Способ определения характеристик антисыворотки

 

Изобретение относится к иммунологии , предназначено для определения качественных характеристик антисывороток (константы средства и количества мест связывания), Цель изобретения - ускорение способа путем исключения стадии взаимодействия антисыворотки с 50% связыванием и разведений меченого антитела и усовершенствования расчета характеристик антисывороток . Определяют качественные характеристики антисыворотки к норадреналину - медиатору симпатической нервной системы, используя аналог норадреналина - спин-меченый норадреналин (нитроксильным радикалом с парамагнитными свойствами). Для построения кривой разведения двукратно титруют р-р антисыворотки фосфатным буфером рН 7,4 так, чтобы в каждой пробе было по 45 мл р-ра. Затем в каждую пробирку с антисывороткой доливают по 0,05 МП р-ра спин-меченого норадреналина в концентрации 10 М, Инкубируют смесь 12 ч при 18-20°С, затем измеряют концентрацию связанного спинмеченого норадреналина (В) и свободного спин-меченого норадреналина (F) на радиоспектрометре по амплитуде высокопольной компоненты спектра электронного парамагнитного резонанса и калибровочной кривой. Строят графическую зависимость в координатах B 1/f/F против В 1/f, где В - концентрация связанного антигена; F - концентрация свободного антигена; f - фактор п-кратного разведения

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК с5в 4 G 01 N 33/532

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCXOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3867628/28-14 (22) 07,03.85 (46) 15.09.87. Бюл. Ф 34 (71) Таджикский государственный университет им. В.И.Ленина (72) С.H.Áûcòðÿê, С,Б.Дейч, С,П.Смотров, З.М.Киселева и В.Н.Титов (53) 615.373 (088.8) (56) Scatchanl 1. Апп. Nyacad. Soi

1949, ч. 51, р. 660-672. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХАРАКТЕРИСТИК

AHTHCbIB0P0TKH (57) Изобретение относится к иммунологии, предназначено для определения качественных характеристик антисывороток (константы средства и количества мест связывания), Цель изобретения — ускорение способа путем исключения стадии взаимодействия антисыворотки с 507 связыванием и разведений меченого антитела и усовершенствования расчета характеристик антисывороток. Определяют качественные характеристики антисыворотки к норадреналину — медиатору симпатической нервной системы, используя аналог норадреналина — спин-меченый норадреналин (нит„„Я0„„1337776 А1 роксильным радикалом с парамагнитными свойствами). Для построения кривой разведения двукратно титруют р-р антисыворотки фосфатным буфером рН

7,4 так, чтобы в каждой пробе было по 45 мл р-ра. Затем в каждую пробирку с антисывороткой доливают по

0,05 мл р-ра спин-меченого норадреналина в концентрации 10 М, Инкубируо ют смесь 12 ч. при 18-20 С, затем измеряют концентрацию связанного спинмеченого норадреналина (В) и свободного спин-меченого норадреналина (F) на радиоспектрометре по амплитуде высокопольной компоненты спектра электронного парамагнитного резонанса и калибровочной кривой. Строят графическую зависимость в координатах

В 1/f/F против В ° 1/f, где  — концентрация связанного антигена; F концентрация свободного антигена;

- фактор и-кратного разведения (1/и, 1п,1n ...). Затем определяют константу сродства антисывороток по тангенсу угла наклона этой зависимости к оси абсцисс, а кол-во мест, связывания — по значению точек пересечения этой зависимости оси абсцисс.

776 компоненты спектра электронного парамагнитного резонанса и калибровочной кривой. Далее строя графическую зависимость в координатах В-1/f/F против В 1/f1 где  — концентрация связанного антигена; F - концентрация свободного антигена f — фактор иФ а кратного разведения, равный 1/и, 1/и

1О 1/и и т,д, Далее определяют константу сродства антисывороток по тангенсу угла наклона этой зависимости к оси абсПример. Для определения качественных характеристик антисыворотки к норадреналину — медиатору симпатической нервной системы — используют аналог норадреналина — спин-меченый норадреналин, меченый нитроксильным радикалом, обладающим парамагнитными свойствами, Фиксированное количество спин-меченого норадреналина готовят путем растворения его навески 9,25 млг в 25 мл воды. Для построения кривой разведения осуществляют двухкратное титрование раствора антисыворотки фосфатным буфером рН 7,4 таким образом, чтобы в каждой пробе было по 0,45 мп раствора. Затем в каждую пробирку с антисывороткой доливают по 0,05 мл раствора спин-меченого норадреналнна, окончательная концентрация которого в каждой пробирке составляет 10 M. Инкубацию реакционной смеси проводят в течение

12 ч при комнатной температуре, после чего в каждой пробирке производят измерение концентрации связанного спин-меченого норадреналина (В) и концентрации свободного спин-меченого норадреналина (Г) на радиос -,ектрометре Р3-1306 по амплитуде высокопольной цисс, а количество мест связывания

15 по значению точек пересечения этой зависимости оси абсцисс.

>О Способ определения характеристик антисыворотки, включающий взаимодействие фиксированного количества меченого антигена с пробами специфической антисыворотки и -кратного разведения

2Ь и определение в каждом измерении концентрации связанного антигена, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, а каждом измерении дополнительно измеряют конЗО центрацию свободного антигена, затем строят графическую зависимость в координатах В ° 1/f/F против В 1/f, где  — концентрация связанного анти" гена; F - концентрация свободного

З антигена, f - фактор и -кратного разведения антисыворотки, равный

1/и, 1/и, 1/n ..., и определяют константу сродства по тангенсу угла. наклона этой зависимости к оси абс4О цис, а количество мест связывания по значению точки пересечения этой зависимости оси абсцисс.

Составитель M.Âàñèëüåâ

ТехРед И.Попович

Корректор В,Бутяга

Редактор Е.Копча,Заказ 4123/41

Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, 11осква, 11(-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная,4

1 1337

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения качественных характеристик антисывороток: константы сродства и количества мест связывания.

Целью изобретения является ускорение способа за счет исключения стадии взаимодействия антисыворотки с 507. связыванием и разведений меченого антитела и усовершенствования расчета характеристик антисывороток.

Формула изобретения