Способ определения числа в-лимфоцитов в биологических средах иммунологическим методом

 

Изобретение касается иммунологии . Цель изобретения - повышение точности результатов и упрощение подсчета числа В-лимфоцитов. Выделяют лимфоцитарную массу. Меченную флюоресцеинизотиоционатом поливалентную кроличью антисыворотку к иммуноглобулинам человека разводят средой 199, обрабатывают печеночным порошком и центрифугируют. Надосадочную жидкость смешивают с взвесью лимфоцитов и оставляют на холоду. Затем восстанавливают первоначальное разведение лимфоцитарной массы, делают мазок, высушивают и фиксируют. На мазок наносят раствор меченного родамином бычьего сывороточного альбумина. Мазок высушивают и отмывают. В ультрафиолетовом свете подсчитывают число В-лимфоцитов с антителами к иммуноглобулинам. W

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

5@4 G 01 N 1/28

on casvE ЗОБР Г Н

Н ABTOPCHQMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4007155/28-14 (22) 06.01.86 (46) 15.11.88. Бюл. Н - 42 (71) Институт экспериментальной эндокринологии и химии гормонов АМН

СССР (72) Г.В.Каэанавичюс, Ю.К.Данис, В.И.Кандрор, Г Б.Купренис и В.И.Урбонавичюс (53) 615.475 (088.8) (56) Новиков Д.К., Новикова В.И.

Клеточные методы иммунодиагностики.

Минск: Беларусь, 1979. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧИСЛА В-ЛИМФОЦИТОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ ИММУНОЛОГИЧЕСКИМ МЕТОДОМ (57) Изобретение касается иммунологии. Цель изобретения — повышение, °

ÄÄSUÄÄ 1437737 А1 точности результатов и упрощение подсчета числа В-лимфоцитов. Выделяют лимфоцитарную массу. Меченную флюоресцеиниэотиоционатом поливалентную кроличью антисыворотку к иммуноглобулинам человека разводят средой 199, обрабатывают печеночным порошком и центрифугируют. Надосадочную жидкость смешивают с взвесью лимфоцитов и оставляют на холоду. Затем восстанавливают первоначальное разведение лимфоцитарной массы, делают мазок, высушивают и фиксируют. На мазок наносят раствор меченного родамином бычьего . сывороточного альбумина. Мазок высу" шивают и отмывают, В ультрафиолетовом а свете подсчитывают число В-лимфоцитов

S с антителами к иммуноглобулинам.

1437737. лимфоцитарной массы (2 10 ) клеток/мл.

Делают мазок, высушивают его в термостате (37 С) и фиксируют 96 -ным эталоном в течение 5 мин, Затем на мазок наносят раствор меченного родамином бычьего сывороточного альбумина в разведении средой 199, мазок о высушивают в термостате (37 С, 30 мин) и отмывают средой 199.

При подсчете в ультрафиолетовом свете лимфоциты приобретают краснороэовый цвет, В-лимфоциты с антителами к иммуноглобулинам имеют яркозеленое свечение.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в иммунологии.

Цель изобретения — повышение точности результатов, а также упрщение подсчета числа В-лимфоцитов.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример. Лимфоцитарную массу выделяют в градиенте фикол-пак ($

1077). Полученную массу разводят до концентрации 2.10 клеток/мл. Моноци-6 тарная фракция определяется в процес-. се работы, прилипая к несиликониэиро-15 ванному лабораторному стеклу, МеченВуго флюоресцеиниэотиоционатом поливалентную кроличью антисыворотку к иммуноглобулинам человека разводят средой 199, после чего обрабатывают пе- 20 ченочным порошком и центрифугируют при 6000 об/мин 30 мин. 0,5 мл надосадочной жидкостью смешивают с

0 5 мл взвеси лимфоцитов, приготовленной в среде 199, встряхивают и 25 оставляют на холоде (4 С) в течение

30 мин с периодическим (через 10 мин) встряхиванием.

Рабочую смесь доводят до 8 мл теплой (37 С) средой 199 и вновь поме- 30 о щают в холодильник (4 С) на 30 мин„

После температурной ретракции восстанавливают первоначальное разведение

Формула изобретения

Способ определения числа В лимфоцитов в биологических средах иммунологическим методом, включающий выделение лимфоцитарной массы, обработку ее флюоресцеинизотиоционатом поливалентной кроличьей антисывороткой к иммуноглобулином человека с последующим приготовлением мазков и подсчетом В-лимфоцитов, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения точности результатов, а также упрощения подсчета числа В-лимфоцитов,мазок дополнительно окрашивают. родамином и исследование проводят в ультрафиолетовом свете.

Составитель А.Чирков

Редактор А.Orap ТехредМ.Ходанич Корректор С.Черни

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Заказ 6993 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5