Способ определения иммуноглобулинов в биологических жидкостях "иммунокап

 

Изобретение относится к иммунохимии , предназначено для определения антипенов в разных биологических жидкостях. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа. Для этого готовят 10%-ный раствор антисыво ротки против иммуноглобулинов А, М, G. Агаровый столбик формируют 0,5%- ным раствором агара, содержащим 10% антисыворотки с дополнительным вве- . дением полиэтиленгликоля мол.м. 6000 или декстрана мол.м. 20000 до конечной концентрации 2-5%. Смешивают агар с антисывороткой, заливают в капилляры в водяной бане при 50-5б- С. Нарезанные капилляры длиной 2,5 см помещают в пластиковые пробирки, куда заливают золь агара с антисывороткой. После застывания капилляры целиком помещают в пробирку с исследуемой сывороткой, а пробирку в термостат при 37 С на 40-48 ч. По оконг чании инкубации считывают результат измеряя длину столбика преципитации с двух концов в капилляре. По стандартам с известной концентрацией белка строят калибровочную крийую, по которой находят концентрацию иммуноглобулинов в исследуемой биологической жидкости. сл tsD 00

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (1% (11) 124 4 А1 (51) 4 4 О1 N 33/559

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТ0РСН0МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР пО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4034329/28-14 (22) 09.12.85 ,(46) 23.05.87. Бюл. Ф 19 (71) Институт иммунологии (72) P.Â.Ïåòðîâ, К.А.Лебедев, M.3.Саидов и Е.П.Башун (53) 615.373(088.8) (56) Oudin J. Immunochemical апа1у° Ъ

sis of human serum and its factors .

II Qualitative and Quantitative analysis of the fraction soluble in

two-thrids saturated ammonium sulfàte. The g. of Immunology, 1958, v. 8, М 5, рр. 376-388. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ 121МУНОГЛОБУЛИНОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИД1<ОСТЯХ

ЩЩУНОКАП1 (57) Изобретение относится к иммунохимии, предназначено для определения антипенов в разных биологических жидкостях. Цель изобретения — ускорение и упрощение способа. Для этого готовят 10%-ный раствор антисыво ротки против иммуноглобулинов А, М, G. Агаровый столбик формируют 0,5%" ным раствором агара, содержащим 10% антисыворотки с дополнительным введением полиэтиленгликоля мол.м. 6000 или декстрана мол.м. 20000 до конечной концентрации 2-5%. Смешивают агар с антисывороткой, заливают в капилляры в водяной бане при 50-56ОС.

Нарезанные капилляры длиной 2,5 см помещают в пластиковые пробирки, куда заливают золь агара с антисыво роткой. 11осле застывания капилляры целиком помещают в пробирку с исследуемой сывороткой, а проби*рку в термостат при 37 С на 40-48 ч. По окон.чании инкубации считывают результат измеряя длину столбика преципитации с двух концов в капилляре. По стандартам с известной концентрацией белка строят калибровочную кривую, по которой находят концентрацию иммуноглобулинов в исследуемой биологической жидкости.

12484 2 нов в исследуемой биологической жидкости. К каждой партии капилляров прилагают соответствующую калибро" вочную кривую.

Определение концентрации иммуноглобулинов.

Приготовление капилляров против иммуноглобулинов классов М, А, 0 проводят аналогично вышеописанной процедуре. Сыворотку крови отсасывают в пластиковую пробирку разового пользования объемом от 0,5 до 1 мл.

Три капилляря против IgA, М и G пинцетом помещают в пробирку. Для марf5

20 кирования капилляров можно использовать любую краску по стеклу, например красную краску для IgG, зеленую для Zgy желтую для IgA. Пробирку с капиллярами помещают в термостат в горизонтальном положении и инкубируют смесь в течение 40 ч. По окончании инкубации с помощью лупы МБС-9 определяют длину столбика преципитации с каждой стороны капилляра, onределяют среднюю величину и по калибровочной кривой находят искомые цифры концентрации иммуноглобулинов. ,Пример 2. Определение концентрации секреторного иммуноглобулина А и сывороточных IgA, М, G c использованием 2% ПЭГ-6000 в слюне.

Капилляры с антисывороткой против секреторного иммуноглобулина А готовят так же, как в описании ппедлагаемого способа в примере 1.

У доноров в пробирку собирают

2-4 мл слюны. Центрифугируют в течение 20 мин при 4000 g u t = 20 С.

Затем надосадок помещают в пластико40, вые пробирки объемом 0,5-1 мл, туда же вкладываются подготовительные капилляры. Проводят инкубацию при

37 0 в течение 48 ч. Для исключения бактериального роста в слюну добавляют 1-2 капли 0,01% мертиолата.

Снятие результата и вычисление концентрации секреторного IgA проводят аналогично примеру 1.

Пример 3 ° В качестве вещества, усиливающего контрастность преципитата используют декстран Т-20 (мол.м. 20000),.приготовление капилляров и считывание результатов прова; дят аналогично предлагаемому способу с использованием ПЭГ-6000.

Метод в сравнении с известным способом прост в исполнении, требует гораздо меньше времени — до 48 ч, по известному способу — 7 дней.

1 13

Изобретение относится к иммунохимии и может быть использовано для определения антигенов в различных биологических жидкостях.

Целью изобретения является ускорение времени проведения способа и его упрощение.

Пример 1. Предварительно готовят 10%-ный раствор антисыворотки против иммуноглобулинов А, M u G.

Для этого антисыворотку определенного титра разводят в 1 мл дистиллированной воды. Затем к золю 0,5% агара добавляют полиэтиленгликоль мол.м.

6000 в конечной концентрации 5% для улучшения контрастирования преципитата. В смесь вносят раствор антисыворотки в конечной концентрации 10% от общего объема. Для получения иссле- дуемой сыворотки берут венозную кровь

4-7 мл в пробирку без антикоагулянта и, после свертывания крови, отделяют сыворотку. Стеклянные капилляры диаметром I мм перед использованием выдерживают в смеси Никифорова

30 мин, высушивают и промывают 1%ным водным раствором агара. Затем помещают в термостат и при 70 0 выдерживают 30-40 мин. Цель данной процедуры — создать тонкий слой агарового геля на внутренней поверхности капилляра с тем, чтобы увеличилось сцепление столбика агара с ним.

Смешивание arapa с антисывороткой и заливку в капилляры проводят в водяной бане при 50-56 С. Нарезанные капилляры длиной 2,5 см помещают в пластиковые пробирки, куда заливают зопь агара с антисывороткой. Можно использовать капилляры различного диаметра, так как ни диаметр, ни дли на не влияют на конечный результат.

После застывания капилляры осторожно извлекают пинцетом и помещают в пробирку с любым объемом исследуемой сыворотки, при условии, что весь капилляр (его концы) будут находиться,в ней.

Пробирку помещают в горизонтальном положении в термостат при 37 С на 40 ч.

По окончании инкубации считывание результата производят измерением дли ны столбика преципитации с двух концов в капилляре ° По имеющимся стандартам с известной концентрацией белка строят калибровочную кривую на полулогарифмической бумаге, по которой находят концентрацию иммуноглобулиСоставитель В.Литовченко

Техред Л. Сердюкова Корректор А. Тдско

Редактор Г.Волкова

Заказ 1967/43 Тираж 777 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4

3 13124

При использовании предлагаемого способа исключается необходимость в I специальной дорогостоящей аппаратуре.

Немаловажным элементом является значительное удешевление единичного определения, которое достигается за счет резкого снижения расхода специфических антисывороток. Точность метода до 1101, она достигается эа счет считывания результатов с обеих 10 концов капилляра и выведения среднего арифметического значения.

Хранение капилляров 2-3 мес при

4 С. Для предотвращения бактериаль-. ного загрязнения добавляют консер- 15 вант — метриолат 0,01, 2-3 капли на 100 мл.

Формула изобретения

Способ определения иммуноглобу- 20 линов в биологических жидкостях, 84 4 включающий формирование в цилиндрическом капилляре с прозрачными стенками и открытыми концами агарового столбика, содержащего специфическую сыворотку, погружение капилляра в исследуемую жидкость и определвние концентрации антигенов по величине преципитата, образуемого в агаровых столбиках, отличающийся тем, что, с целью ускорения проведения способа и его упрощения, агаровый столбик формируют 0,5Х-ным раствором агара, содержащим lOX антисыворотки с дополнительным введением полиэтиленгликоля с мол.м. 6000 или декстрана с мол.м. 20000 до конечной концентрации 2-5, при этом капилляр полностью погружают в исследуемую биологическую жидкость и инкубируют в течение 40-48 ч в горизонтальном положении.