Способ приготовления реагента для выявления @ рецепторов
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН (19) (И)
15@ 4 А 61 К 39/00
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВЬi (.54)(57) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ РЕАГЕНТА ДЛЯ ВЬИВЛЕНИЯ С, РЕЦЕПТОРОВ путем (2 1).3695345/28-13 (22) 21.11.83 (46) 23.09.87. Бюл. Ь - 35
- (.71) Научно-исследовательскими 4йотитут эпидемиологии; микробиологии и инфекционных болезней и Научно-иссле-, .повательский кожновенерологический институт (72-) Б;В.Каральйик и,JI.È,Òèìîôååâà (53) 615 ° 375(088.8) .(56) Новиков Д.К.,- Новикова В ;И. Лабораторное дело, 1976, В 12, с. 735 ° трехкратной сенсибилизации эритроцитов гемолизином и комплементом, о тл и ч а ю шийся тем, что, с це,лью цовышения стабильности реагента при сохранении его специфичности и высокой чувствительности выявления
С рецепторов, перед сенсибилиэацией эритроциты фиксируют ацетальдегидом, а сенсибИлизацию осуществляют гемолнзином млекопитающих и цельным комплементом морской свинки или мьппи, при:чем при первой и второй сенсибилиза.циях гемолизин применяют в разведении в 3 раза меньшем, а при третьей — в
6 раз меньшем гемолитического титра.
1218524
Составитель M.Âàñèëüåâ
Редактор Т.Янова Техред M.Äèäûê Корректор С. Шекмар
Заказ 4358 Тираж 594 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к приготовлению реагентов для иммунологических .исследований.
Цель изобретения — повышение ста" бильности реагента при сохранении
его специфичности и высокой чувствительности выявления С рецепторов.
Способ поясняется следующим примером.
Пример 1. Эритроциты фикси-. руют ацетальдегидом, для чего смешивают равные объемы 16-18 взвеси эритроцитов,и 7,0-7,2/ нейтрального раствора ацетальдегида, содержащих
0,85Х хлорида натрия. Смесь выдерживают в течение 24.ч при 20 С. Затем эритроциты трижды отмывают эабуференным рН ?,0-7,2, 0,857.-ным раствором хлорида натрия или раствором Хенкса и суспендируют в таком же растворе до получения 50Х-й взвеси. Смешивают равные объемы .взвеси фиксированных эритроцитов и гемолитической сыворотки в разведении, в три раза менъшем ее гемолитического титра. Смесь выдерживают в течение 18-22 мин при
37-39 С и к ней добавляют два объема неразведенного цельного комплемента, морской свинки или мыши..Смесь выдерживают в течение 14-16 мин при 37о
39 С, после чего к ней добавляют два объема гемолитической сыворотки в прежнем разведении. По окончании экспозиции в течение 18-22 мин при 3739 С к смеси прибавляют два объема цельного комплемента. Полученную таким образом смесь выдерживают 14-.
16 мин при 37-39 С. После этого в смесь вносят восемь объемов гемолитической сыворотки в разведении в 6 раз меньшем ее гемолитического титра.
Смесь снова выдерживают в течение
18-12 мин при 37-39 С, после чего в нее добавляют восемь объемов неразведеиного комплемента и экспонируют в течение 14-16 мин при 37-39 С.
Все используемые разведения гемолитической сыворотки готовят на забуференном рН 7,0-7,2, 0,857.-ном растворе хлорида натрия или на растворе
Хенкса. Смеси при каждой экспозиции периодически перемешивают. Сенсиби, лизированные эритроциты трижды отмыл вают таким же рас,вором при центрифугировании (1000 об/мин в течение 1416 мин), Отмытый эритроцитный" реагевт суспендируют в таком же растворе и по подсчете клеточной концентрации хранят при 3-5 С.
25 Таким образом, способ позволяет заовысить стабильность реагента при длительном хранении {срок годности составляет 3 года что превышает срок годности реагента, приготовленного
3р по известному способу -- 1 0 дней, более чем в 100 раз) при сохранении специфичности и высокой чувствительности выявления С рецепторов: процент клеток, выявляемых при помощи реагента, приготовленного по данному спосо35 бу, в день изготовления,, содержащих
С,, рецепторы» составляет 10,49+ 0,62 (по известному способу — 10,33+0,53), а через 3 года — 10,89 0,64,
