Штамм бактерий рsсudомоnаs рuтidа, используемый для получения тритерпеновых гликозидов
Изобрете)1ие относится к Пиотсхно/к/- 1Л1И и касается получения тритернен()В1)1х гликозидов с помощью оактер;и; Pseudomonas putida. Штамм , 1ен И тренаш а и депонирован во BcecoK):uioii коллекцни микроорганизмов ИБФЛА .ЛИ С.((Л под ,М ВКЛАВ-1583Д. Для iu),iy4eiuiH тритерпеповых гликозидов Н1тамм вырашнвают на нри 25°С и рН ,6 в течение 24 ч. биомассу отмывают, :(кстраги)ук)т смесью хлороформа с метанолом или этаио,1ом в теченне суток и анализируют с HOMOHUJK) тон- Koc, i()iiHoii хромато ра(|)ии. Исно,1Ь.И)вание П1тамма для получения тритерпеновых г. шкозидов значительно унростит произво.чство данною препарата, иск, 1К)чит псобхо.чимость использования трепанов и нозво. игг 1о,1учать нренарат в .юбом заданном ко,1ичесгве. (Л ОС N2 СО ОС СП
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИ4ЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
А1
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
{ 21 ) 37Ч!) 55{), 28-13
{22) 08.06.84
{46) 15.{)8.87. Ью.!. ¹ 30 (71) Владивостокский госу:(ырственный меди!!инский институт и Ти)<оок(анский научно-исследовательский институт рыоног< хозяйства и <)K(dí<>ãðàôèè
{72) 11. (.,Чотывкины, . 1. B. Шульгины и Г. (.. (ыч
{ 53) 576.85 1.1321088.8)
{ 56) ЛвторсK()(снидетельство (.(.< .:P ,л< 3 {)53265, h. l. (. 12 IU (),/ 00, 1()77.
Л1)торсон свидетель TB() (.(.(.Р
Х<> 681840, кл. (. 07 H 15, 24, 1<177.
Лвторско(свидетельство О.(.Р Л,; 8<) )8 )с) K. ({)7 11 15)20 1с)80
{54 ) 1ИТЛЛ1М ВЛ)лТГРИИ Р ЕЕ БОЧО-!
К Л 8 Р I:T11) Л, И (.11(). 1В:3 У 1:.Ч Ы И, Е.<1Я
11<.) 1УЧЕ 1111Я ТР11Т1 . Р111;11() В Ы л ГЛ11
К(>311;Е() В
„„SU„„1329785 (51} 3 1)I )л 35, 1, <, )1>;.
t(. 12 I I!128 (, > I
{ )/ ) 11зоор<>т(ни(()TII()<. ktò(. kt к оиот(>;II()1( гии и касается полу чения гритерн(нов>,!л гл и ко:3!i )он с It()M()lt(t>K> Iпт ни л! ы ()<3 кт(ри l
Ps(tI(I<>I33oTtds рп1!(1а. Штамм выдел< н и < трепанга и депонировын во Вс(с()K):It!<)i< колл Kill!I! микроорганизмон ИЬФ.Ч Л11 (.((.Р под,)л> 13KÌÂ --15831.,Еля п<)г!у !(ния триT (> P Н (t l () 13 I >I < ГЛ И КО 3 И, 3О Н I I I T B Ч М B I >I P <3 l I l l l H; I I< ) T на ЧЕ1Л при 25 (. и рН,6 н течение 24 ч, (>пол!;>ссу отмывают, акстрыгирун>т смеси к> .л, !ороформы с метанолом и ltt атыно,<ом н течение суток и анализирук>т с >н>м<ицьн> T()ltкос.юйной лроматогрыфии. 11сп(>львов,!ни( н!тамма для получения тритерпено!31!л Iликозидон значительно упр<>стит lip()II313() <ство (ынного препараты. исклн)чит í.оололиМОСтЬ И(ПОЛЬЗОВаНИЯ тРЕПЫНон И Il()d13()ЛИ! полу чыпгь препарат 13 г!и>()ол1 зы; IIIII<) l колич(стве.
1329785
1 2
Изобр«1«(tii«»тиос>ггся к 6HOT«xfюлогии, (3 ч и с т и (к 1 и h 1 и к р О 6 и О. 1 0 Г и е с к 0 и I I р О ч I >1 и 3. !«ииос(и, и k««;ti гся ИОГ!л ч«иия тритерпеповыл l,lklh() 3«;(»f3 с ис!юль:«и<аниел(чикроорI <3 I (H.3 Лl о H.
Ц(ль(0»и 306р«г«пия является ((зыскание и!тачл<; 6iihl«рии.,к t h0 и 6ыстро разчножак)!ц«г<)ся !I!ц«го григ pll«повые (.Л И КО.
Куль! у р;!.If>II() xt»p(k(7/(0(ич«ск(к llj)HO(I<3
KH. (l ря л(t>lt l((l («> Kk(p<3:3(>(«рол> О, < I /<. 1,;>
4 чкч, I«> (lilt/hilt>I(., спор и к;и!сл,l (lt 06p<1зл ют, I Р;>ч<> г()kit(i>T«T((,I(û«.
I 1i1 м k(t Oll«ll ГO(f(IOXI бл.1ьоп«pit (3((OX(«plit)(! !()11л 1 и(. ии(. 1 1 !
К И I I Га 13 I »)k»«>«. («;«>вателын>ч вы р 3 til ki
I3(l1IHH при 30 (. ((Ик су l<)h и,ш, ((. « I(pit комlli> гнои >«л(п(р:
I HII !Iи I !IIè /1 I л(роl рофы, (ип дl>IX
И и и (l -7 (106«(, 1 t (>t
2г) .3(3 („,(H 3((;! <О(! Г(1! I«. р;!тx р, Ilр(1 к()1()Р»ЛI I(ii<1. »0,(;i(I «Н СР;! ИИИ 1(11>l«) . ОРОП)пй
p(>«Г, 18 38 (:, !!ри г«ми«р(3 Гу р«4! С !к
p<1(1 <, I 3(ft. р (И Я р0«1;! ИЬ(OK<(H; 1(. I h» 0(()орл(,к l»1()«. к»,«>l! ии Р(I ил Р«РУ ютсЯ IIÐè OIIT(t
2)г 30 (, 74 и ()<1(1л (к си«ии (I<(Р(! <ж И/К i« I /К«,Ill! (i flX, 0(>. (!.(К 1 (I Р(И ll(111деги. (ро, li> «>и, Oh(и ш юй, h
A(I I;3l 0I3ktt l « к сkltt сt<011<тв;!
I I j 0>(t3ля«I »! ил(икр06иуK) (hòèHHOñòü в О! «О!!к пии r„!hit рии М|сг<>сосспв 1> во(1«:с1!«Ив i(. (;<р(3 10 t>(« 0,(<, (3(t (7< (01) f < I p(>13(pt 11;! H(l . (1<), ((Гl kt I «>,(и— 1>ал(Ill!«110 6;!hi< pи»ф(««,1, «. <по., 0 .ЛВ(.1)1 I) 1 ). » 1х ры l(»3 1) pill((!llf (п(п l (1l i!11 X1»,;((/h ll! 1p« I t p»(. пои(,к I,! è K(>3 и.1«! ///7! . >l< /> 11 1 И >k»11.1«ш(Я 1«кр(>6пой ч;ксы и;! !i,I«t;,»(»)гоч Мl!Л при 25 (. в ,(к и!к "l !>ы(»«п!ун> клл.,(1ру счы!>Ик>г 2:1. =Экстрагироваиие производят в течение суток, акстракт используK)T для последуюше!<7 . имического анализа методом тонкос.юйиой кроматографии (ТСХ1. В к((честве сор6епта для ТСХ применяют отечественный силикагель марки КСК. Гипс f0T013HT стапдартпыч путем. Водную суспеHзик> Hликагеля с ги!1«оч (в 1 л(л 0,23 0,26 г сорб<. и Т;3 и 0,28 0,2() г гипса) наносят тонкич с,«к ч (2 мл па 1 сч 1 иа пластину раз1З xt«POI((6 Х(3 с»1 ()пти >I 10 л(кг акстракта. 1 1 а»«с«ние I o производят си«пи((с!ь!30 из!Отовлеииой пипеткой. II P0I ()it,3Л ИРО(3<33((IOH >1(1 KPOHI II P(i ЦОМ OT XPOчатографа «Цвет». ,!ля одномерной лр()л!и!Ографии ллорофорл<-зта польного или xi(0ð()ôîðxi-метанолы«>го зкстракта прим«ияк)т две системы полярны.(растворителеи: нейтральную, предстii«ляю!цую собой сч«сt> xë»ð(>ôîpx(-мета-! юл во(а (65:;35:4(, и <)си»внук>, представЛЯК)IIIX К> СО(Н)й СМЕСЬ Л.ЮРОфОРл(ЧЕтаПОЛ 28 -",;-пыи ачмиак (65 35:4! 13 k ЗО стихои0.33!до!3 ЛВ(.."IOIIOлпительпычи стаtl (<117 <(лI И, и« x0,(H и 3 сTPчк I x (111(>l х Ос(Я)(и Но« г«й, с,!ужат лолест«рии, 1(i(IHHHI мозга быка И /К(Л ITK<3 К) PHf«)(0 H(1(l<3, K<» l«< ТВЕИИЫЙ СО ст;(и K»I»pt>lx изуч Ii,(0(. таточпо x»pol(10 Коч !«>п«нты ста!!.(арт(>в и зкстр(>ктов и!1;(л(л((3 ка !«« TH«(I(«) (к гистриру к> г по Rt с помо!Иьк> универсальны. И иди каторов (II<1 pt)I H0,(а )0 0-fIoI 0 p<3«THOр<3 с(риои кис.«)TI>I, ф<)сфорио-чоли6деновый р«актив) и сll«(((((3 it>III>(x р(аг«нтов (а«троп, < -пафтол 3. 40 (1«(7«;t анализол< «иликагель акт(!вирлюT !!рогр«вом при 120 (., Ироявляк>г специфи-! «ским реактиноч 50",>р-иой серной кисло той при 180 (, 13 течение 10 чип. (.тандарть стил нн <илов и экстр;(кl ш!амча Окраши ван>тся в <1)3!Олетовый цн T. л«>лестерип в крал пый, другие липиды в коричнево/K(лгый цвет. При »краек«фосфорно-чолиоденовым реактивоч ф<)сф<>рсодержашие IktlIHдt>l проявляк>гся 13 виде го (764(x пятен I l (i («P 0 >1 ф 011« . <1 0(;1 1t I I (11 и Я () (. .3 (I) О с ф 0 Р <3 . 50 ча, ((t Окр((п!ивак)!сH. Испытапи(аитроноч и «и;3<р!Олол(дн1 ж«Г(гун> <)Kpil(. ку стил(7-! f0.3kf, (0(3 и зкстр;>ктов Ill ãàì÷à. Ill1(3л!л> Рв«ц(10п!Опав рп1!((а Лз 84 как ил»»(kth р)<т«рп«ио!3!!л fëèê<)çèдов 061а55 (,ti г ря (<)v преимупкств известиыч источ(ик<>м даль««носT»чпыч тр«пап(Им Stl(1< >(>и 1 IP<711«. Ил ь. !(и (а. 1329785 формула изобретения Составитель I . Смирнова Редактор И. Рыбченко Текред И Верее Кор1» ктор М. Шаро ши Заказ 3511/8 Тираж 595 1Iодписиое В1лИИПИ Государственного комитета C:Ñ(:P по делам изобретений и открытий 1 13035, Москва, Ж 35, Раушская наб, д. 4 5 Производственно-полиграфическое предприятие, г Ужгород. ул. Проектная. 4 Штамм как источник лекарственного вещества легко и быстро (в течение 24 ч) размножается на искусственных питательных средах и может быть накоплен в любом заданном количестве, нужном для промышленных целей. Трепанг же вырастает до взрослой особи (промыслового возраста) 3 года. Тритерпеновые гликозиды содержатся в самом штамме, а не выделяются как функциональное вещество при жизни клеток. Это устраняет зависимость его выхода от физических факторов. Нетребовательность штамма к условиям существования, способность его расти на простых питательных средах снижает себестоимость лекарственных веществ во много сотен раз. Выход стихопозидов из трепангов черезвычайно мал и для получения 1 кг этого гликозида требуется 10 т сырца тре.па нгов. Штамм бактерий Pseudomonas putida, ВКМ — 1583Д (Всесоюзная коллекция м и кроорганизмов ИБФМ АН CCCP ), используемый для получения тритерпеновыi гл и коэи до в.
