Способ выделения рsеudомоnаs маlторнiliа

 

Изобретение относится к медицине , в частности к клинической микробиологии . Цель изобретения - повышение точности способа. Исследуемый материал суспендируют в растворе этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и инкубируют. Жидкий исследуемьш материал асептически центрифугируют. Осадок обрабатывают буферным раствором ЭДТА. Кровь исследуют после прорастания гемокультуры суспензии каждого образца исследуемого материала и вносят в жидкую селективную среду. Посевы инкубируют в термостате. Для приготовления среды можно использовать питательный бульон на любой основе с содержанием аминного азота 100-150 мг %. В стерильный бульон вносят навески цефазолина натрия, солафура, азида натрия, раствора сизомицина сульфата. Приготовленную селективную среду стерилизуют и разливают в стерильные бактериологические пробирки. 2 табл. € - ZfS

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ с Ц с

1 Ъ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3985661/28-14 (22) 17.12.85 (46) 15.03.88.Бюл. М 10 (71) Саратовский государственный медицинский институт (?2,) М.В.Тюрин и Г.М.Шуб (53) 5?6.8.093.) (088.8) (56) Holmes В. et аl. Distribution

in clinical material and identifiсаСiоп of Pseudomonas maltophilia

I.of clinical Pathology, 1979, 32, р.66-72.

Graevenitz А. von. et al. Хзо1аtion of Pseudomonas maltophilia from

humman stools with thienamyein EenCralblatt fiir Bakteriologie, Microbio1од е und Hygiene,1983, Abt.)А,253, 4, 447. (54) СПОСОБ ВБЩЕЛЕНИЯ PSEUDOMONAS

MALT0PHILIA (57) Изобретение относится к медицине, в частности к клинической микро(50 4 С )2 Q 1/04, С )2 N )/20// (С 12 Q )/04, С )2 R 1:38, биологии. Цель изобретения — повышение точности способа. Исследуемый материал суспендируют в растворе этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и инкубируют. Жидкий исследуемый материал асептически центрифугируют.

Осадок обрабатывают буферным раствором ЭДТА. Кровь исследуют после прорастания гемокультуры суспензии каждого образца исследуемого материала и вносят в жидкую селективную среду.

Посевы инкубируют в термостате. Для приготовления среды можно использовать питательный бульон на любой основе с содержанием аминного азота

100-150 мг %. В стерильный бульон вносят навески цефазолина натрия, солафура, азида натрия, раствора сизомицина сульфата, Приготовленную селективную среду стерилизуют и разливают в стерильные бактериологические пробирки. 2 табл.

3! !6137!!эобретение относится к медицине, в частности к клинической микробиологии.

Цель изобретения — повышение точS ности способа за счет повышения его .селективности.

II р и м е р 1, Исследуемый материал (фекалии, гной, раневое отделяемое, полостные экссудаты, моча, кровь, !0 смывы с больничного оборудования) суспендируют в 0,0035+0,001 M растворе этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) в 0,15 М трис-солянокислом буфере (pH 8,7-8,9) и инкубирувт при 15 оптимальной для Рseudomonas maltophilia температуре (35 С) в течение

2-2,25 ч. Жидкий исследуемый матери.ал из-за обычно невысокой концентрации микроорганизмов асептически цент- 20 рифугирувт при 3000 об/мин 15 мин, осадок обрабатывают буферным раствором ЭДТА. Кровь исследуют после прорастания гемокультуры 0,1-0,2 мл суспензии каждого образца исследуемого материала, обработанного буферным раствором ЭДТА, вносят в 5 мл жидкой селективной среды. Посевы инкубируют в термостате.

Среду готовят следующим образом, 40-50 г пасты гидролизата рыбного

Дагестанского института питательных сред МЗ СССР (можно использовать питательный бульон на любой основе с содержанием аминного азота 100

150 мг%) тщательно размешивают в 1 л холодной дистиллированной воды, кипятят, фильтруют и разливают во флаконы. Стерилизуют 30 мин при 110 С, рН бульона 7,2-7,5, содержание аминного 40 азота !00-150 мгЕ Затем в стерильный питательный бульон вносят навески цефазолина натрия, солафура,азида натрия, туда же добавляют стандартный ампульный раствор сизомицина 45 сульфата. Приготовленную селективную среду стерилизувт фильтрацией через стерильный миллипоровский фильтр диаметром пор 0,23 мкм и разливают в стерильные бактериологические пробир-50 ки по 5 мл.

Готовят три варианта селективной среды, отличающиеся концентрациями селективных агентов в 1 мг на л питательного бульона, мг:

1 вариант Цефазолин натрия 99

Солафур 59

101

IX p и м е р 3. Влияние концентрации ЭДТА в буферном растворе для обработки материала на воспроиэводимость результатов изобретения.

Сиэомиципа сульфат 1,4

Азид натрия 195

2 вариант Цефазолин натрия 100

Солафур 60

Сизомицина сульфат 1,5

Азид натрия 200

3 вариант Цефазолин натрия

Солафур

Сизомицина сульфат 1,6

Азид натрия 205

Каждый вариант селективной среды испытан на пригодность для выращивания Рзецйошопаs maltophilia, подвергнутой обработке буферным раствором

ЭДТА.

При использовании селективной среды первого и второго вариантов наблюдается хороший поверхностный рост

Pseudomonas maltophilia в виде неж-. ной пленки кремового цвета; а при использовании среды третьего варианта — слабый поверхностный рост и пленка хуже.

Пример 2. Использование способа выделения Pseudomonas maltophilia с высевом на селективнув среду варианта 2 (оптимальные концентрации селективных агентов).

Суточные агаровые культуры 23 референс-штаммов суспендируют в

0,0035+0 0001 М растворе ЭДТА в

0,15 М- трис-солянокислом буфере рН

8,7-8,9. Инкубируют в термостате при

35 С в течение 2 ч.

Затем 0,1-0,2 мл суспензии каждой культуры вносят в 5 мл селективной среды, содержащей на 1 л питательного бульона 100 мг цефазолина натрия, 60 мг солафура, 1,5 сизомицина сульфата, 200 мг азида натрия. о, Посевы инкубируют при 35 С,.Спустя !

8-20 ч наблюдают типичный поверхностный пленочный рост в пробирках с референс-штаммами Pseudomonas mal.tophi1ia. В других пробирках видимого роста нет. Контрольные высевы на

МПА из этих пробирок роста не дают.!

306137

1,4-1,6

ВНИИПИ Заказ 1 199 Тираж 520 Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Суточные агаровые культуры 23 референс-штаммов суспендирувт в буферных растворах (рН 8,7-8,9) с тремя различными концентрациями ЭДТА

0,0034, 0,0035, 0,0036 М. Суспенэии инкубирувт при 35 С 2-2,25 ч,Затем 0,1-0,2 мл суспензии каждой культуры вносят в три варианта селективной. среды и инкубирувт при 35 С.Спус- 10 тя 18-20 ч и регистрируют поверхностный пленочный рост в пробирках с референс-штаммами Pseudomonas maltophi-.

lia. В остальных пробирках видимого роста нет, Контрольные высевы из этих 15 пробирок на MIIA роста не дают.

При концентрациях ЭДТА в буферном растворе для обработки материала

0,0034 и 0,0035 M наблюдается хороший поверхностный рост в виде неж- 20 ной поверхностной пленки, а при концентрации 0,0036 M пленка скудная, разрушающаяся при прикосновении. !

Пример 4. Исследуют 100 проб мочи, взятых стерильными катетерами от 100 различных урологических больных. Каждую пробу асептически центрифугируют при 3000 об/мин в течение

15 мин. Осадок обрабатывают 0 0035+

+ 0,0001 M раствором ЭДТА в 0,15 М трис-солянокислом буфере (рН 8,7

8,9) в течение 2 ч при 35 С. Затем

0,1-0,2 мл суспензии каждой пробы вносят в 5 мл селективной среды,содержащей на 1 л питательного бульона 35 из пасты гидролизата рыбного концентрированного цефазолина натрия 99—

101 мг, солафура 59-61 мг, сизомицина сульфата 1,4-1,6 кг азида натрия

195-205 мг. Посевы инкубируют при

35 С. Затем регистрируют появление признаков роста. Спустя 20 ч в одной из пробирок появилась нежная поверхностная пленка кремового цвета, т.е. был веделен клинический штамм Pseudomonas maltophilia. При исследовании тех же проб классическим бактериологическим методом, имеюшим 1007 точность, среди уринокультур лишь одна была идентифицирована как Pseu- 50

domonas maltophilia. Ее источником была та же проба мочи, что при исследовании с помощьв данного способа, 11 р и м е р 5. Исследуют образцы физиологического раствора, содер кащие в ил 1О, 10, 10 и 10 микроорганизмов референс-штаммов.

Все образцы центрифугируют при

3000 об/мин в течение 15 мин. Затем аккуратно отсасывают недостаточную жидкость, оставляя на дне не более

0,5 мл; 0,2-0,3 мл осадочной жидкости вносят в 0,0035+0,0001 М раствор

ЭДТА в 0,15 M трис-солянокислом буфере (рН 8,7-8,9) и инкубирувт при

35 С в,течение 2-2,25 ч, После этого 0,2 мл каждой суспенэии вносят в селективную среду и инкубируют при

35 С. Спустя 18-20 ч наблюдают типичный поверхностный пленочный рост во всех опытных пробирках. В пробирке, 2 соответствующей. концентрации 10 микроорганизмов в 1 мл, пленка очень нежная. Однако при подращивании еще в течение 2,5-3 ч ее невозможно отличить от пленок в других пробирках.

Формул а изобретения

Способ выделения Pseudomonas maltophilia путем посева исследуемого материала на селективную питательную среду, содержащую питательную основу и селективный агент, с последующим учетом характера роста культуры, о т л и ч а в шийся тем, что, с целью повышения точности способа, исследуемый материал предварительно обрабатывают в 0 0035+0,0001 М растворе этилендиаминтетрауксусной кислоты в 0,15 M трис-солянокислом буфере рН 8,7-8,9 и посев осуществляют на питательную среду, содержащую, мг/л:

Цефазолин натрия 99-101

Солафур 59-61

Сизамицина сульфат

Азид натрия 195-205

Питательный бульон Остальное

При этом питетельный бульон содержит

100-15О мг7. аминного азота.