Способ получения @ -яблочной кислоты

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) 54 4 А1 (б11 4 С 12 P 7/46

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н лвтоескомм саидютяльствм

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3753533/28-13 (22) 08.06.84 (46) 30.08.86. Бюл. 9 32 (72) В.Э. Калнс, О.Э. Скроделис, 3.А. Виестуре, А.Ф. Лидере, Х.Ф. Фридман, А.К. Аренс, P.Þ. Аре и P.ß. Карклинь (53) 663.37 (088.8) (56) Kurop. Journ. Appl. Nicrobiol.

Biotechnol., 1979, v. 7, Э 2, р. 161-172, Заявка Японии У 54-76894, кл. С 12 D 1/02, 1979. (54) (57) 1. СПОСОБ ПОЛ ЧЕНИЯ ?;ЯБЛОЧНОЙ КИСЛОТЫ, предусматривающий введение свободных или нммобилизованных дрожжей рода Candida или

Saccharomyces в раствор соли фумаровой кислоты с последующим инкубированием и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта, перед введением осуществляют активирование дрожжей, а фумаровую кислоту используют в виде водного раствора ее соли из расчета 34,8-1112,0 г фумаровой кислоты на 1 r сухой биомассы дрожжей.

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что активирование дрожжей проводят путем выдерживания в замороженном состоянии. 3. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что иммобнлизацию осуществляют путем введения дрожжей в камеру, образованную полупроницаемой мембраной, а инкубирование их осуществляют путем помещения в верхний слой раствора соли фумаровой кислоты.

4. Способ по п.3, о т л и ч а ю— шийся тем, что при иммобилизации дрожжей рода Saccharomyces в камеру дополнительно вводят от 7 до

4507. осуспензии эритроцитов от объема содержимого камеры.

Ф 1

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения L-яблочной кислоты из фумаровой путем ферментативной гидратации последней под воздействием фермента фумаразы дрожжей.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта.

Способ осуществляют следующим образом.

Превращение фумаровой кислоты в яблочную проводят с помощью обладающих фумаразной активностью свободных или иммобилизованных дрожжей Saccha— гошусеа cerevisiae, Sacchar omycee vini или Candidy lipolytica.

Дрожжи подвергают предварительному активированию.

Для активирования С. lipolyi.ica и БассЬ., vini используют влажные биомассы, полученные после выращивания на среде с н -алканами (С.

1хроХуйъса) или мелассой (ЯассЬ..

vini), сепарирования и последующей промывки водой.

Для активирования Sacch. cerevi—

siae приготавливают смесь, содержа.— щую, Ж: дрожжи 44,15-44,4, вода

44 ° 15-44,4; калий фосфорнокислый двухзамещенный 1,55-1,99; магний сернокислый 0,18-0,26; фумаровая кислота 0,88-0,89 и гидроокись калия 0,88-0,90, рН смеси 7,2-7,4.

Дрожжи в этом растворе инкубируют при 28-30 С и встряхивании в течение 18-22 ч. Затем добавляют

7,68-7,73Х толуола и продолжают инкубировать при 35-39 С и встряхивании в течение 60-80 мин.

Активирование осуществляют путем выдерживания полученных биомасс дрожжей в замороженном состоянии.

Для этого достаточно выдерживать их при температуре от -5 до -9 С.

Для определения активирования дрожжей ставят опыты с добавлением разных количеств субстрата реакции (фумаровой кислоты) в расчете на 1 r сухой биомассы дрожжей. Об эффекте активирования судят по времени, в течение которого не менее 8ОЖ фумаровой кислоты превращается в яблочную, а также по максимальному коли:— честву образовавшейся яблочной кислоты в расчете на 1 г cyxoN биомассы дрожжей.

Результаты экспериментов преп.ставленм в табл. 1-3.

254 ОО4 2 ковых условиях.

50

При иммобилизации дрожжей Sacch, cerevisiae для их стабилизирования в камеру из полупроницаемой мембра.ны вводят гемоглобин в количестве

3-20 мас.X или суспензию зритроци тов в количестве 7-45О об.X от объема содержимого камеры (табл,5 и 6).

Суспензию эритроцитов получают центрнфугированиеи крови быка с после30

Как видно из таблиц, использование активированной путем замораживания биомассы дрожжей во всех случаях приводит к ускорений ферментативного превращения фумаровой кислоты в яблочную по сравнению с ис" пользованием неактивированных таким способом дрожжей при прочих одинаНаиболее оптимальный режим работы в диапазоне 34,8-11 12 г фумаровой кислоты (субстрата) на 1 г сухой биомассы дрожжей. Ниже 34,8 г фумаровой кислоты в инкубационной среде проводить процесс нецелесообразно из-за низкого абсолютного выхода яблочной кислоты. Верхний предел оп- . тимального содержания фумаровой кислоты в инкубационной смеси—

1112 г на 1 r сухой биомассы дрожжей Saccharomyces vini.

При увеличении количества субстрата выше этого значения эффективность превращения фумаровой кислоты в яблочную при использовании активированных дрожжей понижается (табл.2, вариант 7).

Для более эффективного превращения фумаровой кислоты в яблочную активированные дрожжи иммобилизуют. демобилизацию дрожжей осуществляют путем помещения их в камеру, выполненную из полупроницаемой мембраны, например в герметичный целлофановый мешок или трубку. Превращение фумаровой кислоты в яблочную происходит эффективнее, если дрожжи в целлофановом мешочке или трубке погружать в верхние слои раствора фумаровай кислоты (табл.4).

Как видно из таблицы, при нахождении иммобилизованных дрожжей в верхйих слоях раствора фумаровой кислоты скорость реакции намного выше. Это объясняется тем, что образующаяся яблочная кислота перемещается в нижние слои инкубационной смеси из-за большей удельной массы по сравнению с фумаровой кислотой.

3 1254 дующим промыванием 0,9 -иым раствором хлористого натрия.

Из табл.5 видно, что при увеличении количества гемоглобина в целлофановом мешочке с хлебопекарными дрожжами, катализирующими превращение фумаровой кислоты в яблочную в последовательных циклах, увеличивается число циклов, осуществляющих

80%-ное превращение, уменьшается 10 время их завершения, а также возрастает число последовательных циклов с сохранением каталитической активности дрожжей, наблюдавшейся в первом и втором циклах, Минималь- 15 ное число циклов, в которых имеет место 80 -ное превращение фумаровой кислоты в яблочную, наблюдается в отсутствие гемоглобина. Все это свидетельствует о стабилизирующем дей- 20 ствии гемоглобина на фумаразную активность иммобилизованных хлебопекарных дрожжей.

Из табл.б видно, что аналогичное стабилизирующее действие на фумараз- ную активность иммобилизоваиных хлебопекарных дрожжей- при их функционировании в последовательных циклах

30 оказывают добавки суспензии эритроцитов быка. Целесообразно вводить 7450 об.% суспензии эритроцитов от объема содержимого камеры. Более низкие концентрации оказывают пониженный стабилизирующий эффект. Вводить количества суспензии эритроцитов больше 450 об. нецелесообразно, так как уже это количество занимает почти весь целлофановый мешочек.

Пример 1. 1 r влажной биомассы Candida lipolytica, выращенной 4О на среде с н -алканами, отсепарированной и промытой водой, замораживают до (-5)-(-9) С и выдерживают в замороженном состоянии в течение

7 сут. Затем дрожжи смешивают с 45

800 мл 1,5 N раствора фумарата аммония, содержащего 180 г соли (рН 7,9), до образования гомогенной суспензии.

Полученную суспензию, содержащую

558 г фумаровой кислоты в расчете на 1 r сухой биомассы С. lipolytica, выдержигзют при комнатной температуре (18-25 С). Превращение фумаровой кислоты в яблочную контролируют методом тонкослойной хроматографии 55 на пластинках "Силуфол" в системе этанол : концентрированный раствор аммиака (8,5:1,5 по объему). Ирояв-

004 ление пластин после высушивания при.

110 С осуществляют после обработки

О, 1 .-ным водно-спиртовым раствором бромфенола синего.

О количестве образунтцейся яблочной кислоты и уменьшении количества фумаровой кислоты судят путем сравнения интенсивности пятен с контрольными (наносимыми на пластинку разными количествами яблочной и Фумаро . вой кислот). На стартовую линию хроматограммы наносится также некоторое количество янтарной кислоты, что позволяет судить о ее наличии в инкубационной смеси.

В табл.7 приведены результаты превращения фумаровой кислоты в яб лочную в процессе инкубирования дрожжей С. lipolytica.

Из таблицы следует,что за 16 сут в растворе получено 515 r яблочной кислоты в расчете на 1 r сухой биомассы.

После окончания процесса в инк.— бационную смесь добавляют концентрированную соляную кислоты до рН 1-2.

Полученную смесь выдерживают при (+5)-(+10) С в течение 16-20 ч, затем отфильтровывают от осадка фумаровой кислоты, которую высушиваот и оставляют для регенерации. В полученном фильтрате, нагретом до 4855 С, при размешивании растьоряют

35,6 r растертой гидроокиси кальция. Полученный раствор охлаждают при размешивании, при этом, начиная примерно с 30 С, выпадает белый осадок.

Полученную суспензию выдерживают при периодическом перемешивании при (+5)-(+10) С в течение 16-20 ч, затем выпавший в осадок кислый.яблочно-кислый кальций отфильтровывают и растворяют в 1990 мл воды при 55 С и помешивании. Необходимое количество гидроокиси кальция для получения кислого малата кальция и необходимое количество воды для получения 8%-ного раствора последнего рассчитывают на основании достигнутой степени превращения фумаровой кислоты в яблочную во взятом объеме 1,5 N раствора фумарата аммония).

Раствор кислого малата кальция пропускают через термостатируемую при 55 С колонку с катионитом KPC-10 в водородной форме. Получаемьп кислый раствор яблочной кислоты упари1254004

П р и и е р 4. 50 г хлебопекарных дрожжей производственного объе50 динения "Друва" смешивают с 50 мл раствора, содержащего 1,75 г калия фосфорнокислого двухэамещенного, 0,2 r сульфата магния и l r фуиаровой кислоты (рН 7,2-7,4). При необходимости рН доводят до требуемого

55 значения е помощью КОН.

Полученную суспенэию выдерживают при 28-30 С и встряхивают s течение

18-22 ч. Затеи к ней добавляют l0 мл

% чют в вакууме досуха, не допуская нагревания выше 60 С.

Выход яблочной кислоты — 88,75 г.

П р и и е р 2. К суспензии товарных хлебопекарных дрожжей производственного объединения "Друва"„ приготовленной как описано выше и хранившейся в течение 87 сут при (-5)-(-20) С, добавляют пенопласт в кусочках (прыяерно 2 2 2 мм) до покрь1тия всей поверхности, все осторожно перемешивают. Освобожденную с помощьв пенопласта от толуола суспензию сливают с кусочков пенопласта и центрифугируют. К 0,62 мл полученного после центрифугирования прозрачного экстракта суспензии хлебопе.карных дрожжей (что соответствует

0,31 г влажных дрожжей, удельный вес которых приблизительно I г/мл) добавляют 0,5 г сухого фумарата аммония и 1 3 мл хранившейся при (-5)(-9) С суспензии эритроцитов быка, переносят все в целлофановый мешочек, и удаляют иэ него воздух.

Завязанный целлофановый мешочек с раствором экстракта суспензии хлебопекарных дрожжей с общей рабочей поверхностью 31 см выдерживают при комнатной температуре (il8-25"С) в верхних слоях следующих друг за другом порций объемом 58 мл l,5 M фумарата аммония, содержащих 13 г соли (рН 7,9) до достижения 80-85К превращения фумарата в яблочную кислоту. Прореагировавшие смеси сливают вместе и хранят до выделения

Ь-яблочной кислоты при температуре от 0 до +5 C. Контроль эа процессом осуществляют по примеру 1. Примеси янтарной кислоты не обнаружено.

Первый цикл завершен за 10 сут, последующие 6 циклов завершены эа

9-10 сут каждый, т.е. в течение

66 сут на протяжении 7 циклов препарат работает с полным сохранением начальной фумаразной активности. Последующие 5 циклов завершены эа 1517 сут кажпьий. Таким образом, до завершения 12-го цикла включительно, т.е. около 5 мес., препарат работает с активностью, превышающей 507. начальной. Дальнейшие циклы завершаются за 25-28 сут каждый. По .ле завершения 23 циклов (14 мес. работы) по-. лучено 1304 мл прореагировавшей инкубационной смеси, из которой выделен 131 г яблочной кислоты способом, описанным в примере

З5

Ь

Таким образом, в расчете на l r сухой биомассы дрожжей образовано

2700 г .яблочной кислоты.

Пример 3. Иэ дрожжей Saccharomyccs vini (pacca Феодосия" ), выращенных на среде с мелассой, отсепарированных, промытых водой и хранящихся при температуре от -5 до

-9 C в течение 42 сут, готовят однородную суспензию путем смешивания

0,1 г прессо.занной биомассы с 1 мл

1,5 N фумарата аммония, содержащим

0,225 г соли (рН 7,9). К 0,2 мл полученной суспенэии, содержащей 0,02 г влажных дрожжей, добавляют 346 мл

1,5 М фумарата аммония (0,78 г) переносят в целлофановый мешочек, из которого удаляют воздух. Завязанный мешочек с суспензией дрожжей общей рабочей поверхностью около 31 см выдерживают при комнатной температуре (18-25 С) в верхних слоях следующих друг за другом порций объемом

60 мл 1,5 И фумарата аммония, содержащим l3,5 г соли (рН 7, 9), до дос- тижения 80-957. превращения фумаратаа в яблочную кислоту. Прореагировавшие реакционные смеси собирают и хранят при температуре от 0 до +5 С до выделения яблочной кислоты, которое осуществляют по примеру

Первый цикл завершен эа 20 сут, последующие 5 циклов завершены за

20-22 сут каждый, седьмой цикл завершен за 1 9 суток, Таким образом, в течение 143 сут на протяжении 7 последовательных циклов препарат иммобилизованных дрожжей работает с полным сохранением исходной фумаразной активности. На этой стадии получено 416 мл прореагировавшей реакционной смеси, из которой выделено

56,4 r яблочной кислоты способом, описанным в примере 1. Таким образом, в расчете на 1 r сухой биомассы дрож" жей получают 13400 г явлочной кислоты.

Инкубирование осуществляют при комнатной температуре, через 11 сут

80Х фумаровой кислоты превращается в яблочную. Выход яблочной кислоты составляет 1028 г на 1 r сухой биомассы д„эожжей.

При применении дрожжей, хранившихся при температуре от 0 до +5 С в течение 8 сут, т.е. не подвергнутых активированию путем замораживания, при прочих одинаковых условиях за этот же период време только 307„

1254 толуола и продолжают встряхивать прн 37+2 ОC в течение 1-1,2 ч. Обработанную толуолом суснензию выдерживают 30 сут при температуре от -5 до

-20 С. Затем к ней добавляют кусочки пенопласта (2 2 2 мм) до покрытия всей поверхности и осторожно перемешивают. Освобожденную таким способом от толуола суспензию дрожжей сливают с кусочков пенопласта и центрифугируют.

К 2 мл полученного после центрифугирования прозрачного экстракта суспензии хлебопекарных дрожжей,что соответствует 1 г влажных дрожжей, 15 добавляют 50 мл 1,5 М раствора фумарата аммония, содержащее 1 1,25 г соли (рН 7,9). При таком соотношении на 1 r сухой биомассы дрожжей приходится 34,8 г фумаровой кислоты. 20

Смесь инкубируют при 40 С. Через сутки 852 фумаровой кислоты превращается в яблочную, что соответствует образованию 34,2 г яблочной кислоты на 1 г сухой биомассы дрожжей. 25.

При использовании хлебопекарных дрожжей, не подвергнутых активированию, при прочих одинаковых условиях

85Х-ное превращение фумаровой кислоты в яблочную наблюдается только 30 через 3 сут.

Контроль за процессом и выделение яблочной кислоты осуществляют по прыкеру

Пример 5. Из дрожжей Saccha-35

romyces vini (расса "Феодосия" ), выращенных на среде с мелассой, отсепарированных, промытых водой и выдержанных при -(5)-(-9) С в течение

17 сут, готовят однородную суспензию путем смешивания 1 г прессованной биомассы с 1600 мл 1,5 M раство- . .ра фумарата аммония, содер.кащего

360 r соли (рН 7,9), что соответствует 1112 г фумаровой кислоты на

1 г сухой биомассы дрожжей.

004 8 фумаровой кислоты превращено s яблочную.

Контроль за процессом и выделение яблочной кислоты осуществляют по примеру

Пример 6. 0,1 г влажной биомассы хлебопекарньж дрожжей, хранившихся при температуре от -5 до -9 С в течение 145 сут, помещают в целлофановый мешочек, в который добавляют

0,84 мл 1,5 М раствора фумарата аммания, содержащего 0,19 r соли (pEI 8,2), 0,01 г фумарата аммония и 0 063 мл суспензии эритроцитов быка, что составляет приблизительно

7 об.X от объема содержимого камеры.

Целлофановый мешочек с общей рабочей поверхностью 9,9 см, из которого предварительно удален воздух, завязывают и помещают в 1,5 М раствор фумарата аммония (рН 8,2) объемом

14 мл, что соответствует содержанию

3,15 г соли.

За протеканием процесса следят по примеру 1. После превращения 80903 фумаровой кислоты в яблочную целлофановый мешочек переносят в новую порцию фумаровой кислоты.

Результаты представлены в табл.6.

Как видно из таблицы, добавление суспензни эритроцитов быка оказывает заметное стабилизирующее действие.

В циклах 1-4 не менее 807 превращения фумаровой кислоты в яблочную происходит в течение 7-11 суток, а в последующих циклах — в течение 2122 сут.

Без добавления суспензии эритроцитов уже во втором цикле в течение

10-21 суток достигнуто только 407 превращения фумаровой кислоты в яблочную.

Пример 7. 0,1 г влажной биомассы хлебопекарных дрожжей, хранившихся при температуре or -5 до -9 С в течение 145 сут, помещают в целлофановый мешочек, в который добавляют 0,2 r сухого фумарата аммония и 0,9 мл суспензии эритроцитов быка, что составляет 450 об.X от объема содержимого камеры. Целлофановый мешочек, из которого предварительно удаляют воздух, завязывают и помещают в 1,5 М раствор фумарата аммония (рН 8,2) объемом 14 мл, что соответствует содержанию З,IS г со.ли.

За процессом следят по примеру 1.

1254004

Таблица 1

Влияние активировання дрожжей на превращение фумаровой кислоты в яблочную

Условия активирования

Вариант

Количество образованной яблочной кислоты, г, на 1 r сухой биомассы дрожжей

Количество фумаровой кислоты, г на 1 г сухой биомассы дрожжей

Состояние дрожжей

Биомасса не заморожена

17 4

17,45

69,6

То же

68,3

За 19 сут в яблочную кислоту превращено около 5Х фумаровой кислоты

Биомасса заморожена

17,45

278,4

558,0

273,4

515,0

Та блица 2

Влияние активировавия дрожжей Saccharomyce vini на превращение фумаровой кислоты в яблочную

Вариант

Количество обраэованной яблочной кислоты, r, на 1 г, сухой биомассы дрожжей

Условия активирования

Время,в течение которого не менее

803 фумаровой кис лоты превращается в яблочную, сут

Количество фу-* маровой кислоты г на 1 г сухой биомассы дрожжей

Состояние дрожжей

1 Биомасса не заморожена

2 То же

557,0

После превращения 80-90Х фумаровой кислоты s яблочную целлофановый мешочек переносят в новую порцию раствора фумарата аммония. Результа-. ты представлены в табл.б.

Как видно из таблицы, длительность превращения основного количества фумаровой кислоты в яблочную в первых двух циклах составляет 7 сут, в следующих трех циклах- 10-11 сут., Реализация предлагаемого изобретения позволяет значительно увеличить скорость по..учення L-яблочной кислоты и выход продукта в расчете на 1 г биомассы дрожжей, упростить процесс при использовании дрожжей, иммобилиэованных предложенным способом, а также снизить затраты на получение целевого

10 продукта.

Время, в течение которого не менее 80Ж фумаровой кислоты превращается в яблочную, сут

1254004

Иродолжение табл 2.

Условия активирования

Вариант

Количество образованной яблочной кислоты, r, на 1 r сухой биомассы дрожжей

Вречя, в течение которого не менее

807 фумаровой кис лоты превращается в яблочную, сут

Состояние дрожжей

В яблочную кислоту превращается не более 30% фумаровой кислоты

1112,0

4 Биомасса заморожена

17,4

16,8

5 То же

557,0

1112, О

514,6

1028 0

6 ю

За 24 сут в яблочную кислоту превращается не более 70Ж фумаровай кислоты

7 ее

2224,0

Т а блица 3

Влияние активирования дрожжей Saccharomyees cerevisiae на превращение фумаровой кислоты в яблочную

Условия активирования

Время, в течение которого не менее 80Х фумаровой кислоты превращается в яблочную, сут

Вариант

Количество фумаровой ки лотыэ гь на 1 г сухой биомассы дрожжей

Состояние дрожжей

34,2

34,8

Биомасса не заморожена

Биомасса заморо» жена

34,8

16,1 fo же (Другой образец) 32,2

Количество фумаровой кислоты, г, на 1 г сухой биомассы дрожжей

Количество образованной яблочной кислоты, г, на

1 г сухой биомассы дрожжей

13 1254004

Таблица 4

14

Продолжение табл.5

Цикл верхнего нижнего

Приме чан не. Вцикле 3 через 22-31 сут достигнуто лишь 60% превращения фумаровой кислоты в яб- лочную, в цикле 4 через 10-17 сут достигнуто лишь 70% превращения фумаровой кислоты в .яблочную; в цикле 6 через 21-28 сут достигнуто лишь 20% превращения фумаровой кислоты в яблочную, в цикле 7 через 1016 сут достигнуто лишь 40% превращения фумаровой кислоты в яблочную; в цикле 10 через 6-9 сут достигнуто лишь 40% превращения фумаровой кислоты в яблочную.

Таблица 5

Таблица 6

50 Цикл

Влияние положения полупроницаемой камеры с дрожжами в инкубационной среде на превращение фумаровой кислоты в яблочную ремя {сут) в течение котоого в каждом цикле не меее 80% фумаровой кислоты превращается в яблочную, в ависимости от слоя инкубационной среды

Влияние гемоглобина на превращение фумаровой кислоты в яблочную иммобилиэованными дрожжами Saccharomvces cerevisiae

Время (сут), в течение которого в каждом цикле не менее 80% фумаровой кислоты превращается в яблочную, в зависимости от количества гемоглобина в полупроницаемой камере с дрожжами, мас.Ж.

1 J

7 7 7 8 7

0 3 5 10 20

2 21 11 11 11

10 10 t0

10 10 8

21 10 8 Время (;ут), в течение ко-; торого в каждом цикле не менее 80% фумаровой кислоты превращается в яблочную, в зависимости от количества гемоглобина в полупроницаемой камере с дрожжами. мас.X.

0 3 5 10 20

Влияние суспензии эритроцитов на превращение фумаровой кислоты в яблочную иммобилиэованными дрожжами Saccharomyces

cerevisiae

Время (сут), в течение которого в каждом цикле не менее 80% фумаровой кислоты превращается в яблочную, в зависимости от количества суспенэии эритроцитов в полупроницаемой камере с дрожжами, об.%

О )7 14)33 100 450

1 10 ? .10 ? 6 7

2 — 10 10 12 7 7

16

Таблица 7 254004

Продолжение табл. 6

Время (сут), в течение icoторого в камдои цикле не менее 8(C Фуиаровой кислоты превращается в яблочную, в зависимости от количества суспеизии зритроцитов э полупроницаемой камере с дрожжамиу Обгон

Превращение фумаровой кислоты в яблочную свободными дрожжами Candida lipolytica

Наличие янтарной кислоты в инкубационной смеси

Степень превращения фумаровой кислоты в яблочнуюу Х

Время от начала Цикл

1О опыта, сут

10 13 12 7 10

11 11 11 7 11

22 11 11 7 11

21 22 — 14 15

21 — - — 13

30

80

Нет

21 — 25 20

Нет

П р и м е ч а н и е. В цикле 2 через 10-21 сут достигнуто лишь 40Х превращения. фумаровой кислоты в яблочную, в цикле 7 через 21 сут достигнуто лишь 70Х превращения фумаровой кислоты в яблочную, в цикле 6 через 14-15 сут достигнуто лишь 70Х превращения фумаровой кислоты в яблочную в цикле 7 через 14-15 сут

35 достигнуто липь 70Х превращения фумаровой кислоты в яблочную, в цикле

8 через 13-15 сут достигнуто лишь

65Х превращения фумаровой кислоты в яблочную.

Составитель Л. Минеева

Техред g.Ходанич Корректор А. Обручар

Редактор Л. Повхан

Заказ 4687/29

Тираж 490 Подписное

ВНИИЛИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-ÇS, Раушская наб., д. 4/S

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,4