Способ получения иммобилизованных клеток,обладающих глюкозоизомеразной активностью

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (511 1 С 12 N 11/00, 11/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

6ggg „„„„ (21) 4076304/31-13 (22) 04.04.86 (46) 07.05.88. Бюл.№ 17 (71) Институт элементоорганических соединений им. А.Н.Несмеянова (72) ИА.Ямсков, Л.Л.Хинкис, В.А.Даванков, M.Ñ.Ìîñè÷åâ и И.M.Грачева (53) 577.15(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 1060675, кл. С 12 N 11/04, 1982.

Авторское свидетельство СССР № 1070163, кл. С 12 N 11/04, 1982. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННЫХ КЛЕТОК, ОБЛАДАЮЩИХ ГЛЮКОЗОИЗОМЕРАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам иммобилизации микробI

„„SU„„1393847 A 1 ных клеток, обладающих глюкозоизомеразной активностью. Целью изобретения является повышение выхода ферментативной активности при иммобилизации и увеличение стабильности иммобклизованных клеток. Способ состоит в том, что проводят включение клеток

Stregtomyces а1Ъодг яео1ия 28-3 в нерастворимый сорбент путем смешивания клеток с < водным .раствором соли кобальта с последующим осаждением водным аммиаком, отделением и высушиванием осадка. Соотношение сухих клеток и ацетата кобальта устанавливают равным 1:(0,1-10,0), а осаждение осадка проводят при рН 6,5-10,0.

Способ позволяет увеличить стабиль ность в .- 20 раз и повысить выход ферментативной активности на 19-22Х.

1 табл.

1393847

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам иммобилизации микробных клеток, облдающих ферментативной

5 активностью, и может быть использовано в пищевой промышленности при производстве глюксзо-фруктозных сиропов из крахмалоЬздержащего сырья.

Цель изобретения — повышение вы- 10 хода ферментативной активности при иммобилизации и увеличение стабильно . сти целевого продукта.

Способ заключается в том, что клетки, обладающие глюкоэо-изомераз- 15 ной активностью„включают в нерастворимый сорбент, для чего их сусепндирувт в растворе соли кобальта при массовом соотношении сухие клетки . соль кобальта 1 (0,1-10,0) и проводят 20 осаждение доведением рН до 6,5-10,0.

Полученный осадок отфильтровывают, промывают водой и фосфатным буфером рН 7,0, высушивают и измельчают.

Пример 1. 5 г влажных кле- 25 ток (влажность 90X) Streytomyces а1ЪоягЫео1из 28-3., полученных после центрифугирования культуральной жидкости.и обладающих активностью

46,2 ед/г, суспендирувт в 5 мл 1Е-но 30 го раствора ацетата кобальта (соотношение сухих клеток к ацетату кобальта 1:0,1), цобавлявт по каплям концентрированный раствор аммиака до рН 6,5. Осадок отфильтровывают, промывают водой, фосфатным буфером и измельчают.

Активность влажного иммобилизованного препарата 93,2 ед/г, выход активности 86 ., стабильность 30 сут. 40

За единицу активности глюкозоизомеразы принимают количество фермента, катализирующее изомеризацию одного . микромоля глюкозы во фруктозу при рН 7,0 и температуре 60 С за 1 мин.

В качестве субстрата используют 2 M раствор глюкозы с добавлением 10 М ионов M . Стабильность иммобилизованного препарата определяют как время полуинактивации.глвкозоизомеразы при 60 С и рН 7,0, П р и м е.р 2. Иммобилизацию кле» ток проводят аналогично примеру 1.

Соотношение клеток и ацетата кобальта 1:10, рН 10,,0. Активность пре55 парата 71,0 ед/г, выход активности

81 .. стабильность 41 сут.

Пример 3„ Иммобилизацив клеток проводят аналогично примеру 1.

Соотношение клеток и ацетата кобальта

1:0,5,ðÍ 8,0,Активность препарата

133 ед/ г, выход активности 96%, стабильность 42 сут»

Пример 4. Иммобилизацию кле ток проводят аналогично примеру I.

Соотношение клеток и ацетата кобальта

1:5, рН 9,0. Активность йрепарата

65,1 ед/г, выход активности 99, стабильность 45 сут.

Л р и м е р 5. Иммобилизацию клеток проводят аналогично примеру 1.

Соотношение клеток и .ацетата кобальта

1:0,04, рН 6,4. Активность препарата

52,0 ед/г, выход активности 22, стабильность 12 сут.

Пример 6. Иммобилизацию клеток проводят, аналогично примеру 1.

Соотношение клеток и ацетата кобальта 1:11, рН 10,1. Активйость препарата 15,1 ед/г, выход активности

40 . стабильность 6 сут.

Пример 7. Для иммобилизации используют клетки активностью

38,6 ед/г. Иммобилизацив проводят аналогично примеру 1. Соотношение сухих клеток и ацетата кобальта 1:1, рН 8,0. Активность препарата

86, 2 "ед/г, выход активности 92%, стабильность 36 сут.

JI р и м е р 8. Иммобилизацию про водят аналогично примеру 1, но используют 1%-ный раствор хлорида кобальта.

Соотношение клеток Str. a1bogriseolus и СоСС 1: 1 рН 8,0.Активность препарата

77,6 ед/г, выход активности 88%, стабильность 28 сут.

Использование предлагаемого спосо ба позволяет получить иммобилизованный препарат клеток с высоким выходом глюкозоизомеразной активности и достаточно высокой стабильностью.

Результаты иммобилизации клеток приведены в таблице.

Предлагаемый способ по сравнению с известным способом позволяет повы сить активность иммобилизованного . препарата в 1,5 — 3,2 раза, выход активности - на 19 - 22X стабильность — более, чем в 20 раз.

Формула изобретения

Способ получения иммобилизованных клеток, обладающих глюкозоизомеразной активностью, путем их смешивания с гелеобразующими соединениями и последующего включения клеток в некобальта при массовом соотношении сухие клетки .соль кобальта 1:0,1-10,0 доводят рН среды до 6,5-10,0 и проводят отделение и высушивание осадка включенных в нерастворимый сорбент клеток.

Актив ност влажного геля ед/ (Вес влаж ного геля, ir

Выход активПрепарат ности, Предлагаемый

8,0 2 1

9,0 3 5

133,0

l 0,5

96,0 42

99у0 45

65,1

1:5

Иэвестиый

4,2

41,5

77,0 2

Составитель В,Муронец

Редактор Н.Рогулич Техред М. Ходанич Корректор С.Черни

Закаэ 1941/27 Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам иэобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Проиэводственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 з 139384 растворимый сорбент, о т л и ч а ю -, шийся тем, что, с целью повышения выхода ферментативной активности

/ при иммобилиэации .и увеличения сто

5 бильности целевого продукта, клетки смешивают с водным раствором соли

Соотношение рН клеток и ацетата кобальт.а

Стабильность при 60 С, сут