Способ выделения винкристина

Авторы патента:

ВИЛЬЯМ ЮДЖИН ДЖОНС

C07D519/04 - димерные алкалоиды индола, например винкалейкобластин

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИ4ЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5114С 07 D 519 0

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ .ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТ,Ф

3HLaJ (2i) 2833053/23-04 (62) 2062709/23-04 (22) 19.10.79 (23) 24.09.74 (31) 409?25 (32) 24.10.73 (33) US (46) 23.01.86. Бюл. К - 3 (71) Зли Липли энд Компани (US) (72) Вильям Юджин Джонс (US) (53) 547.233.07(088.8) (56) Патент Венгрии N9 1547 15, кл. ЗОН1-8, опублик. 1963. (14) (57) СПОСОБ ВЬДЕЛЕНИЯ ВИНКРИСТИНА из природного источника, содержащего винкалкалоиды, включающий стадии экстрации целевого продукта, подкисления экстракта кислотой, например серной, промывки кислого экстракта бензолом, подщелачивания экстракта водным аммиаком, экстракции целевого продукта из полученного раствора бензолом, упаривания

„„SU„„12 7 96 А бензольного экстракта, растворение остатка в этаноле, переведения целевого продукта в сульфат, кристаллизации из этанола, переведения в свободное. основание с помощью водного аммиака, колоночной хроматографии на окиси алюминия с последующим выделением целевого продукта или в свободном виде или в виде соли, например сульфата, отличающийся тем, что в качестве источника винкалкалоидов используют Catharan thus

«s«is, экстракцию проводят водой,, подкисленной серной кислотой, перед кристаллизацией целевого продукта в виде сульфата проводят его гельфильтрацию хроматографией на сефадексе в кислой среде с последующей нейтрализацией фракции, содержащей целевой продукт, и экстракцией продукта бензолом, упариванием экстракта и выделением целевого продукта с помощью хроматографии высокого давления при 17-22,8 ати.

1207396

Изобретение относится к усовершенствованному способу выделения винкристина, применяющегося в медицине при лечении лимфогранулематоза.

Цель изобретения вЂ” возможность 5 обеспечения получения целевого продукта с более высоким выходом.

Пример 1. Выделение винкристина.

10 кг сухого остатка Catharan 10

thus roseus экстрагируют три раза, каждый раз в течение 1 ч, 32 объемао ,ми воды при 50 С, подкисленной до значения рН 3,0 добавлением 30%-ной (вес.7. на объем) серной кислотой в 15 качестве экстрагирующей среды. Водные экстракты декантируют с волокнистого материала, объединяют и фильтруют. Фильтрат экстраглруют дважды равными объемами бензола и 2 бензольные экстракты отбрасывают.

Значение рН фильтрата повышают до

6,0 добавлением концентрированной . гидроокиси аммония. Водную фазу при значении рН 6,0 экстрагируют три 2 раза равными объемами бензола. Бензольные экстракты объединяют, концентрируют в вакууме и получают в качестве остатка 57 г сырой алкалоидной смеси.

5 г смеси, полученной таким образом, растворяют в 250 мл 1,0 M цитрата аммония в качестве буфера при значении рН 3,0 и результирующий фильтрат хроматографируют на 600 г декстранового геля (сефадекс С-25 Г) в 5 140 см стеклянной колонке. 0,1 M буфер цитрата аммония (рН 3,0) применяют в качестве подвижной фазы.

Колонку элюируют под давлением в головной части 1,05 кг/см при скорости потока вытекающей жидкости в пределах 10-14 мл/мин. Фракции собирают и идентифицируют как содержащие преимущественно мономерные или димерные алкалоиды с помощью тонкослойной хроматографии. Фракции, которые содержат димерные алкалоиды, элюируют первыми, они содержат под данным тонкослойной хроматографии винбластин, винкристин, лейрозин и винрозидин. Водные фракции, содержащие преимущественно данные димервЂ” ные алкалоиды, объединяют, значение рН довоцят до 7,0 с помощью гидроокиси аммония и результирующий водный нейтральный раствор экстрагируют три раза по 0,5 от его объема бензолом.

З5

40 д5

Бензольные экстракты собирают и фильтруют через безводный сульфат натрия. Концентрирование фильтрата до сухого остатка в вакууме дает

1,0 r смеси димерных алкалоидов.

Смесь растворяют в 7,5 объемах безводного этанола. При этом происходит кристаллизация .пейрозина, которьпл отделяют центрифугированием. Выход составляет 157 мг лейрозина. Верхний слой доводят до значения рН 4,2

3Х-ной этано:."ьной серной кислотой.

Сульфаты остальных димерных алкалоицов выделяются сразу же в виде игольчатых кристаллов и кристаллизацию продолжают в течение двух дней.

Кристаллы отделяют центрифугированием, промывают этанолом и сушат.

Выход составляет 241 мг смеси сульфатных солей винбластина и винкрис.тина с примесью небольшого количества сульфата лейрозина. Соли превращают в соответствуюшие свободные основания растворением в воде, доведением значения рН водного раствора до 8,0 с помощью 14 н. гидроокиси аммония и последующим экстрагированием воцонерастворимых оснований метиленхлоридом. Иетиленхлорицный экстракт фильтруют и растворитель удаляют выпариванием в вакууме. Образующийся остаток хроматографируют на 400 г окиси алюминия (активность

Ш. 200 м /г), с использованием в качестве элюента системы растворителей метилацетат:метиленхлорид:вода (48:51:1). Хроматографирование проводят в колонке иэ нержавеющей стали (8 мм на 7 м) при давлении 17,6вЂ”

22,8 кг/см . Соотношение количества окислил алюминия и смеси алкалоидов составляет приблизительно 2000/1.

Выход элюата контролируют по поглощению при 254 мм, и фракции отделяют в соответствии с максимумами в УФспектр=.. поглощения. Идентифицируют фракции, содержащие преимущественно лейрозин, винбластин, дез-N-метилвинбластин и винкристин. Концентрирование объединенных фракций, содержащих винкристин, до сухого остатка дает 18,7 мг алкалоида. Остаток растворяют в 20 объемах безводного этанола, нерастворимую часть отделяют центрифугированием и доводят значение рН верхнего слоя до 4,2 с помощью 37-ной этанольной серной кислоты, при этом происхоцит кристаллизация винкристинсульфата. Кристал1207396

Составитель Ю.Хропов

Техред A.Áàáèíåö, Корректор Л Патай

Редактор Е.Папп

Подписное

Тираж 3 79

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 8745/61

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 лизацию смеси проводят путем выдерживания ее при комнатной температуре в течение двух. дней. Затем отделяют винкристинсульфат центрифугированием, центрифугат промывают этанолом и сушат в вакууме. Вес полученйого при этом винкристина составляет

12,3 мг (эквивалентно 14,1 мг/кг экстрагированного остатка). Свойства винкристинсульфата, полученного предлагаемым способом, идентичны приведенным в литературе.

Пример 2. 10 г смеси алкалоидов, полученной в условиях примера 1 на стадии, предшествующей хроматографии высокого давления, растворяют в 5 объемах безводного эталона. Значение рН раствора доводят до 4,2 добавлением ЗХ-ной серной кислоты (этанольный раствор).

Смесь сульфатов затравливают винбластинсульфатом. Кристаллизацию смеси проводят выдерживанием ее в течение 48 ч и смесь сульфатов диметральных алкалоидов выделяют центрифугированием. Описанная процедура, сопровождающаяся затем стадией ,гельпроникающей хроматографии с хро-. матографированием на дезактивированной окиси алюминия под высоким давлением, приводит к получению 20,6 мг винкристинсульфата, что эквивалентно 11,8 мг/кг экстрагированного остатка.

Пример 3. Перевод дез-Nметилвинбластина в винкристин.

270 кг сухих остатков Catharan .

thus roseus обрабатывают в условиях примера 1. Фракции, идентифицированные с помощью тонкослойной хроматографии, как содержащее дез-N-метилвинбластин, выделяют с помощью жидкостной хроматографии под высоким давлением и концентрируют в вакууме до сухого остатка. Полученные 7,73 r сырого дез-N-метилвинбластина переводят в винкристин при комнатной температуре добавлением раствора, содержащего 927 мл 987-ной муравьиной кислоты и 154 мл уксусного ангидрида. После завершения реакции, (что устанавливают с помощью тонкослойной хроматографии) реакционную смесь концентрируют в вакууме до сиропа. Концентрат растворяют в 100 объемах воды, а алкалоиды превращают в соответствующие свободные основания экстрагированием водного раствора при значении рН 5,8 метиленхлоридом (троекратным). Концентрирование объединенных метиленхлоридных экстрактов под вакуумом приводит к образованию 7,84 г свободного основания винкристина. Свободное основание далее очищают с помощью жидкостной хроматографии под высоким давлением (14,1-21,1 кг/см ), в колонке 2,5 см»

«730 см из нержавеющей стали с использованием 3200 r нейтральной окиси алюминия (активность 1П-1У) в кавЂ” че"тве адсорбента и смеси этилацетат: метиленхлорид:вода (25:75:0,4) в качестве подвижной фазы. Выход винкристина, полученного после концентрирования до сухого остатка соответствующих фракций, составляет 2,64 г.

Это вещество дважды перекристаллизо3S вывают из этанола повторно хромаЭ тографируют с использованием смеси метилацетат:метиленхлорид:вода (48:51:1) в качестве подвижной фазы, кристаллизуют из метанола и прзвра4О шают в сульфат в этаноле с выходом

1,4 r винкристинсульфата (эквивалентно 5,3 мг/кг экстрагированного остатка) .

Способ получения производных винбластина или их эпимеров // 1138033

Способ получения алкалоидов типа лейрозина // 1128839

Способ получения коньюгата // 1069628

Способ получения производных 4-дезацетилвинкалейкобластин- @ -3-карбоксигидразида // 1061698

Способ получения алкалоидов типа лейрозина или их кислых аддитивных солей // 1055333

Способ получения производных винбластина // 1053757

Способ получения производных димера винка или их солей // 1017172

Способ получения n-формиллейрозина или его солей // 969166

Способ получения виндезина // 906381

Кристаллическая форма винфлунина дитартрата // 2426735

Безводные кристаллические соли винфлунина, способ их получения и их применение в качестве лекарства, и способ очистки винфлунина // 2456291

Способ получения эргоалкалоидов (его варианты) // 1222198

Способ получения производных 0 @ -дезацетилвинка лейкобластин- @ -карбоксигидразида или их солей // 1225490

Способ получения производных сложных эфиров 4- дезацетилиндолдигидроиндолалкалоидов или их солей // 1326196

Способ получения конъюгатов // 1362404

Способ получения производных сложных эфиров 4- дезацетилиндолдигидроиндолалкалоидов или их солей // 1491341

Способ получения конъюгата гидразона // 1561825

Способ получения 4-сукциноил-влб-амида // 1774941

N-содержащие гетероарильные производные в качестве ингибиторов jak3 киназы // 2553681

Изобретение относится к новым N-содержащим гетероарильным производным формулы I или II или их фармацевтически приемлемым солям, которые обладают свойствами ингибиторов киназы JAK, в частности JAK3, и могут найти применение для лечения таких заболеваний, как астма и хроническое обструктивное заболевание легких (COPD). В формулах I или II А представляет собой углерод и В представляет собой азот или А представляет собой азот и В представляет собой углерод; W представляет собой СН или N; R1 и R2, независимо, представляют собой водород, С1-4алкил, галогенС1-4алкил, -CN; R3 представляет собой С1-4алкил, R9-Cl-4алкил, Cy1, где Cy1 необязательно замещен одним или несколькими заместителями R10; R4 представляет собой водород, С1-4алкил, Rl2R7N-С0алкил, где один из R7 и R12 представляет собой водород, а другой представляет собой С1-4алкил или группу R13, которую выбирают из С1-5алкила, Cy2-С0алкила; R5 представляет собой водород; R6 представляет собой водород, С1-4алкил, С1-4алкоксиС1-4алкил, гидроксиС1-4алкил, R12R7N-C1-4алкил, R16CO-С0алкил, Cy1; R7 представляет собой водород или С1-4алкил; R9 представляет собой галоген, -CN, -CONR7R12, -COR13, CO2R12, -OR12, -SO2R13, -SO2NR7R12, -NR7R12, -NR7COR12; R10 представляет собой С1-4алкил или R9-С0-4алкил; R11 представляет собой С1-4алкил, галоген, -CN, -NR7R14; R12 представляет собой водород или R13; R13 представляет собой С1-5алкил, гидроксиС1-4алкил, цианоС1-4алкил, Cy2-С0алкил или R14R7N-C1-4алкил; где Cy2 необязательно замещен одним или несколькими заместителями R11; R14 представляет собой водород или С1-4алкил; R16 представляет собой С1-4алкил, галогенС1-4алкил, C1-4алкоксиС1-4алкил, гидроксиС1-4алкил или цианоС1-4алкил; Cy1 представляет собой моноциклическое карбоциклическое ненасыщенное или насыщенное кольцо, выбранное из С3-С6циклоалкила, фенила, или насыщенное моноциклическое 4-6-членное гетероциклическое кольцо, содержащее от 1 до 2 гетероатомов, выбранных из N и S, или частично ненасыщенное 10-членное бициклическое гетероциклическое кольцо, содержащее атом кислорода в качестве гетероатома, которые могут быть замещены группой R11, где указанное кольцо связано с остальной частью молекулы через любой доступный атом С, и где один или несколько кольцевых атомов С или S необязательно окислены с образованием СО или SO2; и Cy2 представляет собой моноциклическое карбоциклическое насыщенное кольцо, выбранное из С3-С6циклоалкила, или ароматическое моноциклическое 4-6-членное гетероциклическое кольцо, содержащее от 1 до 2 гетероатомов, выбранных из N и S, или ненасыщенное 10-членное бициклическое гетероциклическое кольцо, содержащее атом кислорода в качестве гетероатома, которые могут быть замещены группой R11, где указанное кольцо связано с остальной частью молекулы через любой доступный атом С или N. 2 н. и 25 з.п. ф-лы, 41 пр.