Способ получения средства, ингибирующего агрегацию тромбоцитов

 

Изобретение относится к фармакологии . Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и упрощение способа. Инкубируют смесь арахидоновой кислоты, о-антигена сальмонелле зной культуры и супернатант гомогената пузырьковых желез барана. В реакционную смесь добавляют этиловый спирт,, После экстракции сухой остаток помещают на колонку и элюируют. Затем хрОматографируют и полученный сухой остаток растворяют в спирте. § (Л с

СООЗ СО8ЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

09) (И) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

I (46) 07. 05. 90. Бюл. ¹ 17 (21) 4015396/28-14 (22) 30,01.86 (71) 1-й Московский медицинский институт им.И,М.Сеченова (72) Л.В.Казанская, З.В.Чумакова, Т,B.Ìíêñèìîâà, М.Х.Турьянов,. К.Д.Ло. мазова и С.Г.Пак (53) 612,015 (088.8) (56) Лакин К.М,; Макаров В,А,, Овнаптанова М.С., йкгихин И.С. Влияние отечественного препарата простагландина Е на агрегацию тромбоцитов и эритроцитов. — Фармакология и токсикология, 1976, У 4, с.436. (51)5 А 61 К 31/5579 С 07 С 105/00 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ИНГИБИРУЮЩЕГО АГРЕГАЦИЮ ТРОМБОЦИТОВ (57) Изобретение относится к фармакологии. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта и упрощение способа. Инкубируют смесь арахидоновой кислоты, о-антигена сальмонеллезной культуры и супернатант гомогената пузырьковых желез барана.

В реакционную смесь добавляют этиловый спирт,(, После экстракции сухой остаток помещают на колонку и элюируют, Затем хрбматографируют и полученный сухой остаток растворяют в спирте.

1 13926

Изобретение относится к фармации, в частности к способу получения лекарственной субстанции простагландинов (ПГ), которая может быть использована ° для лечения и профилактики тромбозон и тромбоэмболических осложнений, а также в аппаратах искуственного кровообращения.

Целью изобретения является иовы- lð шение выхода целевого продукта и . > упрощение способа.

Это достигается получением суб-. станции простагландинов, иигибирующей агрегацию тромбоцитов, из полиеновой кислоты путем инкубирования с ферментом и биостимулятором в буфере, добавления спирта, фильтрации, экстракции и хроматографии.

Пример 1. 50 мг аракицоновой 20 кислоты в виде натриевой соли эмульгируют и фосфатном буфере рН 8, добавляют 25 мг о-антигена S.typhlmurlum и, суиериатаит из 10 г гдмогенезата пузырьковых желез барана (соот- 25 ношение арахидоповая кислота — гомогенезат — о-аитиген 1:500:0,5). Смесь о аэробно инкубируют 20 мин при 37 С.

Для выделения целевого продукта в реакционную массу добавляют этиловый ЗР спирт, аэкстрагируют этилацетатом, сухой остаток помещают на колонку с кремниевой кислотой и элюируют 1) беизолом 2) серным эфиром, 3) этилацетатом, 4) метанолом.

Фракцию 11 3 иоворотно хроматографируют на колонке с кремниевой кислотой,, используя системы . Л) хлороформ— гексан — уксусная кислота 5:45:0,4;

В) хлороформ — ук-сусная кислота 4р

50:0 4; С) метанол — хлороформ — уксусная кислота 5:45:0,4, Фракцию С упаривают досуха и сухой остаток, растворенный в спирте, используют в дальнейшем для фармакологических испытаний. Полученную субстанцию растворяют в изотоническом растворе и проводят испытания на биологических объектах.

Исследование полученной субстанции простагландинов на функциональную активность кровяных пластинок.

Опыты проводят в условиях ин витро с использованием обогащенной тромбоци" . тами плазмы (ОТП), полученной из стабилизированной цитратом натрия

3,8Й крови здоровых доноров. Агрегацию тромбоцитов регистрируют фотометрическим методом Бориа (53 с по/

73 2 мощью ФЭК-56, соединенного с самописцем КСП-4. ПГ-субстанцию применяют в концентрации 50 мкг/мл, АДФ-!"

М 0 7, эндотоксин 10 мкг/мл, После предварительной инкубации тромбоцитов с ПГ-субстанцией в течение 3-5 мин АДФ-индуцированная агрегация достоверно снижается; если степень АДФ-индуцированной агрегации интактных тромбоцитов принять за

100Х то для тромбоцитов, преинкубированных с ПГ-субстанцией, она уменьшается почти вдвое. Эндотоксининдуцированная агрегация после инкубирования с ПГ-субстанцией полностью подавляется.

Другой биологический тест - влияние целевого продукта на сократительную способность гладкой мускулатуры матки крысы показал увеличение тонуса матки, усиление амплитуды и частоты сокращений. Тестирование осуществляли на изолированном роге матки крысы, сокращение регистрировали на кимографе.

Преимуществами предложенного спо- соба является:

Повышение выхода субстанции простагландинов, ингибирующей агрегацию тромбоцитов, эа счет использования биостимулятора о-антигена

5.typhimurium; в прототипе выход целевого продукта 7-15Х в предлагаемом способе 45-50X, удешевление процесса за счет снижения расхода сырья биокаталиэатора, в прототипе на 1-1,5 r полиеновой кислоты требуется 3-6 л белкового гомогената, в предлагаемом способе 500-750 г; упрощение способа в прототипе время инкубирования составляет 2-4 ч,,в предлагаемом способе 20 мин;.в прототипе в качестве прекурсора использована дефицитная эйкоэа-8,11,14трееновая кислота, в предлагаемом способе - доступная арахидоновая кислота.

Формула изобретения

Способ получения средства, ингибирующего агрегацию тромбоцитов путем азробного инкубирования полиненасыщениой жирной кислоты с ферментом с последующей очисткой целевого продукта методом хроматографии, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выхода цепевого про1392

Составитель Н.Литвиненко

Редактор Л,Народная, Техред,N,,11ндык

Корректор М.Шарощи

Подписное

Заказ 1542

Тирах 545

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, %"35, Раушская наб. ° д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. aropop, ул. Проектная, 4

Э дукта и упрощения способа эа счет сокращения числа стадий, в качестве полиненвсыщепной кислоты берут ара-, хндоновую кислоту, фермента — супер-, 5 натант гомогената пузырьковых велез

673

4 барана, в инкубационную смесь допол-.. нительно вносят о-антиген 5.typhlmurtum при соотноаении арахидоновая кислота: сунернатант: 0-антиген

1:500:0,5.