Способ получения иммобилизованной глюкоамилазы

 

Изобретение относится к биотехнологии , а именно к получению и использованию иммобилизованных фермек тов, в частности глшкоамилазы. Цель изобретения - повьшение активности и стабильности целевого продукта. Способ заключается в повышенном связывании с помощью водорастворимого карбодиимида глюкоамилазы. на сополимере акриламида, N,N -метиленбисакриламида и К-(аминоэтил)акриламида, содержащего 2,75 м.экв/г - Ш -групп или из сополимера акриламида, N,N - метиленбисакриламида и акриловой кислоты , содержащего 1,0-7,49 м.экв/г (ЮОН-групп, размер пор которых не позволяет проникать в них веществам с мол.м. 100.000-300.000 дальтон. Связьюание проводят при рН 4,5-9,0, температуре в течение 24-72 ч. Способ позволяет повысить активность иммобилизованной глюкоамилазы в л. 4 раза , а также ее стабипьность в л. 3 раза . i О)

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (59 4 С 12 N 11/08

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ПАТЕНТV

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

APH ГКНТ СССР (21) 3636469/28-13 (22) 23.08.83 (31) 2717/82 (32) 24.08.82 (33) HU (46) 23.02.89. Бюл. У 7 (71) Реанал Финомведьсердьяр и Сесипари Кутатоинтезет (HU) (72) Ласло Борошш, Иван Дароци, Агоштон Хошке, Йене Кюртешши, Злемер Ласло, Ласло Лудвиг, Габриелла

Кламар и Бела Сайани (HU) (53) 577.1 5(088.8) (56) Патент CVIA II - 4066504, кл. 195/63, опублик. !982 °

Иммобилизованные ферменты. /Под ред. И. В. Березина и др. — М.: МГУ, 1976, т. 2, с ° 171. (54) CIIOCOH ПОЛУЧЕНИЯ И1!МОБИЛИЗОВАННОЙ ПЦ (57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению и ис-.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению иммобилизованных ферментов, и может быть использовано в пищевой промьппленности.

Целью изобретения является увеличение активности и стабильности иммобилизованной глюкоамилазы.

Способ получения иммобилизованной глюкоамилазы заключается в повьппенном связывании глюкоамипазы с помощью водорастворимого карбодиимида с синтетическим носителем на основе акриламида, в качестве носителя используют пористые гранулы из сополи„„SU„„< >3 3 А3 пользованию иммобилизованных фермен тов, в частности глюкоамилазы. Цель изобретения — повышение активности и стабильности целевого продукта.

Способ заключается в повьппенном связывании с помощью водорастворимого карбодиимида глюкоамилазы.на сополиf мере акриламида, N,N --метиленбисакриламида и N-(аминоэтил)акриламида, содержащего 2,75 м.экв/г — NHg-групп или из сополимера акриламида, N,N— метиленбисакриламида и акриловой кислоты, содержащего 1,0-7,49 м.зкв/г

СООН-групп, размер пор которых не позволяет проникать в них веществам с мол.м. 100.000-300.000 дальтон.

Связывание проводят при рН 4,5-9,0, температуре 0-4 С в течение 24-72 ч.

Способ позволяет повысить активность иммобилизованной глюкоамилазы в ь4 раза, а также ее стабильность в и. 3 раза. мера акриламида, N N -метиленбисак" риламида и N" (аминоэтип) акриламида, содержащего 2,75 Иэкв/г НН,-групп, I или из сополимера акриламида, N,Nметиленбисакриламида и акриловой кислоты, содержащего 1,0-7,49 Мэкв/г

СООН-групп, размер пор которых не позволяет проникать в них веществам с мол.м. 100.000-300.000 дальтон, а связывание проводят при рН 4,5-9,0, температуре 0-4 С в течение 24-72 ч, полученный гель промывают буфером, неоднократно отмывают от солей водой и при желании лиофилизуют. Способ позволяет получить препараты з 146

ычмобилизованной глюкоамилазы с высокой стабильностью и:активностью.

Пример 1. 0,5 г Akrilex A ксерогеля (связывающая способность, т.е. содержание NH -групп 2,75 Мэкв/г, размер частиц 100.320 мкм) суспендируют в 25 мл 0,1 И к-фосфаты (рН

7,0), добавляют 1,7 мг раствора глюкоамилазы (117,7 мг/мл) при перемешивании. Через 10 мин добавляют !

0,5 г N-циклогексил N — Е2-(4-морфолинил)этила-карбодиимида, растворенного в 25 мл холодного буфера (+4 С).

При 0-4 С полное время реакции составляет до 48 ч, за это время смесь перемешивают два раза по 6 ч. Гель отделяют фильтрованием и трижды промывают 50 мл 0,1 M к-фосфата (рН

7,0), трижды тем же буфером с добавлением 1 M.NaC1 (по 50 мл) и трижды по 50 мл буфера NaC1. Затем промывают дистиллированной водой и модифицируют. Таким образом, получают 0,7 r иммобилизованной. глюкоамилазы с активностью 1,6 г глюкозы/ч ° r ксерогеля.

Пример 2. 0,5 г Akrilex

С-100 ксерогеля (содержание COOHгрупп 6,2 Мэкв/г, размер частиц 100320 мкм) суспендируют в 50 мл 0,1 М буфера ацетата натрия (рН 4,5) и добавляют 1 r карбодиимида. Далее способ осуществляют по примеру 1, заменяя к-фосфат на 0,1 М ацетат натрия с рН 4,5. Получают 0,7,r иммобилизованной глюкоамилазы с активностью 0,85 г глюкозы/ч ° г ксерогеля.

Пример 3. Ведут опыт по примеру 2 за исключением того, что реакцию ведут 24 ч. Выход: 0,65 г иммобилизованной глюкоамилазы. Активность: высвобождается 0,79 r глюкозы/ч г ксерогеля.

Приме р 4. Ведутопытпо примеру 2 за исключением того, что реакцию ведут в течение 72 ч. Выход:

0,63 г иммобилизованной глюкоамилазы. Актив нос ть: высвобождается, 0,82 г глюкозы/ч г ксерогеля.

Пример 5. 0,5 г Akrilex

С-100.ксерогеля (связывающая активность, т.е. СООН-содержание, 6,2 Мэкв/г, размер частиц !00—

320 мкм) суспендируют в 50 мл 0,1 M буфера ацетата натрия (рН 5,0), после чего добавляют 1 г N-циклогексил-Б -!",2-(4-морфолинил)-этил 1-карбодиимид-метил-пара-тдлуолсульфоната на

1373

4 охлаждаемой льдом бане при постоянном перемешиванни. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин, после чего добавляют 1,6 мл раствора глюкоамилазы (117,7 мг/мл) и рН ре=. акционной смеси устанавливают 4,5. о

При 0-4 С. полное время реакции составляет до 48 ч за это время суспензию дважды перемешивают в течение

6 ч каждый раз, рН контролируют в начале каждого получаса, а затем раэ в час и в случае необходимости доводят до нужного значения. После завершения реакции гель удаляют фильтрацией и трижды промывают порциями по 50 мл 0,1 М буфера ацетата натрия (рН 5,0), трижды порциями по 50 мл

1,0 М буфера ацетата натрия, содержащего 1,0 моль хлористого натрия, каждая (рН 5,0), и трижды порциями по 50 мл 0,1 M буфера ацетата натрия (рН 5,0). В конце гель промывают до полного удаления соли дистиллирован25 ной водой и лиофилизируют. Таким образом, получают 0,7 r иммобилизованной глюкоамилазы. Активность: 0,75 r.

П р и м е,р 6. 0,5 r Akrilex

С-1 00 ксерог ели (связывающая cno3p собность, т. е. COOH-содержание, 6,2 Мэкв/г, размер частиц 100

320 мкм) суспендируют в 50 мл 0,1 М буфера ацетата натрия(рН 6,0), после. чего добавляют 1 r N-циклогексил"N "

35 — Г2- (4-морфолинил)-э тил) -карбодиимид-метил-пара-толуолсульфоната на водяной бане со.льдом при постоянном перемешивании. Реакционную смесь пере мешивают в течение 10 мин, после че4р го добавляют 1,7 мл раствора глюкоамилазы (117,7 мг/мл) и рН реакционной смеси устанавливают 6,0. При Оо

4 С время до завершения реакции составляет до 48 ч, за это время сус45 пензию дважды перемешивают по 6 ч каждый раз, рН контролируют в начале каждого получаса и затем один раз в час, а в случае необходимости доводят до нужного значения. После завершения реакции гель удаляют фильтрованием и трижды промывают порциями по 50 мл 0,1 .М буфера ацетата нжг рия (рН 6,0), трижды порциями по

50 мл 1,0 М буфера ацетата натрия, сОдержащего 1 О моль хлористогО нат рия каждый,(рН.6,0), и триждь порциями по 50 мл.0,1 М буфера ацетата натрия (pH 6,0). В конце гель промы. ,вают ., до полного удаления солй

73 ток суспензию дважды перемешивают по

6 ч каждый раз, рН контролируют в начале каждого получаса, а позднее раз в час, в случае необходимости доводят до нужного значения. После завершения реакции гель удаляют фильтрованием и трижды промывают . порциями по 50 мл 0,1 M буфера ацетата натрия (рН 7,5), трижды порция ми по 50 мл 1,0 М буфера ацетата натрия, содержащего по 1,0 хлористого натрия каждая (рН 7,5), и трижды порциями по 50 мл 0,1 M буфера ацетата натрия (рН 7,5). В конце гель промывают до полного удаления соли дистиллированной водой и лиофилизируют. В результате получают 0,75 r иммобилизованного геля. Активность: вьщеляется 5,7 г глюкозы/ч г ксерогеля.

Пример 9. 0,5 г Akrilex

С-IОО ксерогеля (связывающая активность, т.е. СООН-содержание, 6,2 Мэкв/г, размер частиц 100—

320 мкм) суспендируют в 50 мл 0,1 М буфера ацетата натрия, после чего ( добавляют 1 r N-циклогексил-N -Г2— (4-морфолинил)-э тигД-к арбодиимид-пара-толуол-сульфоната в водяной бане со льдом при постоянном перемешивании. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин, после чего добавляют 1,7 мл раствора глюкоамилазы (117,7 мг/мл) и рН реакционной смеси устанавливают 8,0. При о

0-4 С время до завершения реакции составляет до 48 ч, за этот промежуток суспензию дважды перемешивают по 6 ч каждый раз, рН контролируют в начале каждого получаса, а затем один раэ в час, в случае необходимости доводят до нужного значения. После завершения реакции гель удаляют . фильтрованием и трижды промывают порциями по 50 мл 0,1 M буфера ацетата натрия (рН 8,0), трижды порциями по 50 мл 1,0 М буфера ацетата натрия, содержащего по 1,0 моль хлористого натрия каждый (рН 8,0), и трижды порциями по 50 мл 0,1 молярного буфера ацетата натрия (рН 8,0). В конце гель промывают до полного уда" ления соли дистиллированной водой и лиофилизируют. Таким образом, получают 0,65 г иммобилизованной глюкоамилазы. Активность: 3,9 r глюкозы высвобождается/ч.г ксерогеля.

Пример 10. 0,5 г Akrilex

С-100 ксерогеля (связывающая способ-, 5 14613 дистиллированной водой и лиофилизируют. Таким образом, получают 0,7 г иммобилизированной глюкоамилазы. Активность: высвобождается 1 35 г глюУ

5 козы/ч г ксерогеля.

Пример 7. 0.5 г Akrilex

С-100 ксерогеля (связывающая активность, т.е. СООН-содержание, 6,2 Мэкв/г, размер частиц 100-320мкм) Ip суспендируют в 50 мл 0,1 M буфера ацетата натрия (рН 7,0), после чего

f добавляют 1 г И-циклогексил-N -l2-(4-мо рфолин ил) — э тил !-к а рб оди имид-м етил-пара-толуолсульфоната на бане с ледяной водой при постоянном пере- . мешивании. Реакционную смесь переме-:. шивают в течение 10 мин, после чего добавляют 1,7 мл раствора глюкоамилазы (117,7 мг/мл) и рН реакционной 20 о смеси устанавливают 7,0. При 0-4 С полное время реакции составляет до

48 ч, за это время суспензию перемешивают дважды по б ч каждый раз, рй контролируют в начале каждого получа- 25, са, затем каждый час, а в случае необходимости доводят до нужного значения. После завершения реакции гель удаляют, фильтрованием и трижды промывают порциями по 50 мл 0,1 M буфе" 30 ра ацетата натрия (рН 7,0), трижды порциями по 50 мл 1,0 M буфера ацетата натрия, содержащего по 1,0 моль хлористого натрия (рН 7,0), и трижды порциями по 50 мл 0,1 М буфера ацетата натрия (рН 7,0). В конце гель промывают до полного удаления соли дистиллированной водой и лиофилизируют. Таким образом получают 0,6 г иммобилизованной глюкоамилазы. Ак- 40 тивность: высвобождается 3,0 г глюкозы/ч ° ã ксерогеля.

Пример 8. 0 5 г Akrilex

С-100 ксерогеля (связывающая ак- тивность, т.е. СООН-содержание, 45

6,2 Иэкв/г, размер частиц 100.320 мкм) суспендируют в 50 мл 1,1 M буфера ацетата натрия (рН 7,5), после чего добавляют 1 г N-циклогексил1

-N - j2- (4-морфолинил)-этила-карбоди50 имид-метил-пара-толуолсульфоната в на водяной бане со льдом при постоянном перемешивании. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин, после чего добавляют I 7 мл раствора глюкоЭ . 55 амилазы (117,7 мг/мл) и рН реакционной смеси устанавливают до 7,5. При

0-4 С время до завершения реакции составляет до 48 ч и за этот промежу146137 ность, т.е. СООН-содержание, 6, 2 Мэкв/г, размер частиц 100—

320 мкм) суспендируют в 40 мл 0,1 M буфера ацетата натрия (рН 8,5), после .5 чего добавляют 1 r N-циклогексил -N— — L2- (4-морфолинил) -э тил) -карбодиимид-метил-пара-толуолсульфоната в бане .. с ледяной водой при постоянном пере" мешивании. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин, после чего добавляют 1,7 мл раствора глюкоамилазы (117,7 мг/мл) и рН реакционной о смеси устанавливают g,5. При 0-4 С время до завершения реакции составляет до 48 ч., за это время суспензию перемешивают дважды по 6 ч каждый раз, рН контролируют в начале каждого получаса, а затем один раз в час, в случае необходимости доводят до нужного значения. После завершения реакции гель удаляют фильтрованием и трижды промывают порциями по 50мл

0,1 M буфера ацетата натрия (рН 8,5), трижды по 50 мл 0,1 М буфера ацетата 25 натрия, содержащего 1,0 моль хлористого натрия (рН 8,5), и трижды порциями по 50 мл 0,1 M буфера ацетата натрия (рН 8,5). В конце гель промывают до полного удаления соли 30 дистиллированной водой и лиофилизируюте Таким образом, получают 0,7 r иммобилизованной глюкоамилазы. Ак,тивность: высвобождается 2,2 г глюкозь17ч-r ксерогеля.

Пример ll. 0,5 r Akrilex

C-100 ксерогеля (связывающая способность, т.е, СООН-содержание, 6,2 Мэкв/г, размер частиц 100—

320 мкм) суспендируют в 50 мл 0,1 M буфера ацетата натрия (рН 9, 0), после чего добавляют 1 г N-циклогексил-М -Е2-(4-морфолинил)-этил)-карбоди/ имид-метил-пара-толуолсульфоната в водяной бане со льдом при постоянном перемешивании. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин, после чего добавляют 1,7 мл раствора глюкоамилазы (117,7 мг/мл) и рН реакционной смеси устанавливают 9,0. При

0-4 С время до завершения реакции составляет до. 48 ч, за этот промежуток суспенэию -дважды перемешивают по

6 ч каждый раз, рН контролируют в начале каждого полчаса затем К 55 дого часа, а в случае необходимости доводят до нужного значения. После завершения реакции гель удаляют фильтрованием и трижды промывают порци3 8 ями по 50 мл 0,1 М буфера ацетата натрия (рН 9, О), трижды порциями по

50 мл 1,0 M буфера ацетата натрия, содержащего по 1,0 моль хлористого натрия каждый (рН 9,0) и трижды пор" циями по 50 мл 0,1 M буфера ацетата натрия (рН 9, 0) . В конце гель про- мывают до полного удаления соли дистиллированной водой и лиофилизируют.

Таким образом, получают 0,8 г иммобилизованной глюкоамилазы.

Активность: высвобождается 1,25 г глюкозы/ч г ксерогеля, Пример 12. 0,5 г Akrilex

С-100 ксерогеля (связывающая способ ность, т.е. СООН-содержание, 6,2 Мэкв/г, размер частиц 100—

320 мкм) суспендируют в 50 мл 0,1 М буфера фосфата калия (рН 7,5), .после . чего добавляют О 5 г N-циклогексилf

У

-Б — r2- (4-морфо.линил)-этил)-карбодиимид-метил-пара-толуол-сульфоната в водяной бане со льдом при постоянном перемешивании. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин, после чего добавляют 2 мл раствора глюкоамилазы (125 мг/мл) и рН реакционной смеси устанавливают до 7, 5. При о

О"4 С время до завершения реакции составляет до 48 ч. Далее проводят обработку по предыдущему примеру.

Получают 0,65 r препарата с активностью 1 3 r глюкозы/чанг. !

Пример 13. Проводят иммобилизацию по примеру 12, используя

0,.1 М к-фосфат (рН 7,5). Получают

0,6 r иммобилизованной глюкоамилазы.

Активность: выделяется 2,08 г глюкозы/ч r ксерогеля.

Пример 14. 0,5 r Akrilex

-100 ксерогеля (связывающая активность, т.е. СООН-содержание, 6,2 Мэкв/г, размер частиц 100—

320 мкм); суспендируют в 50 мл 0,1 M буфера фосфата калия (рН 7,5), после ( чего добавляют 1 г N-циклогексил-N— — C.2- (4-морфолинил) -зтил) карбодиимид-метил-пара-толуолсульфоната в водяной бане со льдом при постоянном перемешивании. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин, после чего добавляют 1,7 мл раствора глюкоамилазы (117,7 мг/мл) и рН реакционной смеси устанавливают 7,5. При о

0-4 С полное время реакции составляет до 48 ч, за этот промежуток суспензию перемешивают дважды по 6 ч каждый раэ. В начале реакции рН контролируют каждые полчаса, затем каждый час, à в случае необходимости доводят до нужного значения. После завершения реакции гель выделяют фильтрованием и трижды промывают порциями по 50 мл 0,1 M буфера фосфата: калия (рН 7,5), трижды порциями по

50 мл 0,1 М буфера фосфата калия > содержащего по 1 моль хлористого нат- 1р рия каждый (рН 7,5), и трижды порциями по 50 мл 0,1 M буфера фосфата калия (рН 7,5). Полученный гель в конце промывают от соли дистиллированной водой и лиофилизируют. Таким 15 образом, получают 0,7 г иммобилизованной глюкоамилазы. Активность: выделяется 4,7 r глюкозы/ч ° г ксерогеля.

Приме р 15. 0 5 r Akrilez

С-200 ксерогеля (связывающая способ- 20 ность, т.е. СООН-содержание, 7,49 Мэкв/г, размер частиц 120—

320 мкм) суспендируют в 100 мл 0,1 М буфера фосфата калия (рН 7,5), после чего добавляют 1 25 г N-циклогексил- 25

Э

-N -! 2-(4-морфолинил) этил)-карбодиимид-метил-пара-толуолсульфоната в водяной бане со льдом при постоянном

i перемешивании. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин, после чего 30 добавляют 2,6 мл раствора глюкоамилазы (120 мг/мл) и рН реакционной смеси . устанавливают 7,5. При 0-4 С время реакции до ее завершения составляет

48 ч, за этот промежуток времени сус- ЗБ пензию перемешивают дважды по 6 ч каждый раз. В начале реакции рН контролируют каждые полчаса, позднее каждый час, а рН в случае необходимости доводят до нужного значения. 4р

После завершения реакции гель выделяют фильтрованием и трижды промывают порциями по 100 мл 0,1 M буфера фосфата калия (рН 7,5), трижды порцйями по 100 мл 0,1 M буфера фосфа- 45 та калия, содержащего по 1 моль хлористого натрия (рН 7,5), и трижды порциями по 100 мл 0,1 M буфера фос» фата калия (7,5 рН). В конце полученный гель промывают до полного уда- у» ления соли дистиллированной водой и лиофилизируют. Таким образом, получают 0,7 г иммобилизованной глюкоамилазы. Активность: выделяется

765 г глюкозы/ч г ксерогеля.

Пример 16. 0,5 r Akrilex

-300 ксерогеля (связывающая способ» .ность, т.е. СООН-содержание, 7,83 Мэкв/г, размер частиц 40—! 46! 373

120 мкм) суспендируют в !50 мл 0,1 M буфера фосфата калия (рН 7, 5), после чего добавляют 1,2 Г N-циклогексил(-N — L2-(4-морфолинил)-этил -карбодиычид-метил-пара-толуол-сульфоната в водяной бане со льдом при постоянном перемешивании. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин, после чего добавляют 2,55 мл раствора глю-коамилазы (120 мг/мл) и рН реакционной смеси устанавливают 7,5. При О4 С время завершения реакции составляет по 48 ч, причем во время этого промежутка суспензию перемешивают дважды по .6 ч каждый раз. В начале реакции рН контролируют каждые полчаса, позднее один раз в час, а в случае необходимости устанавливают до нужного значения. После заверше" ния реакции гель выделяют фильтрованием, трижды промывают порциями по

150 мл 0,1 М буфера фосфата калия (рН 7 5), трижды порциями но 150 мл

0,1 М. буфера фосфата калия, содержащего по 1 моль хлористого натрия (рН-7,5), и трижды порциями по 150 мл

0,1 M буфера фосфата калия (рН 7,5).

B конце гель промывают до полного удаления соли дистиллированной водой ,и лиофилизируют. Таким образом, полу. чают 0,7 г иммобилизованной глюкоамнлазы, Активность: высвобождается

8,4 r глюкозы/ч г ксерогеля.

Пример 17. Способ осуществляют по примеру 16, но используют

0,1 ч Akrilex С-100 ксерогеля с содержанием СООН-групп 0,47 Мэкв/г и

0,2 r карбодиимида. Выход; 0,25 г иммобилизованной глюкоамилазы с активностью 0,09 г.ч на 1 г ксерогеля.

Пример ы 18-22. Иммобилизацию проводят по примеру 17, но используют ксерогель с содержанием

СООН-групп 2,2 (пример 18); 3,8 (пример 19), 4,6 (пример 20), 5,0 (пример 21), 6,7 (пример 22) Иэкв/г.

Выход и активность по примерам равны: 0,12 r и 2,1 r глюкозы/ч ° r (пример 18), 0,13 г и 4,1 г глюкозы/g> r (пример 1 9), О, 19 и 7, 7 г глюкозы/ч.г (пример 20), 0,16 r, 9 г/ч..г (пример 21) и 0,23 г и 20,2 r глюкозы/ч г носителя (пример 22).

Пример 23. Проводят иммобилизацию глюкоамилазы по примеру 10, но при рН- 7,5, а также иммобилизацию глюкоамилазы в тех же условиях на биогеле СМ-100 (известным спосо14

Формула изо бре тення

Способ получения иммобилизованной глюкоамилазы путем ее ковалентного связывания с помощью водорастворимого карбодиимида с синтетическим ноI

Составитель Н. Рыбальский

Редактор И. Шулла Техред П. Олийнык Корректор В. Гирняк

Заказ 548/59 Тираж 500- Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r„ Ужгород, ул. Проектная, 4 бом). В обоих случаях связывается сходное количество глюкоамилазы по белку, но активность связанного фермента в процентах по предлагаемому и известному способам составляет

15 8 и 2,8 . Время полу нактивации (при 60 ) препарата по предлагаемому и известному способам равно соответственно 90 и 28 мин.

Таким образом, изобретение позволяет получать препараты иммобилизованной глюкоамилазы с более высокой активностью и стабильностью, 61373

12 сителем на основе акриламида, о тличающийся ° тем, что, с целью повышения активности и стабильности целевого продукта, в каче" стве носителя используют пористые гранулы из сополимера акриламида, N,N -метиленбисакриламида и N-(аминоэтил)акриламида с содержанием Ng групп 2,75 Мэкв/г или из сополимера

I акриламида, N,N -метиленбисакриламида и акриловой кислоты с содержанием СООН-групп 1 0 - 7,49 Иэкв/г, размер пор которых не позволяет про

1В никать в ниХ веществам с мол.м.

100.000-300.000 дальтон, а связывание проводят при рН 4,5 - 9,0, температуре О - 4 С в течение 24 - 72 полученный гель фильтруют и промыва" ют неоднократно буфером с рН 4,5

9,0 и дистиллированной водой.