Способ количественного определения гормонов в биосубстратах

 

Изобретение относится к способам количественного определения гормонов в биосубстратах. Цель изобретения - упрощение способа. Получают от обследуемого две порции сыворотки . К одной порции сьгаоротки добавляют дистиллированную воду. Измеряют интенсивность хемилюминесценции этого субстрата. В другую порцию сыворотки вводят 0,1 мл раствора антител к определяемому гормону с титром ан- ,тител 1:10000. Инкубируют эту смесь. Добавляют к ней вещество, ведущее к агрегации комплексов. Вновь инкубируют смесь и центрифугируют ее. Измеряют интенсивнос-ть хемилкминосценции супернатанта - субстрата, не содержащего эти комплексы. Строят калибровочную кривую. По разности между интенсивностью свечения до и после введения антител определяют количество гормона. 2 ил. I (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1250951

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

r)o делАм изОБРетений и oTHpblTVM (2)) 3718226/28-14 (22) 30.03.84 (46) 15.08.86. Бюл. )) 30 (71) 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н.И.Пирогова (72) И.М.Грязнова, В.М.Здановский, М.Б.Аншина и А.P.Áàáàÿíö (53) 577.17:612.1(088.8) (56) Right. Introduction to radioimmunoassay methods, London„)975. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГОРМОНОВ В БИОСУБСТРАТАХ (57) Изобретение относится к способам количественного определения гормонов в биосубстратах. Цель изобретения — упрощение способа. Получают (51)4 С ".) N 33/48// С 0)g 21/76 от обследуемого две порции сыворотки. К одной порции сыворотки добавляют дистиллированную воду. Измеряют интенсивность хемилюминесценции зтого субстрата. В другую порцию сыворотки вводят 0,1 мл раствора антител к определяемому гормоиу с титром ан,тител l 10000. Инкубируют эту смесь.

Добавляют к ней вещество, ведущее к агрегации комплексов. Вновь инкубируют смесь и центрифугируют ее. Измеряют интенсивность хемилюмин .сценции супернатанта — субстрата, не содержащего эти комплексы. Строят калибровочную кривую. По разности между интенсивностью свечения до и после введения антител определяют количество гормона. 2 ил.

1250951

Изобретение относится к медицине, в частности к способам количественного определеиия гормонов в биологических субстратах, например в сыворотке крови, и может быть использовано для оценки гормонального профиля человека и животных.

Целью изобретения является упрощение исследования путем измерения !

О интенсивности хемилюминесценции субстрата до и после введения в него антител, и по разности между измеренными значениями определяют количество гормона.

На фиг.1 и 2 представлены калиб— !

5 ровочные кривые для определения эстрадиола и фолликулостимулирующего гормонов.

Пример 1 Женщина К., 22 лет.

Практически здорова, двадцатый день

20 менструального цикла. Проведено определение содержания эстрадиола в сыворотке крови. Натощак взято иэ рены локтевого сгиба 3 мл крови и путем центрифугирования при

3000 об,/мин в течение 15 мин получают сыворотку. Для исследования необходимо две порции сыворотки по 0,3 мл.

К одной порции сыворотки (0,3 мл) добавляют 0,1 мл дистиллированной во- Зо ды и измеряют интенсивность хемилюминесценции 0,3 мл этого субстрата.

Затем в другую порцию сыворотки

{0,3 мл) вводят 0,1 мл раствора антител к эстрадиолу с титром антител З5 ! :10000 в дистиллированной воде, ин, кубируют эту смесь в течение 2 ч при о

37 С и добавляют к ней вещество, ведущее к агрегации комплексов "эстра— диол — антитело — активированный 40 уголь в количестве 15 мг. Далее вновь инкубируют смесь в течение 30 мин при

20 С, выделяют агрегированные комп,лексы "эстрадиол — антитело" посредством центрифугирования в течение 4S !

5 мин при 2000-2500 об/мин и измеря.ют интенсивность хемилюминесценцию

0,3 мл супернатанта — субстрата, не

- содержащего эти комплексы.

Дополнительно строят калибровоч- gp ную кривую. Для этого измеряют интенсивность хемилюминесценции серии стандартных субстратов, представляющих собой смеси 0,3 мл стандартного источника свечения, например липазы, и 0,1 мл раствора эстрадиола в этаноле в концентрациях: 0; 35; 75; 300; б 00; 900; 1 200; 1 5 00; l 800; 21 00 п г/мл.

Для исследования берут 0,3 мл смесей.

По разностям между полученными значениями интенсивности хемилюминесценции этих смесей строят калибровочную кривую (фиг ° 1).

Разность между измеренными значениями интенсивности хемилюминесценции исследуемой сыворотки и супернатанта составила 6,9 мВ. При сопоставлении с калибровочными данными (фиг.1) эта разница соответствует содержанию эстрадиола в сыворотке крови, равному 340 пг/мл.

Ц р и м е р 2. Больная С., 32 года. Диагноз: аменорея. Произведено определение содержания фолликулостимулирующего гормона в сыворотке крови аналогично примеру 1, разность между значениями интенсивности хемилюминесценции исследуемой сыворотки и супернатанта составила l 8 мВ. При сопоставлении с предварительно полученными для фолликулостимулирующего гормона калибровочными данными (фиг.2) эта разница соответствует

7,6 пг/мл.

Ф о р м у л а изобретения

Способ количественного определения гормонов в биосубстратах путем добавления к исследуемому субстрату антител, вьщеления комплекса гормон— антитело, инкубирования, центрифугирования, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, антитела вводят в избыточном количестве, а количество гормона определяют методом хемилюминесценций по разности между интенсивностью свечения до и после введения антител.

1250951

mV

12

ы

4 в

4 7 ф Ф

Ф 3 г

1 о к

Ъ ф 37 75150 З00 000 Ю0 гг00 И00 1000 г 00 Лл/

Ь иолиброВоинор ериВоо Ж ноличегл Венноео олредел ни естро3иолп

Фиг 1

Ъ

11 у

8 ь 7

Ъ р 4

3

О ф б 1О 2О 40 И ЮО 1ОО 18О 740 1бО 180 гОО mut/ 4 лирующеео аормонц Фиг. 2

Составитель Л. Покрьппкина

Редактор М. Келемеш Техред И.Гайдош

Заказ 4403./39 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, у . р л. П оектная 4 э