Способ выявления ионизированных форм калия в тканях

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (I9) (И) (,51) < А 61 В 5/00

i)i

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОсудАРст8енный нОмитет сссР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (2I) 37)4534/28-14 (22) 31.01.84 (46) 23.08.86. Бюл. )(31 (71) Ленинградский научно-исследовательский психоневрологический институт им. В. М. Бехтерева (72) Г. А. Павлова (53) 6)2.392.62(088.8) (56) Пирс Э. Гистохимия. М., 1962, с. 883-884. (54 ) (5 7) СПОСОБ ВЬ)ЯВЛЕНИЯ ИОНИЗИРОВАННЬ)Х ФОРМ КАЛИЯ В ТКАНЯХ путем обработки срезов тканей химическим реагентом и подсчета микрокристаллов под микроскопом, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрощения и повьппения чувствительности способа, в качестве реагента используют хлорную кислоту, а подсчет кристаллов производят в скрещеннъ(х поляроидах поляризационного микроскопа.

125 1856

55 ния кристалла.

Изобретение относится к биологии и медицине, преимущественно к анатомии и нейроморфологии.

Цель изобретения — упрощение и повышение чувствительности способа эа счет обработки срезов ткани хлорной кислотой, Способ осуществляют следующим образом.

Срезы исследуемой ткани обрабатывают концентрированной хлорной кислотой в течение не менее 4-5 мин, затем отмывают срезы, высушивают и подсчитывают выпавшие микрокристаллы в скрещенных поляроидах поляриэационного микроскопа.

Пример 1. Срезы различных полей коры головного мозга людей (аутопсия) фиксируют 10 .-ным формалином или 96 .-ным спиртом, затем делают парафиновые срезы толщиной 15 мкм.

Срезы сухими наклеивают на сухое обезжиренное предметное стекло, прижимая пальцем. Депарафинируют известным способом, но из 96 .-ного спирта, минуя воду, переносят в 40 ный спирт. Избыток спирта вокруг среза убиракт.

Непосредственно на срезы, увлажненные 40 -ным спиртом, наносят

1 — 2 капли неразбавленной хлорной кислоты, на срок не менее 4-5 мин, Капли KHcJIQTbI как бы ншевелятся" на поверхности среза в первые секунды обработки, поэтому надо сразу же плашмя положенным концом стеклянной палочки легко разнести их по всей поверхности среза. В данном случае часть срезов отлипает от стекол, что затрудняет работу с ними.

Избыток спирта и кислоты на срезе недопустим, так как ведет к размыванию осаждаемых кристаллов по всей увлажненной поверхности, в результате чего кристаллы обнаруживаются не только на поверхности среза, а даже вне его, просто на стекле. Необходимо, чтобы осаждаемые кристаллы закреплялись в тканевой основе среза по возможности ближе к месту, откуда извлекаются ионы калия для образоваХлорную кислоту наносят на срезы на срок 4-5 мин и более. Ополаскивают срезы от кислоты 40Х-ным спиртом, аккуратно капая его иэ пипетки на

45 косо поставленное стекло выше расположения среза.

Затем таким же образом ополаскивают срезы 96 -ным спиртом, высушивают срез фильтровальной бумагой (промокают), просветляют ксилолом и заключают в бальзам.

Докрашивание срезов ведет к значительной потере осажденных кристаллов и поэтому не может быть рекомендовано.

Поскольку большинство выпадающих кристаллов хлорного калия в срезах имеют очень мелкие размеры (менее

10 мкм), прозрачны и бесцветны или окрашены в очень слабый желтый цвет и их показатели преломления мало отличаются от показателей преломления среды (бальзам), возможности обычного рабочего или исследовательского микроскопа не позволяют их обнаружить в срезах тканей даже специалисту— кристаллооптику.

Истинное количество кристаллов обнаруживается только в скрещенных поляроидах поляризационного микроскопа на черном фоне иэотропной среды по четырехкратному просветлению и закономерному угасанию каждого зерна (кристалла) при вращении столика о микроскопа на 360 . Исследование в скрещенных поляроидах дает возможность легко обнаружить все имеющиеся в срезе мельчайшае кристаллы, даже если имеется только один, наблюдать распределение кристаллов в среде, дифференцировать свечение кристаллов от свечения случайных объектов по просветлению и закономерному угасанию при вращении столика микроскопа, учитывать количество осажденных кристаллов, фотографировать светящиеся объекты. Именно излучение срезов в скрещенных поляроидах поляризационного микроскопа незаменимо при использовании микрохимического способа выявления ионизированных форм калия в биологических объектах хлорной кислотой.

Микрофотосъемка производится при увеличении 15 16„на пленку Иикрат-200. Поскольку иэображение характеризуется высокой контрастностью и малой освещенностью, время экспозиции должно быть значительно большим, чем при фотографировании обычного микроскопического иэображения в видимом свете, На исследуемом ма)251856

Составитель Н. Гуляева

Редактор Н. Тупица Техред И.Верес Корректор Л. Пилипенко

Заказ 4553/3 Тираж 660 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 териале время экспозиции достигает

40 мин, поэтому ва но, чтобы микроскоп и фотоаппарат были хорошо фиксированы и чтобы отсутствовали вибрации.

По микрофотографиям выявляют иониэированные формы калия в срезах различных полей коры головного мозга людей. В поле зрения 21- и 10-го полей коры головного мозга людей с психическими заболевания и обнаружено 99,7 1,5 и 94,6 6,2 кристалла соответственно, а у здоровых людей 176,3+5,6 и 186,7+1,4 кристалла соответственно.

Чувствительность способа 0,027 мкг калия.

Пример 2. Способ опробован на срезах сердечной мышцы. Порядок обработки срезов соответствует разработанному для срезов мозга (при5 мер 1) эа исключением того, что для срезов сердечной мышцы лучше пользоваться не хлорной кислотой, а смесью ее с 40Х-ным спиртом (1ч. хлорной кислоты на 3 ч. спирта). При этом реже отлипают срезы. Техника нанесения этой смеси такая же, как и для кислоты (пример 1), а время экспозиции в кислоте не менее 20 мин.

Изучение срезов в скрещенных поляроидах поляриэационного микроскопа и микрофотосъемку проводят> как в примере !.