Способ получения нуклеозида или его фармацевтически приемлемых солей

 

Изобретение относится к нуклеозидам, в частности к получению нуклеозида формулы (HOH2C)CH-0-CH(R)-C(F)(OH)CH, где R - основание одной из формул -N-C(O)-NH-C(0)-C(R,) СН или -N-C(0)-N C(NHj)-CR, СН, где R, - водород, метил, фтор или йод, или их фармацевтически приемлемых солей, обладающих противовирусной активностью. Цель изобретения - выявление новых более активных соединений . Получение их ведут взаимодействием соединения формулы (J,OHjC)CH-0-Q-C(F)i-(JjO)CH, где Q - группа СНХ, где X - отщеПляемая группа, J, и J - независимо гвдроксизащитная группа, с защищен- , ным основанием описанных формул. Процесс ведут в среде инертного растворителя , такого как 1,2- дихлорэтан или хлористый метилен, при температуре кипения реакционной смеси с последующим удалением защитных групп и выделением целевого продукта в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли. 7 табл. § СО 4 IVD о О5

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

8!.; . —,.) Г

E- ь., /

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

; (21) 3710351/23-04 (22) 07.03.84

{31) 473883 (32) 10.03 ° 83 (33) US (46) 30.11.88. Бюл. К 44 (71) Эли Лилли энд Компани (US) (72) Ларри Вейн Хертел (US) (53) 547.544.07(088.8) (56) Патент США В 4211773, кл. 424-180 ° 5, опублик. 1979.

Патент СССР Р 671287, кл. С 07 И 19/06, 1928.

Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, т. 11, с. 419, 1972 .. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕ031ЩА ИЛИ

ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ IIPHEMJEMbIX СОЛЕЙ (57) Изобретение относится к нуклеозидам, в частности к получению кукле озида формулы

{нон,с) сн-О-сн(к) -c(F): -(он) сн, где R - основание одной из формул

Э.Л0„„1442076 А 3 (Ю 4 С 07 Н 19/06, 19/16ф А 61 К 31/70

-N-С(о) - -- -NH-С (О) -С (R ) - СН с

-К-С (О) -N = C (NH z) CR - СН, где R — водород, метил, фтор или йод, или их фармацевтнчески приемлемых солей, обладающих противовирусной активностью. Цель изобретениявыявление новых более активных соединений. Получение их ведут взаимодействием соединения формулы (31 Он С) СН-О-Q-С (F) z- (3 0) СН, где Q — группа СНХ, где Х вЂ” отщепляемая группа; J, и 3 z — независимо гидроксизащитная группа, с защищенным основанием описанных- формул. Процесс ведут в среде инертного растворителя, такого как 1,2 дихлорэтан или хлористый метилен, при температуре кипения реакционной смеси с последующим удалением защитных групп и выделением целевого продукта в свободном виде или в виде фармацевтически приемлемой соли. 7 табл.

1442076

Изобретение относится к способу получения новых нуклеозидов общей формулы .: ИОНР

0H F

10 где R — основание одной из формул а где К - водород, метил, фтор или йод, 20 или их фармацевтически приемлемых солей, обладанщих противовирусной актив но стью..

Це ль из о бре те ния — получение новых нуклеозидов, обладающих большей активностью, чем известный структурный аналог — видарабин (Api-А) .

Пример 1. i-(5-Метилт2,4-диоксин-1Н, ЗН-пиримидин-1-ил)-1, 2- З0

-дезокси-2,2-дифторорибоза.

Б атмосфере азота к 2,59 r 3,5-бис(трет-бутилдиметилсилокси)-1-ме- тансульфонилокси-2-дезокси"2,2-ди-. фторорибозы добавляют 1,60 r 5-метил-2,4-бис-(TpHMPTHJIoKcHJIHJloKcH)пиримидина и 45 мл сухого 1.,2-дихлорэтана. Затем к этой смеси добавляют

1,45 r трифторметансульфонилоксиме тилсилана и перемешивают чистый раст-40 вор при кипячении с обратным холодильником в течение 2-3 ч. Затем

-продукты реакции охлаждают до комнат ной температуры, добавляют 1,35 млметанола и перемешивают полученную 45 суспензии в течение 30 мин. Осадок фильтруют, а фильтрат восстанавливают до половины своего объема под вакуумом и разбавляют равным образом дихлорметана. Затем раствор промывают водным раствором бикарбоната натрия и после этого насыщенным водным раствором хлорида натрия и высушивают над безводным сульфатом натрия..

Раствор фильтруют, а фильтрат найща-55 ют безводным бромводородом. Реакци« онную смесь перемешивают в течение

30 мин и затем сгущают под вакуумом.

Остаток растворяют в метаноле и раствор выпаривают до сухости под вакуумом. Полученный остаток растворяют в воде и раствор дважды экстрагируют диэтиловым эфиром. Водный слой выпа-ривают. Остаток поглощают в этаноле и повторно выпаривают до полного обезвоживания. Получают 1 r неочищенного продукта, который хроматографируют на 30 r силикагеле Woelm (70150 меш), при элюировании этилацетатом с выходом 0,76 r требуемого продукта. Этот продукт дополнительно очищают перекристаллизацией из эч ил,ацетата с получением 0,37 r белогб кристалличе ского продукта.

NHR(CDg0D, 90 мГц),, d : 1,93 (S, ЗН), 3,5-4,67 (серии m, 4Н), 4,88 (bS, ЗН), 6,3 ts 3 = 9 Гц, 1Н); 7,47 (m,1Н), масс-спектр. m/е = 278 = исходный.

II р и м е р 2. 1-(4-Амино-2-оксо-1Н-пиримидин-1-ил)-2-дезокси-2,2-дифторорибоза.

В атмосфере азота к 5,0 г 3,5-бис(трет-бутилдиметилсилокси)-1-метансульфонилокси-2-дезокси-2,2-дифторорибозы в 1 мл сухого 1,2-дихлорэтана добавляют 4,68 г бис-триметилсилилацетилцитозина и затем 3,96 г трифторметансульфонилоксиметилсилана. Раствор кипятят с обратным холодильником в интервале 3-15 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, вводят 2 мл метанола и полученную суспензию перемешивают в течение 30 мин. Остаток фильтруют, а фильтрат сгущают в вакууме до полного обезвоживания. Остаток растворяют в метиленхлориде, насыщают безводным HBr и перемешивают при комнатной температуре в течение

45 мин. Полученную смесь сгущают до сухого состояния в вакууме, поглощают метанольным аммонием и перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем раствор сгущают до полного обезвоживания в вакууме, трижды разбавляют водой и водную растворимую порцию вводят в колонку на силикагеле с обратной фазой, получая 100 мг требуемого продукта при элюировании водой.

NMR(CD 0D,90 M ), сР: 3, 7-4,65, (серии m, 4Н); 4,83 (Ь$, 4H); 5,97 (d, Л =8 ГЦ, 1Н); 6,24 (, J = 8 Гц, 1Н), 7,88 (d, J = 8 Гц, 1Н), массспектр: m/å=263=Hñõîäíûé.

2076 4

10

20

30

40

55 з 144

Пример 3. 1-(4-Амино-5-иод-2-ок со-1 Н-пир имидин-1-ил) -2-де зок си-2,2-дифторорибоза.

В атмосфере азота к 1,99 r 3,5-бис(трет-бутилдиметилсилокси)-1-метансульфонилокси-2-дезокси-2,2-дифтор орибозы в 1,35 мл сухого 1,2-дихлорэтане добавляют 2,08 r трис-триметилсилил-5-йодцитозина и 1,11 r трифтор метансульфонипоксиметилсилана. Раствор кипятят с обратным холодильником в интервале 3-15 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют 5,0 мл метанола, полученную суспензию перемешивают приблизительно в течение 30 мин. Остаток фильтруют и фильтрат сгущают в вакууме до сухости. Остаток растворяют в метиленхлориде, насыщают безводным HBr и перемешивают при комнатной температуре в течение 45 мин. Смесь сгущают до сухого состояния в вакууме. Остаток трижды насыщают водой, нейтрализуют, NaHC0 и разделяют на колонне с силикагелем с обратной фазой (Н О:

МеОН(9:1) с получением 26 мл требуемого продукта. NMR(CD)0D, 90 МГц), 4: 3;64-4,73 (серии m, 48); 4,9 (bS, 4H) 6,25 (t, J = 8 йт, 1Н); 8,44 (S, 1Н),масс спектр: m/е = 389 исходный.

Пример 4. 1-(2,4-Диоксо-5-фтор-1Н,ЗН-пиримицин-1-ил)-2-дезок си-2,2-дифторорибоза.

В атмосфере азота к 1, 1 г 3,5-бис(трет-бутилдиметилсилокси)-1-метансульфонилокси-2-дезокси-2,2-дифторорибозы в 20 мп сухого дихлорэтана добавляют 2,88 г бис-триметилсилил-5-Фторурацила и 0,66 г трифторметансульфонилокситриметилсилана. Раствор охлаждают до комнатной температуры, добавляют 1,0 мл метанола и полученную суспензию перемешивают примерно в течение 30 мин. Остаток фильтруют и фильтрат сгущают в вакууме до сухоro состояния. Остаток растворяют в метиленхлориде, насыщают безводным

HBr и перемешивают при комнатной температуре приблизительно в течение

45 мин. Смесь сгущают до сухого состояния в вакууме. Остаток трижды на. сыщают Н О, нейтрализуют NaHCOj u разделяют на колонке с силикагелем с обратной фазой при элюировлнии во-. дой с получением требуемого продукта, ИМЯ(СВз011, 90 МГц), d : 3,5-4,5 (серии m, 4Н); 4,65. (bS, 3H)," 5,89 (t, J= 8 Гц, 1Н), 7,94 (d J= 7 )гц, 1Н), масс-спектр: m/е = 282=исходный.

Пример 5 ° 1-(5- 1етнл-2,4-диокси- i H, ЗН-пир имидин-1-ил)-2-дезок си-2, 2-дифт ор арибоз а .

5,4 г 3,5-бис(трет-бутилдиметилсилилокси)-1-метансульфонилокси-2-дезокси-2,2-дифторорибозы и 45,4 r 5-ме тил-2,4-бис(триметилсилилокси)пиримидина соединяют и нагревают в атмосфе ре азота при перемешивании, при 100 С в- течение 1 ч и при 150 С в течение

1 ч. После этого смесь охлаждают до комнатной температуры, разбавляют

25 мл воды и 10 мл метанола. Суспензию фильтруют через фильтрат со слоем кизельгура и слой промывают ацетоном. Соединенные фильтраты выпаривают под вакуумом и получают 5,3 r маслянистого остатка. Остаток растворяют в 10 мл ацетона и вводят в 4,5 см колонку, набитую 80 г снликагеля.

Проводят алюирование смесью дихлорметан:метанол: триэтиламин f5: 1:1.

Первые 100 мл элюента отбрасывают, а следущие 300 мл выпаривают под вакуумом и получают 4, 1 r сиропообраэного сырого продукта, который раство; ряют в 40 мл ацетона. Через раствор в течение 1 ч барботируют хлористый водород, а затем в течение еще 1 ч барботируют бромистый водород. После этого раствор выпаривают при 62 и получают 4,4 r маслянистого темного продукта.

Указанный продукт растворяют в

10 мл теплой смеси дихлорметан:уксус-. ная кислота 3:1 и вводят в колонку

4,5 см, набитую 45 r силикагеля..Для первых 1000 мл в качестве злюента используют смесь дихлорметан:уксусная кислота 3:1, после чего в качестве элюента используют только уксусную кислоту. Большая часть целевого продукта находится в фракциях между

1000 н 1400 мл, выходящих из колонки, как показывает тонкослойная хроматография на силикагеле с использованием смеси дихлорметан:метанол 15:1.

Эти фракции объединяют и выпаривают под вакуумом, а остаток растворяют в

15 мл холодного ацетона и фильтруют.

Фильтрат выпаривают поп„ вакуумом и получают масло, которое растворяют в 5 мл ацетона и хроматографирует на 20 г силикагеля с использованием смеси дихлорметан:метанол 15: 1. Содержащие продукт фракции объединяют, 5, 14420 выпаривают под вакуумом и получают

300 мг полужидкого соединения. Этот продукт растворяют в 5 мл ацетона и фильтруют, фильтрат выпаривают под вакуумом и получают 230 мг светлокоричневого полутвердого соединения.

Его растворяют в 10 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и раствор экстрагируют дважды порциями по 15 мл диэтилового эфира.

После этого водную фазу выпаривают под вакуумом, остаток суспендируют в ацетоне и фильтруют,,фильтрат выпаривают под вакуумом и получают

140 мг целевого продукта в виде рыжевато-коричневого вязкого масла.

Пример 6. 1-(5-Метил-2,4-диоксо-1Н 3Н-пиримидин-1-ил)-2-дезокси-2,2-дифторорибоза. 20

К 80,0 r 3,5-бис(трет-бутилдимет илсилилокси) -1-ме тансульфонилок си-2"

-дезокси-2, 2-дифторорибозы в. атмосфере азота прибавляют 1,4 л свежеперегнанного хлористого метилена и 26

49,5 г 5-метил-2,4-бис(триметилсилилокси)пиримидина. К этой смеси прибав. ляют 44,8 г трифторметансульфонилокситриметилсилана и реакционную смесь кипятят с обратным холодильни- 30 ком приблизительно в течение 3,25 ч.

Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и к ней поибавляют 41,6 мл метанола. Результирующую смесь перемешивают приблизительно в течение 30 мин,осадившееся твердое соединение собирают фильтрованием. Фильтрат концентрируют под вакуумом при 45 С с получением темного масла, которое растворяют в 40

500 мл хлористого метилена, насыщенного безводным бромистым водородом.

Результирующую суспензию перемешивают приблизительно в течение 3 ч, после чего летучие соединения удаляют под вакуумом при 45 . Остаток о растворяют в 100 мл 10Х.-ного раствора бикарбоната натрия и 100 мл диэтилового эфира. Водный слой отделя- ют и концентрируют под вакуумом при ВО

50 С и получают остаток, который трижды растворяют с порциями йо

100 мл горячего этилацетата. Органические слои объединяют, выпаривают о под вакуумом при 45 и получают остаток, который растворяют в 50 мл. воды. Этот раствор хроматографируют порциями по 10 мл на обращенно-фазовой колонке Waters Prep 500 С с

76 6 использованием смеси вода/метанол (объем/объем, 9:1) в качестве элюента, получают 2,21 r 1-(5-метил-2,4-ди ок со-1 Н, 3H""пири мид ин-1-ил) -2-де зокси-2,2-дифторорибозы. ЯМР (CD;0D, 90 MPq), d : 1,9 (синглет, ЗН); 3,654,65 (мультиплет, 4Н); 34-83 (синглет, ЗН), 6,12 (двойной дублет, Л =

= 7 Гц, 12 Гц, 1Н); 7,70 (синглет, 1Н); масс-спектроскопияj m/е = 278=р.

Пример 7. 1-(2-Оксо-4-амино-1Н "пиримидин-1-ил) -2-де зок си-2, 2-дифторксилоза.

В атмосфере азота в 23 г 3,5-бис(трет-бутилдиметилсилилокси)-2-метансульфонилокси-2-дезокси-2,2-дифторксилозы прибавляют 23 г трис(триметилсилил)цитозина и 300 мл хлористого метилена. К этой смеси прибавляют 10,84 г трифторметансульфонилокситриметилсилана и смесь кипятят с обратным холодильником приблизительно в течение 16 ч. Смесь охлаждают до комнатной температуры и 20 мл метанола прибавляют к смеси. Раствор энергично перемешивают приблизительно в течение 1 ч при комнатной температуре, и выпавшее в осадок твердое соединение собирают фильтрованием.

К органическому слою прибавляют

100 мл воды и суспензию энергично перемешивают в течение 30 мин. 0praнический слой отделяют и выпаривают до сухого остатка. при пониженном давлении, получают 11,2 r коричневого масла. Остаток растворяют в 97 мл метанола, к раствору прибавляют 33 г катионообменной смолы В О Rad А.С.

50Х8. Суспензию перемешивают приблизительно в течение 16 ч при комнатной температуре и смолу собирают фильтрованием. Смолу промывают 50 мл метанола и энергично перемешивают в растворе 100 мл метанола и 100 мл гидроокиси аммония . Эту операцию повторяют два раза, объединенные фильтры кон- . центрируют под вакуумом при 50 и получают 2,09 r желтого остатка. Остаток еуспендируют в 25 мл воды и энергично перемешивают в течение

15 мин. Нерастворимый осадок собира. ют фильтрованием и получают 0,25 г соединения А. Фильтрат концентрируют под вакуумом при 50 . и получают

0,86 г соединения В. Соединение А растворяют в 20 мл метанола и пере мешивают в течение 3 дней c Bio Rad

AG 50MX8 при комнатной температуре.

Смолу Фильтруют и суспендируют в

30 мл 1: 1 (объем/объем) раствора метанол/гидроокись аммония. Смолу снова фильтруют под вакуумом при 50ОС и получают 0,14 r 1-(2-дезокси-2,2-дифтор-р-0-ксилофуранозил)-цитозина. ЯМР (CDqOD, 90 МГц), д": 3,724,34 (мультиплет, 4Н) g 4,78 (синглет, 4Н) 5,86 (дублет, J = 8 Гц, 1Н); 10

6,17 (дублет, J = 15 Гц, 1Н); 7,28 (дублет, J 8 Гц, 1Н); масс-спектрометрия: m/å=263=ð .

Соединение В хроматографируют на обращенно-фаэовой препаративной ко- 1б лонке (50 см)%Зайнап ODS-3 с использованием смеси вода/метанол (объем/ объем, 1:1) в качестве элюента, получают 0,06 r 1-(2-деэокси-2,2-ди» фтор-а -d-ксилофураноз ил ) цитоэина. 20

ЯМР (CDgODэ 90 МГц), d Зэ53 Зэ 9 (мультиплет, 2Н); 4, 1-4,57 (> упьтиплет, 2Н), 4,83 (синглет, 4Н) 5,9 (дублет, Т 8 Й, 1Н); 6, 3 (двойной дублет, J = 7 Гц, 12Гц, 1Н) j 7,55 25 (дублет, J = 8 Pq, 1Н); масс-спектро-. метрия: m/е = 263 = р.

Пример 8. 1-(5-Метил-2-оксо-4-амин о-1Н-пир имидин-1 èë) -2-де зокси-2, 2-дифторорибоз а. 30

В атмосфере азота раствор il,86 r

3, 5-бис (тре т-бутилднме тилсилилок си)—

-2-ме тансульфонилокси-2-де зок си-2, 2-дифторорибозы, 1,82 r трис-,триметилсилил-цитозина и 1,34 r трифторметансульфонилокситриметилсилана в

37 мл сухого хлористого метилена кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и в 40 нее прибавляют 1 мл метанола. Выпавшее в осадок твердое соединение собирают фильтрованием и Фильтрат выпаривают под вакуумом при 45О . Остаток растворяют приблизительно в 45

20 мл воды и этот раствор концентрируют приблизителЬно до половины его первоначального объема выпариванием о под вакуумом при 50 . Остаток не-.. сколько раз растирают с порциями по ВО

10 мл теплого ацетона. Органические экстракты объединяют, выпаривают под вакуумом при 45 ">:и получают .1,67 желтого масла. Это соединение раство-,: ряют в 15 мл смеси метанол/вода (объем/объем, 2: 1) и перемешивают в течение ночи с 5 r BiO Rad AG 50MX8.

Суспензию насыщают безводным аммиаком и перемешивают приблизительно в

1442076 8 течение 10 мин. Смолу собирают вакуумным фильтрованием и суспендируют в 30 мл смеси метанол/аммиак (1:1 по объему). Суспензию перемешивают приблизительно в течение 10 мин, Смолу собирают фильтрованием, основные фильтраты объединяют, концентрируют поц вакуумом при 50 и получают

1,5 г. оранжевого масла. Масло растворяют в 10 мп воды, этот раствор хроматогр фируют порциями по 2 мл препаративной (50 см) колонке с обращенной фазой Whatman partisil ODS-3 с использованием воды в качестве элюента и получают 0,07 г 1-(5-метил-2-оксо-4-амино-1Н-пиримидин-1-ил)—

-2-дезокси-2,2-дифторорибозы. ЯМР (CD>OD, 90 МГц), с . 1,94 (синглет, ЗН), 3,53-4,62 (мультиплет, 4Н) 4,75 (синглет, 4Н); 6,17 (триплет, J =

8 Ри, 1Н), 7,67 (синглет, 1Н); к . масс-спектрометрия; m/е = 277 = р.

Противовирусная активность соединений в соответствии с изобретением показана проводимыми испытаниями

in vitro, которые выполнялись по следующей методике.

Почечные клетки африканской зеленой обезьяны (BSC-1) или клетки Не выращивают в 25 см флаконе производ2 ства фирмы "Falcon" при 37 С в среде

: 199, содержащей 57 инактивированной . сыворотки бычьего эмбриона (BSC-1), пенициллин (150 МЕ/мл) и стрептоми. цин (150 мкг/мл) ° Когда образовались сливакщиеся монослои, ростовую куль:турную среду сливают и 0,3 мл соответствукюцего разбавления указанного .вируса добавляют в каждую чашку.

После адсорбции в течение 1 ч при комнатной температуре вирус, который внедрялся в клеточный слой, был покрыт культуральной средой, содержащей

1 ч ионагра М - 2 и 1 ч среды 199 с удвоенной концентрацией, включающей сыворотку телячьего эмбриона FSl, пенициллин, стрептомицин, а также исследуемое соединение при указанных концентрациях, выраженных в микрограммах на миллилитр (мкг/мл). Флакон, в котором не было испытуемых соединений, служил как контрольный.

Основные растворы испытуемого соединения выполнены в диметилсульфоксиде при концентрации 10 мкг/мл. Флаконы инкубируют в течение 72 ч при 37 С.

Бляшки видны в тех участках, где ви,рус заражал и проникал в клетки. (J0

144207 6

Раствор, содержащий 10Х. формалина и 27. ацетат натрия, добавляют к каждому флакону для инактивации вируса и фиксации клеточного слоя на поверхности флакона. Бляшки вируса незави- симо от размера подсчитаны после окрашивания окружающих клетки кристаллическим фиолетовым. Подсчет бляшек сравнивают с контрольным подсчетом 10 при каждой концентрации лекарственно".

ro препарата. Активность соединения выражается как процентное подавление бляшкообразования .

Результаты проведенньгх расчетов 15 представлены в табл. 1-5 .

Ниже представлены сравнительные данные активности других известных противовирусных средств относительно описьгваемых противовирусных соеди- 20 нений. В частности, соединение примера 3 сравнивают с Ar а-А и Лцикловир для дозы, требуемой для подавления, на 507 роста клеток Герпес,простой, вид I. Эта доза обозначается как

1П o.

Соединения ID z,,(мкг/мл) IC мкг/л

Соединения

0,5 б,9

0,10

OH 0

Пример 1 (P-аномер только) 30 .

0,31

7ьб

1,74

Ara-А

Ацикловир

40 где Кг — водород, метил, фтор, или йод или их фармацевтически приемлемых

45 солей, о тлич ающий ся тем, что соединение общей формулы у,ан,с

ЭуО

55 г;це 0 — rpynna СНХ, где Х - отщепляе" мая группа;

, и

3< — независимо гидроксизащитная группа, Некоторые из описываемых соединений оцениваются при анализе тканевой культуры in vitro. Этот анализ включает рост слоя клеток на дне чашки с тканевой культурой. Клетки заражены штаммом вируса и покрыты сплошным слоем питательного агара. Диски фильтровальной бумаги, проггитанные отмеренным количеством испытуемого соединения, затем наносят на поверх»: ность агара. Чашки инкубированы при

37О С, и клетки затем фиксируют формалином и окрашивают красителем на основе тетрахрома. Зоны противовирусной активности, присущие испытуемому соединению, затем считаются в миллиметрах. Морфология защитных клеток оценивается по шкале от 0 до

4: 0 - полностью разрушенные клетки, 4 - нормальные клетки.

В табл. 6 представлены результатЫ этого анализа. Соединения анализировались при указанных концентрациях. Номер а в скобках, соответствующие размерам зоны, представляют собой морфологические считывания.

В табл. 7 приведены результаты ис-. пытаний следующих соединений ука" занной формулы (ТС - концентрация, обеспечивающая 507.-ное подавление роста). р -1- (6-Амико-9Н.-пурин"9-ил)-2-дезокси-2,2-дифторорибоза

Ы-1- (б-Амино-9Н-пурин-9-ил) -2-де эокси-2, 2,-дифторорибоза

1- (2-Амино-б-оксо-1Н, 9Н-пурин-9-ил)-2-дезокси-2,2-дифторорибоза

Формула из обре тения

Способ получения нуклеозида общей формулы где R - основание одной иэ формул

14420? б

12 подвергают взаимодействию с защищенным основанием формул, описанных выше, в среде инертного растворителя, такого как 1,2-дихлорэтан или хлористый метилен, при температуре кита@цнцй 1

1 96 72 53

Ф

8 6

21

100

99

31

Ф Ю.100 - ° 100

100

«Аноиетрическа» смесь (Ы и р кои9игурацяи).

Конфигураци» а»сера еолвко.

Таблица 2 ределе нных концекграцяак соецяиени», ккг/ин,e

wm слоем агара, вирус ясавдобеиеясена чева) 10 6

t 23 18 15 12 6 5

Ю!

00 1ОО

1ОО 1ОО 1ОО 92 е днонетриче скан смесв (et я р кои@а урацяи) .

Та блица 3

Подавление бляшкообразования, 7., при определенных концентрациях соединения, мкг/мл, с использованием клеток BSC-1, покрываемах слоем агара 100 . - 20

10.

Герпес простой, вид II

100 . 100 83 Вирус полиомиелита, вид I (Polio virus) 100 100

;28

100

+.

Конфигурация аномера только.

Соединениее примера

98

100 пения реакционной смеси с последующим удалением защитных групп и выделением целевого продукта. в свободном: виде или в виде фармацевтически приемлемой соли.

14

Таблица 4

1442076

Подавление бляшкообразования, Ж, при определенных концентрациях соединений, мкг/мл, с использованием клеток Не1а, покрываемых слоем агара, Герпес простой, вид II

100

100

100

80

100

+ - конфигурация аномера.

o(- конфигурация, аномера.

Таблица 5 одавление бляшкообразования, Х, при определенных онцентрациях, мг/мл, соединений с использованием леток Hela, покрываемых слоем агара, Герпес простой, вид I

Соединение примера

20 10 2

+Д - аномер только.

+ - возможно токсичный.

Таблица 6

Концентрация пропитывающе ro раствора, мкг/мл

Размеры эоны клетки, мм, используемый штамм вируса

Polio Herpes Ann Arbor "Semlihi Forest

65 (4) 2

5000

45 (4) 19(4) 1000

40 (4) 17 (4) 500

32 (4) 14(4) 250

Соединение примера

Соединение примера

100 100 99

100 100 . 100

47 (4) 50 (4)

44 (4) 45 (4)

39 (4) 40 (4) 99 42

90 54!

442076

Продолжение табл.6

Размеры зоны клетки, мм, используемый штамм вируса онце нтраия пропитывающе го аствора, мкг/мл

Semlihi Forest;

24(4) 10(4) 125

21(4) 7 (3) 62 5

16(4) 31,25

12,5

6,25

15 (4) 3,13

9(4) 1,56

7 (2}

Та блица 7

23(4) 5000

3 HSV-1

12,5

HSV

Pseudo Rabies

20

1,25

100

133 ингибирования

297 ингибирования

100

34 (4) 37 (4)

28(4) 34(4)

15 (4) 30(4)

15 (4) 27 (4)

14(3) 24 (4)

9 (1) 20 (4-)

7 НБЧ-1 (аномер- Polio virus Type ная смесь)

8 HSV-1

15 (1}

14(1)

100Х ингибирования

25Х ингибирования

100Х ингибирования

923 ингибирования

1442076

: Продолжение табл 7 тс 7 20

6 CCRF-СЕМ а11 (челов ече ские лейкемиче ские кле тки) Идоксуридин

33(З) 250

100Х< ингибированйя

59Х ингибирования

76Х ингибирования

ЗОХ иигибирования

20Х ингибирования

7,8

100

Ара-А

31,2

10,0

+Зона ингибирования при скрипировании культуры ткани описана в табл. 6 ".

+ См. табл. 1 - ингибирование относится к способности ингибировать образование бляшек.

Составитель

Техред А.Кравчук .

Корректор Г.Решетник

Редактор О.Спесивых

Заказ 62 98/5 8

Тираж 348

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР ло делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. ужгород, ул. Проектная, 4