Хлориды хинолинотиазолохиноксалиния, проявляющие антипротеолитическую активность

 

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности R хлориду 5-метил-(1) или хинолйно П ,2 :3,2)тиазоло(4,5-Ь)хиноксалиmшm3iiл , JHfiMEIKAl &ИБ/;ИОТЕ А иия (II), которые проявляют аи.типротеолитическую активность и могут быть использованы в медицине. Для выявления , новых свойств среди соединений указанного класЪа были получены новые I и II. Их синтез ведут из 2-меркаптохинолина или 2-меркаптолепидина и 2,3-дихлорхиноксалина в среде муравьиной кислоты при 100°С в течение 15 мин. Продукт отфильтровывают и промывают ацетоном. Выход, %, Т.пл. С: I - 85,300 (с разл.); II - 83,300 (с разл.). Ингибирующая активность- I и 11 в реакции трипсин-казеин выше, чем у амбена в 12 раз для 1 и в 24 раза для II, а соотв.етствуюп е значения для реакции химотрипсйн-казеин составляет 20 и 15 раз. I и II - малотоксичны, их LD 50 превьппает 500 мг/кг.живой массы. I табл. g (Л lOO N5 СП ;00 vi

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (46) 30. 07. 90. Бюл. Ф 28 (21) .3979464/31-04 (22) 20,11.85 (71) Институт органической..химии

АН УССР (72) З.М.Клебанов, С.Е.Могилевич, Ю.А.Нестеренко и Н.Н.Романов (53) 547.789.61 838.1 $66.3.03(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

И 1014830, кл..С 07 D 513/14, 1982, Машковский М.Д. Лекарственные средства, М.: Медицина, !978, т. 2, с. 37. (54) ХЛОРИДЫ ХИНОЛИНОТИАЗОЛОХИНОКСАЛИНИЯ, ПРОЯВЛЯИЩИЕ АНТИПРОТЕОЛИТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ (57) Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к хлориду 5-метил-(I) или хинолино (l,2 :3,2)тиазоло(4,5-b)хиноксалиI ) °

ÄÄSUÄÄ 1325871 А1 (51)5 С 07. D 513/14, А 61 К 31/425, 31/47, 31/495 ния (II), которые проявляют антипротеолитическую активность и могут быть использованы в,медицине. Для выявления, новых свойств среди соединений указанного класса были получены новые

Е и II. Их синтез ведут из 2-меркаптохинолина или 2-меркаптолепидина и

2,3-дихлорхиноксалина в среде мурао вьиной кислоты при 100 С в течение

15 мин. Продукт отфильтровывают и промывают ацетоном, Выход, 7., Т.пл. С: I — 85,300 (с разл.), II—

83,300 (с раэл ° ). Ингибирующая активность I u II в реакции трипсин-каэеин выше, чем у амбена в 12 раз для и в 24 раза для 11, а соответствующие значения для реакции химотрипсин-каэеин составляет 20 и 15 раз. I u малотоксичны, их LD 50 превьппает

500 мг/кг.живой массы. I табл. С:

ЭО

1 132587

Изобретение относится к ноным биологически активным соединениям, а именно хлоридам хинолинотиазолохиноксалиния, проявляющим антипротеолитическую активность, которые могут найти применение н медицине, Цель изобретения выявление новых свойств в ряду производных хинолинотиаэолохиноксалина. I0

Примеры, приведенные ниже, иллюстрируют данное изобретение, Пример 1. Хлорид хинолино !!,2 :3,2)тиаэоло(4,5-Ьjхиноксалиния (соединение I).

Смесь 0,32 r (2 ммоль) 2- меркаптокинолина и 0,40 r (2 ммоль) 2,3-дихлорхиноксалина нагренают в 5 мл мураньиной кислоты при 100 С 15 мин.

Раствор охлаждают, добавляют 5 мл ацетона и 10 мл эфира. Продукт отфильтровывают, промь(нают ацетоном.

Выход О, 61 r (85%), т.пл . 300 С-(с раэл.).

Найдено, %: С 63,0; Н 3,0; 25 Cl ll 0; N 13,0; S 9,9

Вычислено, 7.: С 63,2; Н 3,1;

Cl 1l 0; N 13,0; S 9,9.

Максимум поглощения в СН COOH:

400 (4,33), 414 (4,39) нм. Спектр

ПИР (CF> GOOD, ГИДС вЂ” внешний эталон):

7,9-8,6 м. (8Н), 8,83 д (IH, I=9 Гц), l0,80 д (! Н, I=9 Гц), м.д.

П р и .м е р 2. Хлорид 5-метилхинолино (!,2 :3,27тиазоло(4,5-Ь) хинок(35 салиния (соединение 2) .

i Смесь 0,35 r (2 ммоль) 2-меркаптолепидина и О, 40 r (2 ммоль) 2, 3-дихлорхиноксалина нагренают н 5 мл му- 40 равьиной кислоты при 100 С 15 мин.

Раствор охлаждают и к нему добавляют

5 мл ацетона, а затем 10 мл эфира, Продукт отфильтрсвывают, промывают ацетоном. Выход 0,6 г (837), т.пл. 45

300 С (с разл.).

Найдено, 7: С 64,0; Н З,Ь;

С1 10 5, N 12 7..S 9 5

Вычислено, %: С 64,!; Н, 3,6; 5р

CI l0,5; Н 12,5;.S 9,5.

Максимум поглощения в СН СООН, нм (I е): 395 (4 401, 410 (4 51).

Спектр ПМР (СР, СООН, ПИС вЂ” внешний эталон): 2,73 с, (ЗН), 7,7-8,6 м. (7Н), 10,80 д, (IH, I=9 Гц).

Биологические испытания соединений 1 и 2 на антппротеолитическую активность.

Лнтипротеазная активность изучается и опытах 1п vltx 0 методом измерения степени торможения реакпии гидролитического расщепления казеина, катализируемой трипсином илн химотрипсином. Для определения казеинолитической активности трипсина использовали метод К,Н.Веремеенко.

Для определения казеинолитической активности трипсина в пробирку на

20 мл добавляют 1,5 мл 0,05 М фосфатного буфера, рН 7,6 и 0,5 мл раствора трипсина н 0,05 М фосфатном буфере, рН 7,6 (содержание белка 14 мкг/мл).

Преинкубацию проводят при комнатной температуре и течение 15 мин. Затем добавляли 1,0 мл 2%-ного растнора казеина по Гаммерстену в 0,05 И фосфатном буфере, рН 7,6,. котЬрый готовят путем растворения 2 r каэеина и 80 мл

0,05 И фосфатного буфера, рН 7,6, при нагревании на водяной бане прн

70-80 С в течение 30 мин с последующим охлаждением, доведением рН до значе(сия 7,6 с помощью 0,1 н НаОН (контроль величины рН проводят на рН-метре со стеклянным электродом) и доне- . дением объема до 100 мл. Инкубацию проводят в течение )5 мин при 37 С на водяной бане со встряхивателем.

По окончании инкубации реакцию останавливают добавлением 2 мл 57.-ного трихлоруксусной кислоты. Через

l-1,5 ч после окончания реакции осадок белка удаляют центрифугнрованием при 1000 g н- течение .15 мин и измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости на спектрофотометре СФ-4А при длине- волны 280 нм против контроля, который обрабатывают сходным образом, но 0,5 мл -трипсина вносят после добавления трихлор-. уксусной кислоты. Полученное значени экстинкции Е„ используют для вычисления ингибнрующей активности испытуемых веществ.

Для определения ингибирующей активности соединений н пробирку вносят 0,10 (0,25, 0,50, 1,00, 1,50) мл раствора испытуемого вещества (1000 мкг/мл) в 0,05 M фосфатном буфере, рН 7,6 и тот же буфер до общего объема 1,5 мл, 0,5 мл раствора трипсина в 0,05 И фосфатном буфере, рН 7,6 (содержание белка 14 мкг/мл).

Затем пробы обрабатывают так же, как н в случае определения казеинолитической активности трипсина. Контроль !325871 такой же, Но трипсин вносят после добавления трихлоруксусной кислоты.

Степень ингибирования вычисляют по формуле

=(?- --) х

Е

E„

Степень ингибирования

«100,Х, ЕС р, Соединение трипсин-каэеин химотрипсин-каэеин

Соединение 1 0,59(0,58-0,60) 0,24(0,23-0,25) Соединение 2 0,30(0,28-0,32) 0,32(0,30-0,34) 7,3(6,6 — 8,0) Амбен

4,7(4,6-4,8) I токсичны для белых мышеи, величина

ЛД .о превышает 500 мг/кг, Формул а изобретения

45

Составитель С,Кедик

Редактор Т.Шагова Техред Л.Сердюкова Корректор Л.Патай

Тираж 335 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 2491

Производственно-полиграфическое предприятие, г ° Ужгород, ул. Проектная, 4 где Ес, и Е „. — оптические плотности растворов н присутствии и в отсутствии испытуемого вещества соответственно.

Для определения казеинолитической активности химотрипсина вместо трипсина вносят 0,5 мл химотрнпсина (14 мкг белка в мл 0,05 М фосфатного буфера, рН 7,6).

Полученные данные свидетельствуют, что ингибирующая активность соединений l и 2 в реакции трипсин-каэеин больше таковой амбена в двенадцать раэ для соединения 1 и в двадцать четьipe раза — для соединения 2. Соответствующие значения для реакции химотрипсин-казеин 20 и 15 раз.

Изучение токсичности испытуемых соединений и 2 для теплокровных животных проводят на мышах путем внутрижелудочного введения водных суснензий веществ. Установлено, что испытанные соединения 1 и 2 малоСравнение препаратов проводят с аналогом по действию, в качестве которого избран амбен. Определение анти5 протеазной активности амбена прово-. дят так же, как sq испытуемых веществ, но концентрация амбена во вносимом растворе 3 мг/мл.

В качестве величины, характеризующей ингибиторные свойства веществ и позволяющей сравнить эти свойства у различных веществ, принимается вели-. чина EC „, т.е. концентоация вещества, для которой степень ингибирования, 50%. Полученные результаты представлены в таблице (в скобках приведены значения ЕС,, полученные в двух определениях ), Хлориды хинолинотиаэолохиноксали-: ния общей формулы о e

С1

N S 8 где R — атом водорода или метил, проявляющие антипротеолитическую активность,