Способ определения фагочувствительности микроорганизмов

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при постановке реакции фаголизиса,Цель изобретения - повышение чувствительности микроорганиз мов к бактериофагам. Сущность способа сводится к тому, что исследуемые на фагочувствительность микроорганизмы высевают на питательную среду с введением вещества, снижающего антилизоцимную активность микроорганизмов , например ампициллина или интерферона (в зависимости от вида микроорганизма) в концентрации 0,39- 0,78 мкг/мл среды ив титрах (1:64)- -(1:256) соответственно. На посевы наносят бактериофаг и после инкубирования учитывают наличие фаголизиса. Установлена корреляция меяэду антилизоцимной активностью микроорганизмов и их фагорезистентностью. Вьфащивание микроорганизмов в присутствии упомянутых веществ снижает фагорезис гентность микроорганизмов, что повьшает чувствительность ьткроорганизмов к бактериофагам. 2 з.п. ф-лы, 3 табл. «Л с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ .РЕСПУБЛИК пи .Иш> 1 4 (gg g С 12 1/04

1 А1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3922960/28-13 (22) 01. 07. 85 (46) 15.07.88. Бюл. Я 26 (71) Оренбургский государственный медицинский . институт Р2) О.В.Бухарин, Б.Я.Усвяцов,:

Д. Г.Дерябин и С.И.Керашева (53) 576.8.093.1 (088.8) (56) Инструкция по микробиологической и серологической диагностике кишечных заболеваний бактериальной природы, утв. МЗ РСФСР. М., 1964, с.34-36. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАГОЧУВСТВИi ТЕПЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при постановке реакции фаголизиса.УЦель изобретения — повышение чувствительности микроорганиз мов к бактериофагам. Сущность способа сводится к тому, что исследуемые на фагочувствительность микроорганизмы высевают на питательную среду с введением вещества, снижающего антилиэоцимную активность микроорганизмов, например ампицкплина или интерферона (в зависимости от вида микроорганизма) в концентрации 0,390,78 мкг/мл среды и в титрах (1:64)-(1:256) соответственно. На посевы наносят бактернофаг и после инкубирования учитывают наличие фаголиэиса. Установлена корреляция между антилизоцимной активностью микроорганизмов и их фагореэистентностью.

Выращивание микроорганизмов в приа сутствии упомянутых веществ снижает фагорезистентность микроорганизмов, что повышает чувствительность микрборганизмов к бактериофагам. 2 s.n. ф-лы, 3 табл.

1409661

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при постановке реакции ,фаголизиса.

Цель изобретения — повышение чувствительности микроорганизмов к бактериофагам.

Пример. Для фаготипирования ! сальмонелл готовят питательную среду

1 с ампицилпином в концентрации

0,78 мкг/мл (3,9 мкг на чашку), для этого навеску 39 мг ампициллина рас. творяют в 10 мл 0,9Х-ного раствора

NaC1 и затем троекратно разводят в

10 раз переносом 1 мл раствора антибиотика к 9 мл 0,9%-ного раствора

NaC1. В конечном разведении концентрация ампициллина — 3, 9 мкг/мл. К мл данного разведения добавляют . 20

4 мл расплавленного и остуженного до 46 С питательного arapa, выливают в чашку Петри. Чашку подсушивают в термостате 20 мин,.

Для фаготипирования стафилококков, 25 протея,.кишечной палочки, палочки синезеленого гноя готовят питательные среды с интерфероном в титре ,, 1/64: Ффепарат интерферона разводят и. физиологическим раствором NaC1 до 30 титра 1/8 и к 1 мл данного разведения прибавляют 7 мл остуженного до 46 С питательного arapa, выливают в чашки Петри. Чашки подсушивают в термостате 20 мин.

Исследуемые культуры микроорганизмов наносят на поверхность питательной среды либо стандартной петлей (I, диаметром 5 мм либо засевают сплош- . ным газонщ, После подсыхания посе- 40 вов на их -.поверхность петлей диамет-: ром 3 мм наносят индикаторный, диагностический бактериофаг.

Положительную реакцию определяют по наличию-зоны лизиса на месте нанесения бйф риофага через I 8-20 ч инкубации при 37 С.

Снижение фагорезистентности и антилиэцимной активности микроорганизмов, под действием биологических препаратов представлено в табл. 1.

Как видно из табл.1, под действием препаратов ампициллина и интерферона наблюдается подавление антллизоцимной активности исследованных культур. Эффект действия зависит от

55 концентрации препаратов: оптимальными концентрациями, снизившими антитилизоцимную активность у большинства исследованных штаммов являются для ампициллина 0,78 мкг/мл, для интерферона титр 1/64.

Для подтверждения взаимосвязи между антилизоцимной активностью и фагорезистентностью микроорганизмов исследованы культуры с различной степенью антилизоцимной активности.

В табл.2 представлена фагорезистентность штаммов Salm. typhus muгде с различным уровнем антилиэоцимной активности.

Фагореэистентность антилизоцимноактивных и неактивных штаммов

St. aureus приведены в табл.3.

Как видно из табл 2, высокоантилизоцимоактивные штаммы (6-10 мкг) характеризуются более выраженной фагорезистентностью — 65,47 штаммов устойчивы к высоким концентрациям

1 2 фага в титре 10 -10, тогда как низкоантилизоцимоактивные штаммы (2-5 мкг) устойчивы к этим концентрациям фага только в 35,4Ж. Также более выраженной фагорезнстентностью характеризуются антилизоцимоактивные штаммы стафилококков, по сравнению с неактивными (табл.3): среди антилизоцнмоактивных штаммов на 31,1Х больше культур, не чувствительных к бактериофагу или чувствительных только к 1-2 типам фага. Полученные в табл. 2 и 3 различия для двух независимых выборок достоверны.

Таким образом, использование способа позволяет снизить фагорезистентс ность микроорганизмов, что, в свою очередь, может повысить точность идентификации микроорганизмов по фаголизису.

Формула из обретения

1. Способ определения фагочувствительности микроорганизмов путем посева исследуемых микроорганизмов на питательную .среду с последующим нанесением на посевы бактериофага, инкубированием и учетом результатов по фаголизису, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения чуствительности микроорганизмов к бактериофагам, выращивание осуществляют в присутствии вещества, снижающего антилизоцимную активность микроорганизмов.

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью снижения антилизоцимной активности саль3 1409661 4 монеля используют ампициллин В кон» женин антилиэоцимной активности центрации 0,39-0,78 мкг на 1 мл сре- стафипококков, протея, кишечнс4 лады. . лочки или синегнойной палочки, ис3. Способ по п.1 о т л и ч а ю- пользуют интерферон в титрах 1:64Ф

5 шийся тем, что, с целью сни" -1: 256.

Таблица 1

Интерферон (1:64) Ампициллин (0,78 мкг/мл}

Название биопрепарата

В 4 бактерий

S.typhi muriu

S.aureus Pr.vulgaris

Pr.mirabilis

К.со1 Ps.aeruginosa

Снижение фагорезистентности

12/11

14/5

6/5 4/2

Снижение антилизоцимной активности

12/10

14/14

6/6 4/4

8/7

П р и м е ч а н и е. Числитель » число .исследованных штаммов.

Знаменатель - число штаммов, у которых наблюдался эффект действия биологических препаратов.

T а б л и-.ц а 2

Количество штаммов

Из них резистентны к фагу в титре

105

10 Ъ t7

34

2-5

26

6-10

П р и м е ч а н и е. Указан предельный титр бактериофага, при котором наблюдается рост культур.

Т а б л и ц а 3

Из ннх

Антилизоцимная активность чувствительны к

-2 типам 3-4 типа

5-6 типам фага ага

ara

10

ВНИИПИ Заказ 3457/27 Тираж 520 Подписное

Произв. полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Уровень анти,лизоцимной активности, мкг

Количество штаммов

Фагорезис тентны