Штамм @ @ ( @ ) @ - продуцент молокосвертывающего фермента

 

Штамм Hirschioporus laricinus М-81 (Karst.) Ryv. (хранится в Центральном музее промьгатенных микроорганизмов ВНИИгенетика под номером ЦМПМ Б-263)-продуцент молокосвертывающего фермента. О) с IN9 00 00

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУВЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

llO ДЕ М ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЮ (21) 3787001/28-13 (22) 18.05.84 (46) 15,02.86. Бюл. ¹ 6 (71) Донецкий государственный университет (72) М.И. Бойко, С.Ф. Негруцкий, Т.В. Мирошниченко, И.А. Соболь и Ю.С. Варенко (53) 663.11(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 691488, кл. С 12 N 15/00, 1975 °

Авторское свидетельство СССР № 522230, кл. С 12 N 9/59, 1972.

„.SU„„1211288 (5И4 С 12 N 9/58, С 12 N 15/00 // (Д У.Я58 С 12 R 1:645) (54) ШТАИИ Н1КБСН1ОРОК11Б 1.АК1С1%3$

M-81 (KARST,) RYV. — ПРОДУЦЕНТ ИОЛОКОСВЕРТЫВАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА. (57) Штамм Hirschioporus laricinus

М-81 (Karst.) Ryv. (хранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов ВНИИгенетика под номером

ЦИПИ Б-263)-продуцент молокосвертываницего фермента.

1211288

Изобретение относится к ферментативной технологии и представляет собой новый вид гриба для получения молокосвертывающего фермента в качестве заменителя сычужного фермента, применяющегося при изготовлении сыров.

Целью изобретения является использование нового штамма гриба

Hirschioporus 1ат спшэ М-81 в ка. 1 честве продуцента молокосвертывающего фермента, обладающего более высокой активностью, чем -известные штаммы Грибов.

Предлагаеь}ый штамм M-81 сапрофитового дереворазрушающего гриба

Hirschioporus laricinus (класс

Basidiomyutes, пбрядок Aphyllophoralis, семейство Polyporaceae) синтезирует и выделяет в сферу фермент, обладающий высокой молокосвертывающей активностью (МСА). МСА культурального фильтрата составляет

16000 ед/мл, а ферментного препарата 1000000 ед/г. Образующийся сгусток белого цвета, посторонних saпахов и привкусов не имеет. Штамм

М-81 образует молокосвертывающий фермент даже при произрастании на минеральной среде Чапека-Докса, где источником углерода служит фильтровальная бумага.

Штамм М-81 Hirschioporus laricinus хранится в коллекции кафедры физиологии растений Донецкого госуниверситета и в ЦМПМ ВНИИгенетика (Москва) под шифром -UMHM F-263.

Полученный штамм М-81 Hirschioporus laricinus имеет следующие характеристики.

Морфология. Плодовых тел в культуре не образует. Мицелий белый, достаточно плотный. Гифы ветвящиеся, с перегородками. Ширина гиф составляет

2,49-5,71 ммк. Спороношений в культуре не дает. В естественных условиях образует плодовые тела, имеющие шляпку, разделенную на две полукруглые половинки. Размер их 3, t5x5,30.èì, до 7 мм толщиной. Плодовые тела жесткие, слабо опушенные, темно-серого цвета, гименофор пластинчатый. Споры цилиндрической формы: 5,5-8 х 22,5 ммк.

Минеральная среда Чапека. Грибница белого цвета, редкая, паутинообразная. Воздушный мицелий развит слабо. Гифы ветвящиеся, с перегород ками. Средняя скорость роста мицелия за 1 сут при 30 С 13,9+0,15 мм.

Спороношений не образует ° Обратная сторона колонии непигментирована.

Органические среды. На агариэированном неохмеленном пивном сусле . штамм М-81 образует пышный, белый мицелий. Воздушный мицелий хорошо развит ° Средний линейный рост за

}0 1 сут при 30 С 14,4 + 0,3 мм. Спороношений не образует. Среда непигментирована ° Хорошо растет на агаризир он анной глюкоз о-картофельной среде. При 30 С линейный рост мицелия

}5 за 1 сут. t3;4+ 0,12 мм. Мицелий пышный, белый, достаточно плотный.

Спороношений не образует. Обратная сторона колонии гриба непигментирована. ь

20 При 50 С рост грибницы отсутствует.

Физиологические признаки. Лучше всего усваивает глюкозу, фруктозу и ксилозу, слабее арабинозу, маннит и очень слабо сахарозу. Штамм M-81, 25 произрастая на среде с указанными источниками углерода, образует молокосвертывающий фермент, активность которого различна.

Токсичность и патогенность культу30 рального фильтра определяли на беспородных белых мышах обоего пола. Полученные результаты показали, что культуральный фильтрат штамма М-81

Hirschioporus laricinus при внутрибрюшном и пероральном методах введения патогенными и токсичными свойствами не обладает.

Пример 1. Штамм М 81

Hirschioporus laricinus выделен из

40 плодового тела, произраставшего на стволе срубленной сосны. Культуру штамма сохраняли путем редких пересевов на агаризированную глюкоэокартофельную среду или агаризиро45 ванное пивное сусло.

Для обнаружения молокосвертывающей активности штамм M-81 культивировали на глюкозо-пептонной среде следующего состава: г/л: глюкоза

10,0; пептон. 3,0; К НРО 0,4; КН РО

0,6, MgSQ, 7Н О 0,5, ZnS0 7Н О

0,001, СаС1 0,05, дистиллированная вода до 1 л. Кислотность среды после. стерилизации 5,50-5,90 рН. Гриб выращивали в колбах Эрленмейера на

250 мл, с объемом питательной среды

50 мл, поверхностным способом при температуре 30 С, являющейся, опти1211288

30

40 "100- К

МСА„,р—

П ед/мл, 40 ° 100 К

MCA рррр ед/г, П-а

45 Составитель В. Голимбет

Техред Ж. Кастелевич

Корректор.С. Шекмар

«Й4ВФ °

Подписное

Редактор Н. Горват

Заказ 610/31 Тираж 490

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 мальной для раста штамма М-81. Посевным материалом служила 10-15-суточная культура, выращенная на указанных агариэированных средах.

Молокосвертывающую активность

5 культурального фильтрата опредецяли в 3-., 7-, 5-, 12-, 14-, 17-, 22-, 30и 70-суточном возрасте гриба. Для этого мицелий отделяли от питательной среды путем фильтрования через стек- 10 лянный фильтр (размер пор 16-40 мкм)„ соединенный с колбой Бунзена. Полученный таким образом культуральный фильтрат использоваЛи для обнаружения в нем молокосвертывающего фермен- 15 та по методу, предложенному Каваи и

Мукаи.

В 100 мл натурального молока вносили 1 мл 157.-ного раствора СаС1,,перемешивали на магнитной мешалке и доводили кислотность 107."ной НС1 до рН 6,0. В пробирки вносили по

10 мл молока и помещали в водяную баню при 35 С. Через 2-3 мин.в опытные пробирки вносили 1 мл культурального фильтрата (КФ) или 1 мл

0,17.-ного раствора ферментного препарата, полученного из КФ путем осаждения белков сернокислым аммонием и других соответствующих процедур.

В контрольные пробирки вносили 1 мл прокипяченного КФ или раствора фермента. Смесь в пробирках встряхивали и ставили на водяную баню при о

35 С. О молокосвертывающей активности КФ судили по времени свертывания молока в минутах. Расчет МСА вели в условных единицах по формуле, предложенной Типограф Д.Я. и

Петиной Т.А. где К вЂ” коэффициент разведения КФ или препарата фермента, П вЂ” время, в течение которого из 100 мл молока при добавлении 1 мл КФ или 1 мл раствора фермента образуется

I плотный сгусток мин;

40 — среднее время свертывания молока при производстве сыра, мин а — навеска ферментного препарата, r, Полученные результаты свидетельствуют о том, что штамм М-81, начиная с 3-суточного возраста, продуцирует в среду молокосвертывающий фермент. Активность этого фермента постепенно увеличивается от 9 мин ()-суточная культура) до 2,5 мин (й 12-15-суточном возрасте), когда отмечается наибольшая активность фермента. В 16-22-суточном возрасте створаживание молока осуществляются за 3 мин, а МСА культурального фильтрата штамма в 30-суточном возрасте составляет 4 мин. Культура штамма и в 70-суточном возрасте обладает молокосвертывающей активностью, равной 21 мин.

Представленные результаты свидетельствуют о том, что активность молокосвертывающего фермента остается высокой на протяжении месячного возраста культуры. Обнаруженное свойство может быть использовано при промышленном культивировании штамма М-81 с целью получения молокосвертывйющего фермента.

Активность ферментного препарата, полученного из КФ штамма 15-суточного возраста, составляет боЛее

1000000 ед/г.

Таким образом, предлагаемый штамм продуцирует молокосвертывающий фермент, активность которого в 2 раза выше, чем активность фермента, процуцируемого известным штаммом.