Штамм @ @ @ 7-тест-культура для определения @ -тирозина

 

Штамм Pseudomonas species М7 (коллекция Центрального музея промышленных микроорганизмов Института ВНИИгенетика, коллекционный номер В-3245) - тест-культура для определения L-тироэина. ю СП

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕЕЕНИЯ

И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТИРЫТИЙ (21) 3864846/28-13 (22) 01.03.85 (46) 30.08.86. Бнш. У 32 (71) Белорусский ордена Трудового

Красного Знамени государственньнЪ университет им, В.И. Ленина (72) И.Н. Олехнович, Н.П. Максимова и IO.Ê. Фомичев (53) 663.11(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 742462, кл, С 12 P 13/22, 1978.

„SUÄÄ 2 4006 А1 (50 4 С 12 P 13/22, С 12 Q 1/02 //

С 12 К 1:38 (С 12 P 13/22, С 12 (54) ШТАММ PSEUDONONAS SPECIES М2

ТЕСТ-КУЛЬТУРА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ L-ТИРОЗИНА (57) Штамм Pseudomonas species М7 (коллекция Центрального музея промьпвленных микроорганизмов Института

"ВНИИгенетика", коллекционный номер

В»3245) — тест-культура для определения Ь-тирозина.

4 125

Изобретение относится к микробиологической промьппленности и касается нового штамма, являющегося тест-культурой для определения чродукции Lтирозина.

Целью изобретения является получение нового штамма Pseudomonas species М7, специфичного и чувствительного к содержанию L-тирозина в среде, с помощью которого можно выявлять

f,-тирозин, начиная с 0,5 мкг/мл, на простых по составу жидких и агаризованных минеральных срецах среди различных групп микроорганизмов, н том числе ассимилирующих низшие спирты (этанол или метанол) в качестве источника углерода и энергии.

Предлагаемый штамм Pseudomonas

sp. М2 получен с помощью мутагенеэа

1 . Н-метил-И -нитро-N-нитрозогуанидином и является ауксотрофным тирозинзависимым мутантом штамма дикого типа

Pseudomonas sp. М выделенного из сточных вод Минского завода медпрепаратов.

Идентификацию мутации зависимости по тирозину (TYR ) у бактерий

Pseudomonas зр. М7 осуществляли по от"утствию способности расти на минеральных средах без Е-тиpозина. Минимальная концентрация L-тирозина, обеспечивающая рост бактерий этого штамма в жидких и агаризованных минеГ ральных средах, соответствует

0,5 мкгlмл.

Штамм Pseudomonas зр. М7 хранится в Центральном музее йромьппленных микроорганизмов "ВНИИгенетика" {Москва), В В- 3245.

Штамм Pseudomonas sp. М 7 имеет следующие характеристики. ,Морфологические особенности штамма. Клетки прямые, палочковидной формы с округленными концами О,бх2-3Р. подвижные с 2-4 монополярными жгутиками, грамотрицательные, спор не o6" разуют.

Культуральные признаки. Колонии на агаризованных питательных средах (мясо-пептонном агаре, Кинг В агаре) гладкие, плоские, круглые, край ровный, серовато-белые. Через 24 ч при

28 С образуют колонии размером 2—

3 мм. Рост по уколу в МПА умеренный, в основном на поверхности среды. В жидких питательных средах образует интенсивную муть.

Хорошо растет на минеральных средах простого состава, дополненных L400б 2 тирозином, и не нуждается в добавлении ростовых факторов и других аминокислот, Физиолого-биохимические признаки.

По отношению к кислороду — облигатный аэроб, Оптимальная температура роста

28-30 С, рН среды в пределах 6,8-7,3.

Азот утилизирует в виде солей аммония, мочевины, нитратов.

Пигменты. Образует желто-зеленый водорастворимый флюоресцирующий пигмент на Кинг В агаре. Внутриклеточного пигмента не образует.

Реакция на оксидазу и каталазу положительная. Реакция Форес-Нроскауэра отрицательная. Индол не образует.

Тест на анаэробную аргинин-дегидролазу положительный. Реакция на анаэробную денитрификацию отрицательная.Ле20 цитиназная акткзность отсутствует.

Не гидролизует крахмал, желатин, Твин-80.

В качестве источников углерода использует глюкозу, глицерин, сахарозу, 25 галактозу, мальтозу, фруктозу, этанол, метанол, тирозин, фенилаланин, орнитин, глицин, лейцин, глютаминовую кислоту, аспарагиновую кислоту. Не утилизирует арабинозу, маннозу, ксило, 3О зу, лактоэу маннит, раффиноэу, дульцит, сорбит, целлобиозу, инозит, серин, лизин, триптофан, антраниловую кислоту, ацетамид.

Штамм идентифицирован как Pseudoшопаз sp. М7 согласно определителю

Bergey, Пример 1. Определение L-тирозина с помощью тест-культуры Pseudomonas sp. М7 производят следующим образом. Делают посев культуры Pseudomonas sp. М7 с косяка в МПБ (мясопептонный бульон), либо в другую питательную среду, обеспечивающую рост бактерий, и культивируют в течение ночи при 28 С. Затем бактернальные клетки отмывают дважды физиологическим раствором с помощью центрифугирования (10 мин, 5000 g) и ресуспендируют до первоначального объема в этом же растворе. 0 1 мл суспензии клеток вносят в пробирку с 4 мл расплавленно-.о и охлажденного до 45 С минимального полужидкого агара .{0,7X) приготовленного на основе минеральйой среды М9, содержащего в качестве источника углерода глюкозу (в концентрации 0,2X); и наслаивают вторым слоем на поверхность агаризованной среды (1,5X) того же состава.ПосСоставитель Н. Афанасьева

Техред М.Ходаиич Корректор JI. Пилипенко

Редактор Л. Повхан

Заказ 4687/29

Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Рауш кая наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 1254 ле застывания верхнего слоя с культурой уколом делают посевы отдельных клонов испытуемых на продукцию 1.-тирозина культур микроорганизмов, утилизирующих в качестве источника угле- 5 рода и энергии глюкозу (по 20-30 клонов на чашку Петри). Пробы выращивают в течение 24 — 48 ч при

28-30 С. Вокруг колоний, клетки которых продуцируют L тирозин, наблюдают- 1р ся четкие, интенсивные зоны роста индикаторной тест-культуры Pseudomonas

sp. М7, размеры которых зависят от количества синтезируемого 1.-тирозина.

Пример 2. Посевной материал 15 .тест-культуры Pseudomonas sp. И? и

:последующие процедуры производят по примеру 1, за исключением того, что в качестве источника углерода и энергии в используемые минеральные среды добавляют вместо глюкозы этанол (в концентрации 17) и делают посевы испытуемых на содержание Е- стирозина культур микроорганизмов, утилизирую-. щих этанал. 25

006 4

Пример 3. Посевной материал тест-культуры Pseudomonas sp. М7 и последующие процедуры производят по примеру 1, за исключением того, что в качестве источника углерода и энергии в используемые минеральные среды добавляют метанол (в концентрации

1X) и делают посевы испытуемых на содержание L-тирозина культур микроорганизмов, утилизирующих метанол. Пробы выращивают в течение 48-72 ч.

Штамм Pseudomonas sp. М7 является мутантом по TYR-гену, что обеспечивает его потребность и высокую специфичность по отношению к L-тирозину.

С помощью штамма Pseudomonas sp. М7 можно выявлять и изучать продукцию

L-тирозина, начиная с 0,5 мкг/мл, на простых по составу минеральных средах среди различных групп микроорганизмов, в том числе ассимилирующих низшие спирты (этанол или метанол) в качестве источников углерода и энергии.