Способ получения толерогена

 

Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - повышение стабильности при сохранении толерогенных свойств и упрощение способа. Гамма-глобулин разводят физиологическим раствором. К полученному раствору добавляют мочевину и инкубируют при комнатной температуре. 3 табл. (Л bQ сл Од

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5ц 4 G 09 В 2328

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3657749/28-14 (22) 31.08.83 (46) 07.09.86. Бюл. № 33 (71) Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины АМН СССР (72) Т. Г. Шемеровская и Б. Н. Софронов (53) 615,75(088.8) (56) Сафронов Б. Н. Основные закономерности приобретенной иммунологической толерантности и ее роль в патологии. Докт. диссерт. Л., 1967, с. 27 — 45.

„„SU„„ I 256079 А1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТОЛEPOГЕНА (57) Изобретение относится к иммунологии.

Цель изобретения — повышение стабильности при сохранении толерогенных свойств и упрощение способа. Гамма-глобулин разводят физиологическим раствором. К полученному раствору добавляют мочевину и инкубируют при комнатной температуре. 3 табл.

1Я

Сл

Cb

CO 3

С0

1256079

Пример 1. 0,1 мл донорского противогриппозного гамма-глобулина (80 мг)мл) разводят физиологическим раствором до 8 мл (концентрация 1 мг/мл) . К полученному раствору антигена добавляют 8 мл 0,12 М мочевины и инкубируют в течение 24 ч при комнатной температуре. Восьми мышам линии С57 BLJCBA) F вводят внутривенно по

1 мл полученного препарата. Одновременно двадцати контрольным мышам внутривенно вводят по 1,0 мл физиологического раствора.

Через неделю опытным и контрольным мышам делают тест-инъекцию, вводя внутрибрюшинно 4 мг антигена в адъюванте

Фрей нда.

Результаты представлены в табл. 1.

Т а блица

Число животных

Группы

Контроль

Опыт

1000/О гемолизу С, Н„ модифицированным методом. Толерогенность препарата подтверждают в опытах на мышах .(C57UCBA)

F,. Трем группам мышей (по 20 шт в группе) внутривенно в объеме 1,0 мл вводят либо антиген, обработанный мочевиной (опыт), либо ультрацентрифугированный (контроль 2), либо нативный (контроль 1). Через неделю всем животным вводят внутрибрюшинно 4 мг антигена (тест-инъекция) в адъюванте Фрейнда. Циркулирующие антитела выявляют в реакции пассивной гемагглютинации по Бойдену на 20-е сутки после иммунизации. Результаты представлены в табл. 2.

Таблица 2

Уровень достоЧеловеческий иммуноглобулин

Группы верности, P

280+57

1,7+0,8

5,0+0,6 (0,01

3,95

Контроль 1

Контроль 2

Опыт

1,5

2,2

Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии, и может найти применение при изучении механизмов иммунологической толерантности и обоснования способов создания специфической ареактивности к чужеродным белкам, аллергенам, трансплантатам.

Цель изобретения — повышение стабильности при сохранении толерогенных свойств и упрощение способа за счет исключения физического воздействия на антиген.

Способ осуществляют следующим образом.

К антигену, перед введением его животному, в концентрации 1 — 75 мг)мл добавляют раствор 0,03 — 1,0 М мочевины равного объема и инкубируют в течение 1 — 24=ч.

Как показано в табл. 1, число животных, имеющих антитела в ответ на введение тестантигена, достоверно меньше в опытной группе по сравнению с контрольной (0,01)

Пример 2. 2,0 мл донорского противогриппозного гамма-глобулина разводят физиологическим раствором до 8 мл (концентрация 20 мг)мл). К полученному раствору антигена добавляют 0,03 М мочевины в объеме 8 мл и инкубируют в течение 3 ч при комнатной температуре. Полученный и репарат оценивают по способности к потреблению комплемента и вводят мышам для индукции толерантности. Способность препарата к сорбции комплемента оценивают по

Нативный

Ультрацентрифугированный

Обработанный мочевиной

Из них с антите- Уровень дослами товерности,Р оглощение Титр антител омплемента (ед) 1256079

Таблица 3

Сохранение толерогенных свойств Возможность повторения эксперимента

7 сут

30 мин

Предлагаемый способ

Известный способ

Составитель М. Позняк

Техред И. Верес Корректор Л. Патай

Тираж 455 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Г!атент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор А. Сабо

Заказ 4829!51

Как показано на табл. 2, антиген, обработанный мочевиной, так же как и ультрацентрифугированный антиген, достоверно меньше потребляет комплемент и предотвращает выработку антител, т.е. обладает толерогенным действием.

Пример 8. К 2 мл донорского противогриппозного гамма-глобулина добавляют

2 мл 1 М раствора мочевины и инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре.

Полученный препарат разводят физиологи- 10 ческим раствором до концентрации 1 мг/мл (0,1 + 7,4 мл физ.р-ра) и определяют его способность сорбировать комплемент по

100% гемолизу. Одновременно определяют

Формула изобретения

Способ получения толерогена, включающий дезагрегацию глобулиновых препаратов, отличающийся тем, что, с целью повышения стабильности при сохранении толерогенных сорбцию комплемента нативным антигеном.

При отчете реакции гемолиза нативный антиген потреблял 4,5 ед. комплемента, тогда, как антиген, обработанный мочевиной, 2,5 ед. комплемента. Антиген, обладающий сниженной антикомплементарной активностью, является индуктором толерантности.

Препарат, полученный предлагаемым способом, обладает толерантными свойствами, отличается стабильностью, 100о/о выходом препарата.

В табл. 3 приведены сравнительные данные о сохранении толерогенных свойств препарата, полученного известным и предлагаемым способами. свойств и упрощения способа, дезагрегацию осуществляют 0,03 — 1,0 М раствором мочевины при содержании 1 — 75 мг/мл белка в исследуемом материале и инкубируют в течение 1 — 24 ч.