Способ получения производных простагландина
Изобретение касается . гландинрв, в частности производных простациклина общей формулы I СН2 СНг Сн/ cfii бн ж-СН. ,S%$H2CH2 ™« ™ где R - фармакологически приемлемый катион, которые как обладающие антиагрегирующим действием на тромбоциты могут быть использованы в медицине . Для выявления фармакологической активности у соединений указанноСО го класса получены новые соединения I. Процесс ведут путем дегидродегалоидирования соответствующего производного 5 -йод-9-деокси-6, 9о1-эпоксипростагландина F. основанием, с последующим при необходимости гидрого лизом сложноэфирного производного в присутствии основания.Соединения I i4 обладают сильным противоагрегирукпцим действием в отношении тромбоцитов, а Oi ю также являются сосудорасширяющим веществом .
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н flATEHTY сн, ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР по ДелАм изОБРеТений и ОткРытий (21) 2480851/23-04 (22) 10.05.77 (31) 13389/77 (32) 30.03.77 (33) GB (46) 30.11.86. Бюл. N - 44 (7 1) Дзе Веллкам Фаундейшн Лимитед (СВ) (72) Сальвадор Монкада (HN) и Норман
Виттакер (СВ) (53) 547.514.71.07(088.8) (56) S. Noncada, R. Gryglewski, S. Bunting, I.R. Чапе. An enzyme
isolated from arteries transforms
prostaglandin endopегоxides tq an
uns table substance that in hibits
platelet aggregation. — Nature, 263, У 5579, 1976, р. 663-665. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ
ПРОСТАГЛАНДИНА (57) Изобретение касается простангландинов, в частности производных простациклина общей формулы I.„Я0 „„1274621 А 5 дц 4 С 07 С 177/00 // А 61 К 31/557
СНо СН о-с, „йсоо, CH:== й, н д, н сн сн сн но нн 0ц снг где R — фармакологически приемле1 .мый катион, которые как обладающие антиагрегирующим действием на тромбоциты могут быть использованы в медицине. Для выявления фармакологической активности у соединений указанного класса получены-новые соединения
I. Процесс ведут путем дегидродега-лоидирования соответствующего производного 5 (-йод-9-деокси-6, 9 -эпоксипростагландина Г основанием, с последующим при необходимости гидролизом сложноэфирного производного в присутствии основания. Соединения I обладают сильным противоагрегирующим действием в отношении тромбоцитов, а также являются сосудорасширяющим веществом.
1274621
Изобретение относится к способу получения новых производных класса простациклина, именно к производным простагландина
5 где R, — фармакологически приемлемый катион, ll5 обладающих рядом ценных фармакологических свойств.
Пель изобретения — получение новых производных класса простациклина, обладающих преимуществами н фармакологическом отношении перед природными простагландинами.
Пример 1. Перемешанный раствор PGF ol сложного метилового эфира
2 (50 мг) в простом эфире (1 мл) обрабатывают 115,0 мг (10 мл. экн.) бикарбоната .натрия и 1 мл воды, затем по каплям в течение 2 ч вводят в водный раствор трехйодистого калия (0,7 молярный, 0,261 мл). После перемешива-Зр ния н течение 8 ч реакционную смесь
> встряхивают с простым эфиром и водным раствором тиосульфата натрия; эфирную фазу отделяют, промывают водой, сушат над сульфатом магния и упаривают с получением желтого остатка метилового сложного эфира 5 ) --йод-9-деокси-6, 9 ы -эпоксипростагланцина Р, Раствор.метилового сложного эфира
5(-йод-9-деокси-6, 9 и -эпоксипростагланцина Р (100 мг) н метанольном метилате натрия, приготовленном из 46 мг натрия и 0,70 мл сухого метилового спирта, оставляют в атмосфе- 4 ре сухого азота на 5 ч и затем выделяют из растворителя н высоком вакууме.Полученное аморфное твердое вещество промывают в бензоле,выдерживают на воздухе 8 ч.и перемешивают с нормальным водным раствором гидроокиси натрия (0,5 мл) с получением суспензии бесцветных мелких кристаллов игольчатой формы.
Кристаллы собирают, пр омывают н е сколькими каплями нормальной водной гидроокиси натрия, сушат на воздухе с получением натриевой соли 9-деокиси-6,9 > -эпокси- й5-простагландина
F . Были сопоставлены подавление агрегации тромбоцитов человека, обусловленной арахидононой кислотой, при концентрации 0,2 нг/мл этой соли и ее нестабильность в воде в кислой среде, а также другие данные с соответствующими свойствами натриеной соли (5Z)-5,6-дидегидро-9-деокси-6,9 -эпоксипростагландина F<@, 13, ЯМР спектр с высоким разрешением раствора кристаллов в диметилсульфоксиде-d показал наличие ожидаемых 20 резонансньгх полос, причем эти химические полосы полностью согласуются с химической структурой, установленной для простациклина.Никаких примесей не обнаружено. р и м е р 2. Метилоныи сложныи эфир 5F-йоц-9-деокси-6, 9 -эпоксипростагланцин F (500 мг) перемешивают с метилатом натрия, полученным из 0,23 r (10 мол.экв.) натрия и
3 5 мл метилового спирта, в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 8 ч. К желтому реакционному раствору добанляют однонормальный раствор гидроокиси натрия (2,5 мл), тем самым вызывая гидролиз эфирной части, и спустя 2 ч в вакууме испаряют при комнатной температуре метиловый спирт. Из оставшегося водного раствора =понтанно выделяется масса бесцветных тонких игольчатых кристаллов требуемой соли натрия (формулы 1 : R = Na) . Ее охлаждают, собирают, промывают умеренно однонормальной водной гидроокисью натрия, сушат на воздухе и хранят в пробирке, закрытой пробкой. Полученная соль (381 мг) имеет (KBr диск)
1692 см (О-С=С) и двадцать 13 резонансных полос наблюдают (при 182,7 (С-1), 158,2 (С-6), 140,0 и 134,3 (С-13), 14, 100,7 С-5, 87,5 (С-15)
80,6 и 75,5 (С вЂ” 9), 11 38,0 (C — 12), 49,0, 45,8, 42,4, 41,9, 37,5, 35,8 (С-18), 3 1,6,„ 29,9, 29,3, 26,7 (С-19) и 18,4 (С-20) частей на миллион из
TMS в диметилсульфоксиде-d . Продукт натрий (5Z)-5,6-дидегидро-9-деокси-6,9 -эпоксипростагландин F,„ (синтетический натрийпростациклин) полностью подавляет агрегацию тромбоцитов, вызываемую арахидоновой кислотой (в человеческой плазме, обогащенной тромбоцитами) при 1 нг/мл, и его профиль биологической активности на аорте кролика, брюшной аорте кролика, полоске желудка крысы и толстой отвечает натрийпростацнклину, полученному биосинтезом. После сушки на воздухе получают соль, покрытую карбонатом натрия (примерно 3,5 вес.X), который защищает винилэфирную часть от гидролиза, катализируемого углекислым газом.
Пример 3. В течение нескольких часов при комнатной температуре метиловый сложный эфир 5)-йод-9-деокси-6, 9d-эпоксипростагландина Р обрабатывают 1,5-диазабицикло-5-ноненом (ДБН). ДБН и йодистый водород удаляют адсорбцией на колонке SiO» приготовленной из суспензии Si0 в
Et 0Ac/Et N 50:1, и виниловый простой эфир элюируют такой же растворяющей системой. ИК спектроскопией на тонкой пленке установлено: ) щ щ
1738 (СО,Ме) и 1696 см 1 (-О-С=С).
Н ЯИР в СпДп-Е, N 19:1; 4,22 триплет триплетов 12, g 6, 9 и 1, С Гц (С-5 виниловый протон) и СЯМР в С Д -Et,Н
i9:1 характерным признаком являет- 25 ся резонанс при 159,8 С-1, 155,8 (С-6), 137,2 и 130,6 (С-13, 14), 95,3 (С-5, 84,1 (С-15), 77,3 и 72,2 (С-9, 11) и 51,1 (метиловый сложный эфир) частей на миллион из ТМС.
Метиловый сложный эфир винилового простого эфира (5Z)-5,6-дидегидро-9-деокси-6,9 -эпоксипростагландина гидролизуют водным раствором гидроокиси натрия с получением натрийпростациклина (формулы I c R-натрием).
Было установлено, что микросомы, получаемые из различных тканей млекопитающих катализируют ферментаЭ
40 тивное превращение простагландинэндоперекисей в производное простагландина (в дальнейшем именуемое простациклином), которое не вызывает сжатия аорты кролика, вызывает расслабление.
45 полосок бркппной, брыжечной и коронарной артерий, обладает сильным противоагрегирующим действием в отношении .тромбоцитов, является сильным сосудорасширяющим препаратом в отношении всех животных. 50
Микросомы, приготовленные из кровеносных сосудов кролика или свиньи (вен и артерий) и из дна желудочкакрысы, вызывают примерно 80-90Х-ное превращение простагландинэндоперекн- ээ сей. Микросомы, приготовленные из легочной ткани кролика и пиролисной ткани крысы, вызывают 257-ное прав3 кишке крысы совпадает с тем, который
1274621 ращение простагландинэндоперекисей. в то время как микросомы, полученные из почки, мозга, селезенки, печени, сердца, и семенных пузырьков крысы, вызывают 5Х-ное превращение или даже более низкую степень превращения простагландинэндоперекисей.
Простациклин в водной среде при комнатной температуре нестабилен, имеет период полупревращения,равный примерно 10 мин. Однако противоагрегирующая активность простациклина может сохраняться в течение нескольких дней при его.растворении в водной щелочи или сухом ацетоне и хранении раствора при -20 С. Антиагрегирующая активность простациклина в 10-40 раз выше, чем активность PGE, и в 520 pas b e, e PGD, который сам по себе является сильным ингибитором агрегации тромбоцитов.
Простациклин может быть получен биосинтетически инкубированием РСС или PGH, с микросомами аорты в под.ходящем буферном растворе, например, трис-буффере, примерно в течение
2 мин при температуре примерно 22 С.
Превращение простагландинэндоперексией составляет 85Х.
Экстракция простациклина достига ется добавлением к инкубированной смеси холодного (О С) сухого серного эфира. При добавлении холодного эфира. ферментативная реакция прекращается и простациклин переходит в эфирную .
:фазу. Последняя может быть отделена от водной фазы. Выпариванием простого эфира, осуществляемым стандартными методами, например, пробулькиванием азота через раствор, может быть получен простациклин в виде остатка, который в дальнейшем может быть суспендирован в водном растворе для дополнительной проверки или растворен в безводном ацетоне и сохранен при
-20 C для последующего использования.
Микросомы аорты, применяемые в смеси, которая подвергается инкубированию, может быть экстрагированы из аорты свиньи или кролика. Аорты могут быть заморожены в жидком азоте и затем измельчены до порошкообразного состояния. Полученный порошок суспендируют в подходящем буферном растворе и затем гомогенизируют. Гомогенат затем подвергают центрифугированию с целью выделения микросомной фракции, которую могут суспендировать в деионезированной воде и лио1274
5 филиэовать. Путем регулирования агрегации тромбоцитов человеческой крови в агрегометре Бориа (см. чертеж). было показано, что инкубированная смесь оказывает прямое противоагрегирующее действие.
Простациклин может быть получен существенно аналогичным способом при использовании других тканей, идентичных укаэанным выше. По-видимому, полу- fp чаемый в такой инкубационной смеси лростациклин отличается от других -. продуктов простагландинэндоперекисей, описанных ранее. По своему биологическому эффекту, оказываемому на вы- 1 деленные ткани, нестабильности и по сильной противоагрегирующей активности простациклин отличается от РСЕ или РСГ „ . Описано присутствие в гомогенатах некоторых тканей проста- 20 гландин-0, -иэомеразы. Поскольку простациклин является нестабильным сое-, динением и обладает более сильной противоагрегирующей -активностью, чем
PGD,, это соединение не может быть 25
PGD,. Более того, простагландин-D,—
-изомераэа нуждается в глютационе как в совместно действующем факторе, и инкубирование проводят в отсутствии совместно действующих факторов. PGE» ù
PGF и PGD не являются субстратами микросом аорты и, следовательно, 15-кето-простагландины и другие продукты простагландинового катаболизма не могут рассматриваться как про- стациклин.
Простациклин и его соли также оказывают сосудорасширяющее. действие на кровеносные сосуды и, следовательно, могут использоваться в качестве противогипертонических препаратов для млекопитающих, в том числе и человека. Тромбоциты могут быть ассимилированы сосудистым эндотелием или внедрены в эндотелиальные клетки.
Биохимическое взаимодействие тромбоцитов и сосудистого эндотелия при синтезе простациклина способствует восстановлению сосудистого эндоте лия, следовательно, простациклин и его соли могут также использоваться в качестве препаратов, ускоряющих заживление ран у млекопитающих, в частности у человека.
Простациклин и его соли могут применяться всякий раз, когда необходимо подавить агрегацию тромбоцитов, снизить адгеэионный характер тромбоб21
4 I цитов, а также для лечения и для предотвращения образования тромбов у млекопитающих, в том числе у людей.
Например, они могут применяться при лечении и профилактике инфарктов миокарда, при лечении заболевания периферических сосудов, для лечения и профилактики послеоперационных тром- бозов, для стимулирования раскрытого состояния сосудистых трансплантатов в хирургии и для лечения осложнений артериосклероза и состояний, таких как атеросклероз, нарушений кровесвертывания, вызванных липемией, и других клинических состояний, в которых основная этнология ассоциируется с липидным разбалансом или гиперлипидемией.
Эти соединения также могут применяться в качестве добавок к крови, к продуктам крови, кровезаменителям и другим жидкостям, которые использу-ются при искусственной циркуляции вне организма и кровеснабжении изолированных частей тела, например, конечностей и органов, независимо от того, соединены ли они с донорным организмом, отделены и хранятся, приготовлены для трансплантации или прикреплены к реципиенту. При укаэанных циркуляциях и кровеснабжении агрегатированные тромбоциты стремятся закупорить кровеносные сосуды и части циркуляционной аппаратуры. Такой закупорки можно избежать в присутствии простациклина. Для указанных целей простациклин или его соли могут добавляться яостепенно или однократно или несколькими отдельными порциями в циркулирующую кровь, в кровь донорного животного, в отделенную часть тела, связанную или несвязанную с реципиентом, или во все перечисj ленные органы при суммарной постоянной дозе 0,001-10 мг на литр циркулирующей жидкости. Особенно целесообразно применять простациклин в лабораторной практике на кошках, собаках, обезъянах, кроликах и крысах при отработке новых методов и техники трансплантации органов и конечностей.
Для достижения терапевтического эффекта применяемые количества простациклина или его солей (в дальнейшем именуемых активными компонентами) меняются в зависимости от схемы лечения. Обычно для млекопитающих
1274621
X ñîó с с
10 НО где Х вЂ” йод;
У вЂ” группа OR где
9(OOC / с ф
20 нии
so/
Г кг
Составитель И. Федосеева
Редактор М, Циткина Техред, И.Попович 1 оРРектор И. Муска
Заказ 6493/60 Тираж 379 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4 приемлемые дозы лежат в пределах
0,01-200 мг «а 1 кг веса, желательно в пределах 0,01-10 мг/кг.
Хотя активный компонент может вводиться неочищенным, желательно использовать его в виде фармацевтических составов. Предпочтение отдается неводным и негидроксильным составам, но возможно применение щелочных водных растворов. Разовая доза состава содержит от 0,5 мг до 1,5 r активного компонента.
Формула изобретения
Способ получения производных про,стагландина общей формулы I
0Н
НО где R - фармакологически приемлемый катион, о т л и ч а ю щ и Й с я тем, что соединение общей формулы II
R, — Ñ,-CÄ- алкил или фармакологически приемлемый катион, подвергают дегидродегалоидированию основанием, и полученное соединение, где У вЂ” группа OR где R -С -С„-алкил, гидролизуют в присутствии основания с последующим выделением целе вых продуктов.
