Способ определения белка в растворе
Изобретение относится к биохимии . Цель изобретения - упрощение и повышение точности способа. К биуретовому раствору добавляют определенное количество пробы, хорошо смешивают. Через 30 мин пробы фотометрируют по отношению к дистиллированной воде при 545 нм. Определяют удельную зкстинкцию белка, связанного с реактивом. Расчет содержания белка в опытной пробе проводят с . учетом биуретового реактива, не связавшегося с белком. to сд 4; со 00 О)
СОЕЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
„„SU„„1254386 А 1 (51)4 G 01 Я 33/48, А 61 В 10/00
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Ъ у j
К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3672755/28- 14 (22) 12. 12.83 (46) 30.08.86. Бюл. Ф 32 (71) Институт физиологии АН КазССР (72) Р.А. Гареев и А.А. Мурзамадиева (53) 547.96(088.8) (56) Инструкция ВНМЦ по лабораторному делу. Утв. М3 СССР 11.04.72, Ф 290. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА
В РАСТВОРЕ (57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения — упрощение и повышение точности способа. К биуретовому раствору добавляют определенное количество пробы, хорошо смешивают. Через 30 мин пробы фотометрируют по отношению к дистиллированной воде при 545 нм. Определяют удельную экстинкцию белка, связанного с реактивом. Расчет содержания белка в опытной пробе проводят с учетом биуретового реактива, не связавшегося с белком.
0,3232, Ч+И Ч
Р = 4 1438(à — g .) н о
Р 0 3339 0 0 4 1438 3
Ч + Ь V
4,« - — О Згзг.
0 N N 1 (2) Формула изобретения
Составитель Н.Гуляева
Техред И. Попович
Редактор М. Циткина
Корректор Т.Колб
Заказ 4714/48
Тираж 778 Подписное
BHHHIIH Государственногр комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г . Ужгород, ул. Проектная, 4
Изобретение относится к медицинской биохимии, а именно к определению белка в растворе, и может быть использовано для исследования биологических жидкостей.
Цель изобретения — упрощение и повышение точности способа эа счет учета вклада экстинкции непрореагировавшего биуретового реактива.
Способ состоит в следующем. К биуретовому раствору добавляют определенное количество пробы, хорошо смешивают. Через 30 мин пробы фотометрируют по отношению к воде при
545 нм. Показатели подставляют в формулу где Р— концентрация белка, г7.2 — объем биуретового реактива,мл, — объем пробы, мл;
à — экстинкция пробы н,о
1 экстинкция биуретового реактива, При использовании стандартного биуретового реактива с M = 0,078 формула (1) принимает следующий вид:
Способ определения белка применим ко всем растворам и биологическим жидкостям, где отсутствует побочное поглощение света в диапазоне 545 нм (например, гемоглобином): лимфе, ликвору, плазме крови, растворам с добавленным белком промышленного изготовления.
Пример. Берут 0,05 мл плазмы крови, смешивают с 5,0 мл биуретового реактива и через 30 мин фотометрируют на спектрофотометре при дли12 54386 2 не волны 545 нм. Спектрофотометр устанавливают на нулевую экстинкцию по дистиллированной воде. При фотометрировании опытной пробы получают экстинкцию, равную 0,2325 ед. оптической плотности. Подставляя все значения в формулу (2), получают:!
О
Р= О 2328 — — 4 1438 — — — — °
0,05 5 или Р = 65 г/л белка в плазме крови.
При изменении соотношения объемов пробы и биуретового реактива (0,05 и 3,0 мл) получают экстинкцию опытной пробы 0,3330 Подставляя все значения в формулу расчета концентрации белка (2), получают:
0,3232, или Р = 65 г/л белка в плазме крови.
Таким образом, использование различных соотношений пробы и биуретового реактива дает при определении концентрации белка одно и то же значение.
35 Способ определения белка в растворе путем добавления биуретового реактива и спектрофотометрирования, отличающийся тем, что, с целью упрощения и повышения точ40 ности способа, в качестве контрольной пробы используют дистиллированную воду, определяют удельную экстинкцию белка, связанного с реактивом, и расчет содержания белка в
45 опытной пробе проводят с учетом биуретового реактива, не связавшегося с белком.
