Способ определения зоокумарина

 

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к определению зоокумарина (З-(а-атетонилбензил)- 4-оксикумарин) в субстанции, объектах биологического происх ождения и воздуха рабочей зоны. С целью повышения чувствительности и избирательности анализируемую пробу обрабатывают последовательно растворами йо да монохлорида , гидроксида калия в этиловом спирте и диметилформамидом с последующим измерением интенсивности флуоресценции полученного раствора. Чувствительность способа составляет 0,001 мкг/мл (известного способа - ни выше 1 мг/кл). 6 табл. с S (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (50 4 С 01 N 21/64

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОС ЯАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4117831/28-04 (22) 15.09.86 (46) 30.03. 88. Бюл. У 12 (7Т) Курский государственньп» медицинский институт (72) О.А.Григорьев (53) 543.426 (088.8) (56) Межреспубликанские технические условия на лекарственные средства.

Сб. И 2. М.: Медицина, 1963, с.433.

Крамаренко В.Ф. Туркевич Б.М.

Анализ ядохимикатов. М.: Химия, 1978, с.204-207.

„„SU„„1385039 А 1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЗООКУМАРИНА (57) Изобретение относится к аналитической химии, в частности к определению зоокумарина (3-(а-атетонилбензил)4-оксикумарин) в субстанции, объектах биологического происхождения и воздуха рабочей зоны. С целью повьппения чувствительности и избирательности анализируемую пробу обрабатывают последовательно растворами йода монохлорида, гидроксида калия в этиловом спирте и диметилформамидом с последующим измерением интенсивности флуоресценции полученного раствора. Чувствительность способа составляет

0,001 мкг/мл (известного способа— не вьппе 1 мг/кл) . 6 табл, 1385039

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения зоокумарина (3-(a-атетонилбензил) -4-оксикумарина) в субстан5 ции, объектах биологического проис-. хождения и воздуха рабочей зоны.

Целью изобретения является повышение чувствительности и избирательности,способа. 10

Способ осуществляют следующим образом.

Исследуемую пробу растворяют в

96 .-ном этиловом спирте и добавляют к полученному раствору 10 -ныл эта- 15 нольный раствор йода монохлорида, 20%-ный этанольный.раствор гидроксида калия, диметилформамид. Интенсивность флуоресценции полученного раствора измеряют на флуориметре по от- 20 ношению к стандартному с известным сопержанием эоокумарина. Расчет содержания зоокумарина в анализируемой пробе проводят по калибровочному графику. 25

Пример 1. Качественное определение зоокумарина в субстанции и биологических объектах.

К 1-2 мг субстанции или 0,1-0,2 мл экстракта и биологического материала 30 прибавляют последовательно 1 мл 96 ного этилового спирта, О, 1 мл 10 ного этанольного раствора йода монохлорида, 0,2 мл 20 -ного этанольного раствора гидроксида калия, перемешивают и прибавляют 9 мл диметилформамида, перемешивают. В ультрафиолетовом свете со светофильтром УФС-3 наблюдают яркую голубую флуоресценцию, что свидетельствует о присутствии в 40 исследуемой пробе зоокумарина.

Пример 2. Количественное определение зоокумарина в субстанции.

0,01 г (точная навеска) порошка зоокумарина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и прибавляют 7080 мл 96%-ного этилового спирта, перемешивают и доводят спиртом до метки. 0,5 мл полученного раствора мерной пипеткой перенбсят в пробирку и прибавляют О, 1 мл

10 -ного этанольного раствора йода монохлорида, 0,2 мл 20 .-ного этанольного раствора гидроксида ка- . лия, 9,2 мл диметилформамида, переме- 55 шивают. Измеряют интенсивность флуоресценции полученного. раствора по отношению к стандартному, содержащему

5 мкг/мл зоокумарина. Измерение про-. водят на флуориметре модели "Виан" или ЭФ-3 1fA. Содержание зоокумарина рассчитывают по калибровочному графику.

Пример 3. Количественное определение зоокумарина в тканях отравленных животных и биологических жидкостях.

В фарфоровой ступке измельчают

10,0 г биоматериала с 50 мл 96 -ного этилового спирта. Полученную смесь переносят в склянку с притертой пробкой и через 30 мин фильтруют в делительную воронку.

При исследовании крови образец 510 мл центрифугируют, прибавляют 50 мл

96 .-ного этилового спирта, подкисленного соляной кислотой, и помещают в делительную воронку на,100 мл. При исследовании мочи образец объемом 510 помещают в делительную воронку на 100 мц и прибавляют 50 мл 96 -ного подкисленного этилового спирта.

Далее все операции проводят аналогично, как при определении в тканях.

К содержимому делительной воронки прибавляют 25 мл диэтилового эфира и встряхивают 1-2 мин, эфирную вытяжку сливают. Экстракцию повторяют дважды порциями эфира по 25 мл. Полученные эфирные вытяжки объединяют в выпарительной чашке и упаривают на водяной бане до сухого остатка. К полученному остатку после выпаривания прибавляют

1 мл 96 -ного этилового спирта, и полученный раствор переносят в пробирку, куда добавляют последовательно

О, 1 мл 10%-ного этанольного раствора йода монохлорида, 0,2 мл 20 -ного этанольного раствора гидроксида калия и 8,7 мл диметилформамида. Измеряют интенсивность флуоресценции полученного раствора по отношению к стандартному с известным содержанием зоокумарина. Расчет концентрации зоокумарина в анализируемой пробе проводят по калибровочному графику.

Пример 4. Количественное определение зоокумарина в воздухе рабочей зоны.

Исследуемьп воздух с объемным расходом 20 л/мин аспирируют через фильтр

АФА в течение 15 мин, Для определения

1/2 ПДК следует отобрать 300 л воздуха. Вещество с фильтра смывают 1 мл

96 .-ного этилового спирта в пробирку и к полученному раствору прибавляют

0,1 мл 10 -ного этанольного раствора

1385039

Таблица 2

Количество раст-вора йода монохлорида, мл тносительная нтенсивность луоресценции, 7.

0,05

0,10

0,15

0,20

0,25

0,30

Наличие флуоресценции

Вещество

В табл. 3 представлены зависимос30 ти и интенсивности флуоресценции зоокумарина от количества 207-ного этанольного раствора гидроксида калия (С = 5 мкг/мл) и диметилформаиида соответс твенно.

Яркая голубая

Зоокумарин

Кумарин

Синкумар

Нитрофарин

Нет

Т а блица 3

Нет

Нет

Относительная

Количество раствора гидроксида

4р калия, мл

Нет интенсивность флуоресценции, 7.

Неодикумарин

Дикумарин

Нет

Нет

Фепромарон

Виснадин

0 05

Бледно-фиолето" 45 вая, быстро затухающая

0,10

0;15

Нет

Фенол

0,20

Нет

Кверцетин

Рутин

0,26

Нет

0,30

Нет

Карбохромен

Слабая зеленая

Псорален йода монохлорида, 0,2 мл 207-ного раствора гидроксида калия в этаноле и 8,7 мл диметилформамида, перемешивают. Измеряют. интенсивность флуорес- 5 ценции полученного раствора по отношению к стандартному, с известным содержанием зоокумарина, Расчет концентрации зоокумарина в воздухе рабочей зоны проводят (в мг/мз) по ка- 1р либровочному графику или общепринятой формуле.

Способ имеет высокую избирательность: подобной реакции не дают кумарин, синкумар, нетрофарин, неодикумарин, фепромарон, фенолы, хромоны и ряд других близких по структуре соединений.

Данные о флуоресценции зоокумарина и близких по структуре соединений при определении по предлагаемому способу представлены в табл. 1 °

Таблица 1

В табл. 2 представлена зависимость интенсивности флуоресценции зоокумарина от количества 107-ного этанольного раствора йода монохлорида (С

5 мкг/мл) °

75-80

95-100

90-95

80-85

80-85

30-35

40-50

70-80

90-100

90-100

90-100

Количества и концентрации реактивов выбраны исходя из максимального значения интенсивности флуоресПенцни, 1385039

Прямолинейная зависимость между

Продолжение табл.5 интенсивностью рлуоресценции и концентрацией зоокумарина (калибровочньп график) сохраняется в области .от

0,001 до 10 мкг/мл (табл. 5).

Таблица 4

0,008

0,009

0,010

81

Относительная интенсивность флуоресценции, Ж

Количество диметилформамида, мл

Ъ 0,01

0,02

0,03

Нет

0,04

Нет

0,05

Нет

0,06

Нет

0,07

0,08

0,09

0,10

0,1

0,2

19

0,3

Т а б л и ц а -5

0,4

0,5

45 0,6

63

0,7

0,8

10

0,9

19

1,0

27

45

54

63

1 0,001

0,002

0,003

0,004

0,005

0,006

0,007

10-20

10-25

30-35

80-92

95-100

95-100

1385039

Продолжение табл.6

Продолжение табл.5

0,0110

0,0112

0,0118

0,0121

0,01094

0,01119

0 01178

0,01210

81

Т а блица 6

0,01247

0,01180

0,0125

0 0118

0,0115

0,01148

0,0120

0,01195

0,01130

0,01Щ0

0,0113

0,0110

Составитель Л.Русанова.Редактор М.Бандура Техред М.Ходанич Корректор Л,Пилипенко

Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государствсппог комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Заказ 1407/41

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,4

В табл. 6 приведены результаты определения зоокумарина в субстанции.

Чувствительнрсть способа составляет 0,001 мкг/мл, ранее известного— не выше 1 мг/кл.

Предлагаемый способ определения зоокумарина может быть использован для качественного и количественного определения его в субстанциях родентицидных приманках на основе зоокумарина, тканях отравленных животных, 20 биологических жидкостях и воздухе рабочей зоны предприятий-изготовителей.

Способ найдет широкое применение в контрольно-аналитических лабораториях, санитарно-гигиенических и ток-.

25 сикологических лабораториях при определении в объектах биологического происхождения.

Формула изобретения

Способ определения зоокумарина, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и избирательности, анализируемую пробу обрабатывают последовательно растворами йода монохлорида, гидроксида калия в этиловом спирте и диметилформамидом с последующим измерением интенсивности флуоресценции полученно, раствора.