Способ получения силибинина

 

Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения силибинина - средства для лечения печени. Цель изобретения - получение целевого силибинина без примеси его изомера - изосилибина. Процесс ведут переработкой высушенных, плодов растения Silubun marianym L. Gaerth. Способ включает следукщие стадии: отделяют основное; количество жирного масла за счет разрушения клеток плодов под действием высокого механического давлеиия; отпрессованный остаток (с содержанием 5-10% масла ) зкстрагируют этилацетатом с последующей его отгонкой; полученный остаток (2% от исходного) растворяют в нижней фазе смеси метанола, воды и петролейного эфира (т.кип. 4р-60 С) при их массовом соотношении в смеси 95г5:100; для удаления хлопьевидных частиц твердого вещества раствор центрифугируют до получения прозрачной жидкости; сухой остаток подвергают противоточному многократному равномерному диспергированию в указанной системе растворителей при равном соотношении объемов верхней и нижней фаз; последнюю фазу упаривают в вакууме досуха с вьщелением коричневого порошка, т.е. 70-80%-ной смеси полиоксифенилхроманонов - силимаринов 1-18 групп; 1 мае.ч. указанного порошка суспендируют с 0,7-1,5 мае.ч. насыщенного водой этипацетата и выдерживают суспензию в течение 1-2 сут; осадок отделяют фильтрованием, Ъромывают охлажденным насыщенным водой этилацетатом, взятым в количестве 0,07-0,15 мае.ч., сушат в вакууме при 30-50°С; полученный продукт растворяют при кипении в 30-50 мае.ч. безводного этилацетата и обрабатывают в течение 2 ч при кипении активированным углем, взятым в количестве 0,2-0,4 мас.Чо, и фильтруют; фильтрат упаривают в вакууме при 30-50°С до объема 3,33 л и к концентрату добавляют 0,5-0,8 маСоЧ. насьпценного водой этилацетата с последунлдей выдержкой 5-1.0 ч; отфильтрованный остаток суспендируют в 0,9-1,5 мае.ч. технического этилацетата, отделяют осадок и сушат в вакууме при 30-50°С с поеледукщим перемалыванием и повторным высушиванием в вакууме при 30-50°Со Полученный силибинин практически не содержит изосилибина и при лечении печени, пораженной алкоголем , в сравнении с известным плацебо превосходит последний по достигаемому эффекту (меньшее время лечения ) . Кроме того, предотвращаются поражения печени при операциях брюшСО 1 ел Од со см

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК цв (в 14

А3 (51)4 С 07 Р 407/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (2.1 ) 39 79552/23-04 (22) 21. 11.85 (31) P 3537656 (32) 23. 10.85 (33) DK (46) 30.01.89. Бюл. Р 4 (71) Др. Мадаус ГМБХ Унд Ко (DE) (72) Рольф Мадаус, Клаус Герлер и Хартвиг Зоике (DK) (53) 547.841.07(088.8) (56) Выложенная заявка ФРГ

Р 3225688, кл. С 07 D 407/02, опублик.

1984.

Патент ФРГ Р 1923082, кл. 12 q 24, опублик. 1974. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СИЛИБИНИНА (57) Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения силибинина — средства для лечения печени. Цель изобретения — получение целевого силибинина без примеси его изомера — изосилибина. Процесс ведут переработкой высушенных. плодов растения Silubum шагхапуш

Ь. С@его. Способ включает следующие стадии: отделяют основное количество жирного масла за счет разрушения клеток плодов под действием высокого механического давления; отпрессованный остаток (с содержанием 5-10Ж масла) экстрагируют этилацетатом с последующей его отгонкой; полученный остаток (2X от исходного) растворяют в нижней фазе смеси метанола, воды и петролейного эфира (т.кйп. 40-60 С) при их массовом соотношении в смеси

95:5: 100; для удаления хлопьевидных частиц твердого вещества раствор центрифугируют до получения прозрачной жидкости; сухой остаток подвергают противоточному многократному равномерному диспергированию в указанной системе растворителей при равном соотношении объемов верхней и нижней фаз; последнюю фазу упаривают в вакууме досуха с выделением коричневого порошка, т.е. 70-80Х-ной смеси полиоксифенилхроманонов — силимаринов 1-18 групп; 1 мас.ч. указанного порошка суспендируют с 0,7-1,5 мас.ч. насыщенного водой этилацетата и выдерживают суспензию в течение 1-2 сут; осадок отделяют фильтрованием, промывают охлажденным насыщенным водой этилацетатом, взятым в количестве О, 07-0, 15 мас.ч., сушат в вакууме Q при ЗО-ОО С; еопучеипый продукт растворяют при кипении в 30-50 мас.ч. безводного этилацетата и обрабатывают в течение 2 ч при кипении активированным углем, взятым в количестве Я

0,2-0,4 мас.ч., и фипьтруют; фильто рат упаривают в вакууме при 30-50 С до объема 3,33 л и к концентрату до- 4 бавляют 0,5-0,8 мас.ч. насыщенного Ql водой этилацетата с последующей вы- фф держкой 5-10 ч; отфильтрованный остаток суспендируют в 0,9-1,5 мас.ч. ®, технического.этилацетата, отделяют осадок и сушат в вакууме при 30-50 С с последунщим перемалыванием и повторным высушиванием в вакууме при

30-50 С. Полученный силибинин практически не содержит изосилибина и при лечении печени, пораженной алко- (р3 голем, в сравнении с известным плацебо превосходит последний по достигаемому эффекту (меньшее время лечения). Кроме того, предотвращаются поражения печени при операциях брюш1456013 ной полости или употреблении лекарст- например хлорпромазина, xJIOpoKBHHa венных средств, влияющих на печень, или аспарагиназы.

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения силибинина, который является ценным средстврм для лечения печени.

Силибинин и лекарственные средства, которые содержат это соединение Mariendistel-Silybum marianum

L. Gaerth (Carduus marianus L.), представляют собой известное лекарственное растение. Из флаволигнанов, присутствующих в плодах этого растения, выделяют компонент, а именно силибин (силимарин 1), который содержит два изомера: силибинин и изосилибин. Свободный от присутствия изосилибина силибинин обладает преимуществами по сравнению со смесью этих двух изомеров.

Цель изобретения — получение силибинина без примеси изосилибина за счет многократной экстракции

70-80Х-ной полиоксифенилхроманоновой смеси этиловым эфиром уксусной кислоты

Пример 1. A. Получение полиоксифенилхроманоновой смеси.

100 кг высушенных плодов растений Silubym marianym Gaerth на шнековом прессе для масляных семян под высоким давлением освобождают от основного количества жирных масел, причем получают 75-80 кг отпрессованного остатка с остаточным содержанием масла 5-10Х.

80 кг отпрессованного остатка затем исчерпывающе экстрагируют этилацетатом. После испарения этилацетата получают 5-6 кг маслянистожирного, отчасти комковатого остатка после высушивания с содержанием биологически активного вещества

20-ЗОЖ. Остаток после высушивания в количестве 2 мас.X растворяют в состоящей.из метанола и воды нижней фазы смеси растворителей, состоящей из 95 мас.7. метанола, 5 мас.ч. воды и 100 мас.ч. петролейного эфира (т.кип. 40-60 С), и центрифугируют

2 для отделения от хлопьевидных твердых веществ до получения прозрачной жидкости. Конечный объем нижней фазы составляет 300 л. Затем осущест5 вляют многократное равномерное диспергирование в противотоке следующим образом: шесть отдельных центрифужных сепараторов для разделения жидкость — жидкость при промежуточном подключении по стадии эмульгирования подключаются последовательно, так, чтобы нижняя фаза проходила через верхнюю в противоположном направлении, причем (смотря по обстоятельствам) в стадии эмульгирования обе фазы с целью обмена веществ эмульгируются одна в другой. В соответствующей следующей стадии отделения эмульсия снова разделяется на тяжелую и легкую фазы.

Трубопроводы расположены так, что отделенная верхняя фаза противотоком к нижней фазе попадает в соответствующий предшествующий этап эмульгирования и т.д.

Сначала верхнюю и нижнюю фазы указанной тройной смеси растворителей непрерывно одну против другой подводят в батарею для диспергирования без нагрузки веществом, причем устанавливается фазовое равновесие.

В протекающую нижнюю фазу после этого непрерывно вводят верхний 27-ный раствор вещества. При подпитке на

35 входе нижней фазы необходимо, чтобы соотношение общего количества протекающих объемов верхней фазы к нижней не изменялось и оставалось равным 1: 1.

40 Скорость протекания обеих фаз saвисит далее от степени действия эмульсионного агрегата и разделений.

Оптимальное установление можно определять гравиметрически путем коли45 чественных определений величин перехода веществ.

Вытекающая из батареи для диспергирования нижняя фаза (примерно

Содержание изосилибина 0,1-0,3Х.

Данный способ позволяет получить силибинин практически без содержания изосилибина. з

145601

300 л) под давлением 20 мм доводится досуха, причем получают 3,1 кг окрашенного от бежевого вплоть до коричневого цвета порошка, который состоит на 70-80Х из полиоксифенил5 хроманоновой смеси, представляющей смесь силимаринов I-IV (силимарин

I-IV = силимарин I-IV-группа). Выход биологически активного вещества составляет 2,.2Х в расчете на исходный материал.

Б. Получение не содержащего иэосилибина силибинина.

500 r полученной полиоксифенипхроманоновой смеси (70Х) суспендируют в 2 кг метанола (примерно

2,53 л) и кипятят при перемешивании в течение 15 мин. Из полученного таким образом раствора спустя это время может выпадать уже немного силибинина. Затем удаляют в вакууме 0,75-1,25 кг (примерно 0,961,58 л) метанола и остаток оставляют стоять в течение 10-28 дней при 25 комнатной температуре. Выпавший в осадок силибинин отфильтровывают и дополнительно промывают дважды по

50 мп холодным метанолом. После высушивания при 40 С в вакууме изоли- 30 рованный сырой силибинин очищают следующим образом: 60 г сырого силибинина растворяют при нагревании в 3 л технического уксусного эфира, после этого смешивают с 20 r активного угля и перемешивают следующие

2 ч в условиях кипения с обратным холодильником. Затем отфильтровывают до получения прозрачного раствоР ра и раствор концентрируют при 50 С при пониженном давлении вплоть до примерно 250 мп. Концентрат перемешивают в течение 15 мин при применении прибора Ultra-Turrax и при перемешивании смешивают с 25 мп метано- 4> ла. Затем смесь оставляют в течение ночи при комнатной температуре. Перед отсасыванием на нутч-фильтре осадившегося при этом силибинина смесь еще раз в течение 5 минут размешивают с помощью аппарата 9ltraTurrax. Отсосанный на нутч-фильтре осадок дополнительно промывают 2 раза по 50.мл уксусным эфиром и высушивают в вакуумном сушильном шкафу в течение ночи при 40 С. После этого продукт размалывают и дополнительно высушивают при тех же условиях.

Выход силибинина (в расчете на сили3

4 бинин в сыром силибинине) 79-85Х при содержании 96-98,5Х силибинина в зависимости от качества сырого силибинина.

Содержание изосилибина 0,1-0,3Х.

Константа диссоциацни: 9,6х10 (С = 4,15x10 мол/л), т пл. 167 С.

Растворимость в воде 19 мг/л при

25 С, рКа = 6,42.

Пример 2. Получение не содержащего изосилибина силибинина.

1 кг полиоксифенилхроманоновой смеси (снлимарин I-IV-силимарин

I-IV-групп, содер.70X) суспендируют в 1 л насыщенного водой уксусного эфира в течение 3 мин с интенсивным перемешиванием. Спустя 48 ч стояния при комнатной температуре осадок отсасывают, промывают 100 мл холодного, насыщенного водой уксусного эфира и высушивают в течение 48 ч при

40 С в вакууме. Выход этого промежуточного продукта (сырого силибинина) составляет в зависимости от качества сырого силимарина 80-85Х (в расчете на содержание силибинина в сыром силимарине) при содержании 80-84Х. Сырой силибинин растворяют в 40 л сухого уксусного эфира в точке кипения, кипятят,с обратным холодильником в течение 2 ч с 360 г активного угля, отфильтровывают и концентрируют в вакууме при 50 С до общего объема

3330 мп. В этот раствор при интенсивном перемешивании и при комнатной температуре добавляют 667 мл насыщенного водой уксусного эфира. Спустя

1-3 ч после этого происходит кристаллизация силибинина. После стояния в течение ночи осадившийся силибинин отделяют путем отфильтр овывания, дважды суспендируют с техническим уксусным эфиром, беря каждый раз по

1200 мп, в течение 5-10 мин, снова отфильтровывают и предварительно вы- . сушивают в течение 24 ч в вакууме при 40 С. После размалывания дополнио тельно высушивают в течение 48 ч при

40 С в вакууме. Выход силибинина (в расчете на силибинин в сыром силибинине) 79-85Х при содержании 96Я8,5Х силибинина в зависимости от качества сырого силибинина.

5 1456

Клинические испытания силибинина.

В последние десятилетия черезвычайно сильно увеличилось количество токсических повреждений печени. Наиболее частой причиной повреждения является алкоголь.

В результате контролированного изучения удалось доказать превосходство силибинина по сравнению с плаце- 1О бо и другими сравниваемыми методами лечения. В двойном опыте на 66 пациентах с пораженной алкоголем печенью силибинин (n = 31) испытывали в сравнении с плацебо (и = 35) °

Подвергнутые статистической оценке результаты показывают, что силибинин значительно превосходит плацебо. При этом значительно сокращается время выздоровления по сравнению с плацебо. о

Во втором двойном слепом опыте с 76 пациентами, из которых 39 получили силибинин, а 37 подверглись контрольному лечению, обнаружены очень большие различия, говорящие в пользу силибинина.

При токсичном по отношению к печени действия наркоза в связи с оперированием органов брюшной полости может быть доказано, что предоперацион- >О ное введение силибинина приводит к значительному уменьшению послеоперационного повышения содержания ферментов печени в крови. С помощью сипибинина эффективно предотвращаются также возникающие в настоящее время все чаще и вызываемые определенными лекарственными средствами поражения печени. Это может быть показано на примере индицированного фенилгидантоином 40 гепатоэа, при котором, несмотря на дальнейшее назначение безусловно необходимого и предотвращающего спазмы медикамента, при одновременном назначении силибинина в более короткое время нормализуются все лабораторные показатели.

Другие испьггания при заболеваниях шизофренией и с тяжелыми поражениями печени, возникающими при назначении

30 хлорпромазина, также показали положительное действие силибинина. Другие опьггы касаются предотвращения связанного с поражением печени воздействия, например, хлороквина или аспарагиназы. В случаях поражения печени, обусловленных профессией, у всех подвергнутых лечению пациентов могут быть значительно улучшены патологи013 6 чески повышенные данные лабораторного исследования, причем независимо от причины илк возможных дополнительньи заболеваний.

Кроме того, силибинин вызывает также значительные улучшения при хронических воспалительных заболеваниях печени и при циррозе печени. Например, пациенты с циррозом печени в рамках продолжительного исследования были использованы в двойном слепом опыте, в котором силибинин испытывали в сравнении с плацебо. Критерием для оценки терапевтического успеха было прежде всего время переживания.

Здесь обнаружилось значительное превосходство силибинина в сравнении с плацеболечением. Сравнительные испьггания между сипибииином и изоснлибином и силибином (смесь силибинина и изосилибина) на модели фаллоидини празеодим-интоксикации проводили на мышах после внутривенного введения.

Антигепатолоксическое действие силибинина, изосилибина и силибина в виде II-метилглюкаминовой соли испытывали в дозах 50 и 100 мг ° кг- .(в расчете на силибинин) на модели отравления валлоидином или празеодимом на мышах после внутривенного введения. Введение исследуемого вещества производили за 1 ч до отравления фаллоидином или эа 1 ч до или же через 6,24 и 48 ч после отравления празеодимом. В случае отравления валоидином оценивали степень переживания, а в случае отравления празеодимом оценивали различные параметры сыворотки и печени через 72 ч после интоксикации.

В случае интоксикации фаллоидином степень переживания после введения силибинина в обеих дозах составляла

1007.. При применении остальных веществ степень переживания не превышала 40Х у необработанных пораженных контрольных животньи.

Изосилибин оказался в связи с интоксикацией празеодимом непереносимым, вследствие чего доза 100 мг кг- должна быть разделена на два частичных приема.

Формула изобретения

1. Способ получения силибинина формулы I

14560

OH

ОС 3

ОН

ОНО

Составитель И. Дьяченко

Техред Л. Олийнык

Редактор M. Петрова

Корректор М.Самборская

Заказ 7460/58 Тираж 352 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 при котором высушенные плоды растения Silubum marianym L. Gaerth осво- 10 бождают от основного количества жирного масла посредством топо, что клетки плодов разрушают под воздействием высокого механического давления, затем отпрессованный остаток, 15 характеризующийся содержанием масла

5-10Х, полностью экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты, этиловый эфир уксусной кислоты отгоняют, после чего полученный сухой остаток 20 в количестве 2 мас.Х растворяют в состоящей из метилового спирта и воды нижней фазы смеси трех растворителей, состоящей из 95 мас.ч. метилового спирта, 5 мас.ч. воды и 25

100 мас.ч. петролейного эфира (т.кип.

40-60 С), для удаления хлопьевидных частиц твердого вещества производят центрифугирование до получения прозрачной жидкости, а затем в этой 30 системе растворителей сухой остаток подвергают многократному равномерному диспергированию в противотоке, причем соотношение общих протекающих объемов верхней фазы и нижней фазы поддерживают равным 1:1, и непосредственно после этого из вытекающей нижней фазы в результате упаривания в вакууме досуха вьщеляют в виде окрашенного в коричневый цвет порош- щ кообразного вещества 70-807.-ную по13 8 лиоксифенилхроманоновую смесь (силимарин I-IV = сипимарин I-IV-групп), отличающийся тем, что, с целью получения целевого продукта, свободного от примеси изосилибина, одну массовую часть полученного и окрашенного в коричневатый цвет порошка суспендируют с 0,7-1,5 мас.ч. насыщенного водой этилового эфира уксусной кислоты, приготовленную суспензию выдерживают в течение

1-2 сут, осадок отделяют фильтрованием, промывают охлажденным и насыщенным водой этиловым эфиром уксусной кислоты, который берут в количестве 0,07-0,15 мас.ч., и сушат в вакууме при 30-50 С, полученный продукт растворяют при нагревании до температуры кипения смеси в 3050 мас.ч. сухого (безводного) этилового эфира уксусной кислоты, раствор обрабатывают в течение 2 ч. при температуре кипения смеси в сосуде, снабженном обратным холодильником, акти= вированным углем, взятым в количестве 0,2-0,4 мас.ч.,производят фильтрование, после чего фильтрат упаривают в вакууме 30-50 С до общего объема 3,330 л, к концентрату прибавляют 0,5-0,8 мас.ч. насыщенного водой этилового эфира уксусной кислоты, выделившийся в осадок силибинин через 5-10 ч. отфильтровывают и суспендируют в 0,9-1,5 мас.ч. технического этилового эфира уксусной кислоты, осадок фильтруют и подвергают предварительной сушке в вакууме при 30о

50 С, предварительно высушенный продукт перемалывают и вновь сушат в вакууме при 30-50 С.