° 9

r/êã х14 180х8 интр. интр. D5Oô Е 50 Индексы безо паснос-! ти гранулоциты крови 1150

МТВ/ЕЭ5 Меланома х14 интр.

МТ1)/ED, !

1205769

Таблица4

Лекарст- Ф инъек во Ц11И

2,4

8,7

4,6

60

6,7

5,4

40

400

16,4

С-2

4,3

15Ф7

2,3

А

9,3

8,0

3,5

6,5

4,8

10,5

64

2,5

С-4

25

4,0

15,2

С-5

16,3

4,1

С-6

12,9

Таблица5

Отсутствие мутагенности С-2 в птахах ТА !535 н ТА 100

ТА 100

ТА 1535

9 смесь + 8-9 смесь

PCB

+$9 смесь

-$$9 снес чень: Легкое Почка Печень Печень Печень Легкое

ысы крысы крысы мыши хомя ка крысы крысы

I7 (15) 48

1 277

33 25 13 160 58 278 252 155 233

l0 32

37 28 19 171 137 249 2 13 140 185, 27 28 !5 !90 133 256 222 150 213

12 (12) 41.35 25 22 154 142 284 190 131 72

51 32 43 180 17 265 273 146 255

19 (161 44

36 24 17 149 150 250 251 !65 214

Ф

Данные в скобках нопучеиы после предварительной инкубацин (s- смесь + бактерии +

+ С-2 sa исключением верхней части агара)в течение 30 мин при 37 С. микропрограмм/ пластинка

100 28

1000 30

10000 31

Непрерывно (!спонтанно) 26

13 (17) 33

19 (14) 39

36 (28) 42

Почка!Печень Печень крысы мыши хомнка

13

1205709

Т а б л и ц а 6

Мутагенность соединений А и В

1 стидин +

1535

S-9 смесь

А

226

221

100

47

382

185

1000

227

1011

788

10000

199

1232

1253

Спонтанно

318

217

176

240

100

193

1000

219

10000

31 токсично

Спонтанно

Составитель Н.Капитанова

Редактор К.Волощук Техред И.Асталош

Корректор И, Эрдейи

Подписное

Филиал ППП "Патент", r,Óæãîðîä, ул.Проектная, 4

Заказ 8550/62 Тираж 379

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д,4/5