Способ определения атерогенного нарушения липопротеинового спектра плазмы крови

 

Изобретение относится к области медицины, а именно клинико-биохимической лабораторной диагностике и кардиологии. Целью изобретения является повышение точности способа за счет повышения его чувствительности. У пациента натощак берут около 2 мл крови, центрифугированием отделяют плазму. В плазме определяют содержание общего холестерина и холестерина с -липопротеинов. Кроме того, проводят электрофоретическое разделение липопротеинов электрофорезом в полиакриламидном геле с последующий записью денситограммы и определением содержания пре- -липопротеинов , /ь-липопротеинов, медленно и быстро мигрирующих подфракций о -липопротеинов . После чего рассчитывают индекс атерогенности, и при его значении 2,8 и более диагностируют атерогенное нарушение липопротеинового спектра плазмы. При атеросклерозе дополнительно определяют содержание холестерина в медленно мигрирующей подфракций о(-липопротеинов и рассчитывают холестериновый индекс атерогенности . При его значении 19,5 и более диагностируют атеросклероз. Чувствительность способа увеличивается более чем в пять раз по сравнению с прототипом. I з.п. ф-лы. (Л 4 а СП

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСЪБЛИН (19) (И) (51)4 С 01 Ы 33 92

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

MPH ЖНТ СССР (21 ) 4087736/28.-14; 4091013/28-14 (22) 14.07.86 (46) 23.03.89. Бюл, М Il (71) Белорусский научно-исследовательский институт туберкулеза и Белорусский государствен)п,й институт усовершенствования врачей (72) M.Ñ. Грозовская, В. С. Камьппников и В.Г.Колб (53) 616.07(088.8) (56) Панин Л,Е. Соколов В.П. Психосоматические взаимоотношения при хроническом эмоциональном напряжении, Новосибирск: Наука. Сибирское отделение. 1981, с.118-119.

Маграчева Е.Я. Разделение липопротеинов сыворотки крови методом дискового электрофореза в полиакриламидном геле. — Вопросы медицинской химии. 1973, М 6, с. 652-655.

Колб В.Г. Камьппников В.С. Справочник по клинической химии. — Минск:

Беларусь, 1982, с.366. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АТЕРОГЕННОГО

НАРУШЕНИЯ ЛИПОПРОТЕИНОВОГО СПЕКТРА, ПЛАЗМЫ КРОВИ (57) Изобретение относится к области медицины, а именно клинико-биоI

Изобретение относится к медицине, а именно к клинико-биохимической лабораторной диагностике и кардиологии.

Цель изобретения — повьппение точности способа диагностики за счет повышения его чувствительности. химической лабораторной диагностике и кардиологии. Целью изобретения является повышение точности способа за счет повышения его чувствительности.

У пациента натощак берут около 2 мл крови, центрифугированием отделяют плазму. В плазме определяют содержание общего холестерина и холестерина (-липопротеинов. Кроме того, проводят электрофоретическое разделение липопротеинов электрофорезом в полиакриламидном геле с последующей записью денситограммы и определением содержания пре-в-липопротеинов, р-липопротеинов, медленно и быстро мигрирующих подфракций o(-липопротеинов. После чего рассчитывают индекс атерогенности, и при его значении 2,8 и более диагностируют атерогенное нарушение липопротеинового спектра плазмы. При атеросклерозе дополнительно определяют содержание холестерина в медленно мигрирующей подфракции Ы-липопротеинов и рассчитывают холестериновый индекс атерогенности. При его значении 19,5 и более диагностируют атеросклероз.

Чувствительность способа увеличивается более чем в пять раз по сравнению с прототипом. 1 з.п. ф-лы.

Способ осуществляют следующим образом.

После 12-часового голодания утром натощак в сухую чистую пробирку, содержащую кристаллический ЭДТА в качестве антикоагулянта, из вены локтевого сгиба исследуемого берут око1467516 ло 2 мл крови. В плазме определяют содержание холестерина липопротеинов высокой плотности (ЫХС) и общего холестерина известнымн -методами, Производят также электрофоретическое фракционирование окрашенной на липиды плазмы способом диск-электрофореза липопротеинав в многослойном полиакриламидном геле (Д). После выдерживания в буферном растворе в течение одних суток заключенных в стекJIHHHrre Tp e H CTOJIGHKOB rIOIIHRKpHJI амидного геля производят денситометрическую запись диск-электрофореграмм 15 липопротеинов (ЛП), для чего может быть использован денситометр ДМ-1.

Денситограмма диск-электрофореграммы имеет следующий вид (от катода к аноду). 1 — альбумины,связан-) 20 ные с неэтерифицированными.жирными кислотами (НЭЖК); 2 — быстро мигрируrorr1àÿ подфракция 4 -липопротеинов, 3 медленно мигрирующая подфракция у-липопротеинов; 4 — p -липопротеины; 5— пре-р-липопротеины, 6 — хиломикроны.

Альбумин-НЭЖК и хиломикроны не имеют непосредственного отношения к формированию атеросклеротических изменений в организме, поэтому их в расчет ЗО не принимают. Для количественной оценки диагностически важных пиков замеряют их высоту и ширину на уровне середины высоты. Полученные значения умножают друг на друга и на постоянньй коэффициент 1,064. Сумму площадей пиков складывают и принимают за 100Х. Затем определяют процентную долю каждого пика. Дополнительно складывают площадь пиков бы- ф) стра и медленно мигрирующей подфракции 4-липопротеинов и принимают их сумму за 100Х, затем рассчитывают их процентную долю и соотношение между быстро и медленно мигрирующими подФракциями. После чего производят расчет индекса атевогенности по фор-. муле (а+Ъ).с

ИА = — -—

d где ИА — индекс атербгенности;

1 а — процентное содержание преР -липопротеинов;

Ь вЂ” процентное содержание / -липопротеинов; с — соотношение между быстра и медленно мигрирующими подфракциями 1-липопротеинов;

d — процентное содержание медленно мигрирующей подфракции липопротеинов. г

При значении ИА 2,8 и более диаг° ностируют атерогенное нарушение липопротеинового спектра плазмы крови.

Холестериновый индекс атерогенности находят следующим образам.Сумму двух пиков 1-липопротеинов (быстро и медленно мигрирующей подфракции) принимают за содержание d -ÕÑ в ммоль/л. Находят соотношение этих подфракций и содержание холестерина в них. Далее рассчитывают холестериновый индекс атерогенности по формуле

ХС вЂ” (Ы-ХС) с — XCN где ХИА — холестериновый. индекс атерогенности;

ХС вЂ” содержание общего холестерина плазмы крови, 4 -ХС вЂ” содержание халестерина 4лнпопротеинов; с -ХС вЂ” содержание холестерина медленно мигрирующей подфракции d-липопротеинов.

При значении ХИА 19,5 и более диагностируют атеросклероз.

Пример 1, Больная Ш., 43 лет с диагнозом: остаточные изменения после перенесенного туберкулеза вну-. тригрудных лимфоузлов. Сегментарный пневмосклероз язычкового сегмента слева.

Лабораторно больная исследована до начала лечения. Из ординарных унифицированных тестов для суждения об атерагенных нарушениях в липопротеиновом спектре плазмы крови были использованы тесты на содержание d-XC, общего холестерина плазмы (ХС) и холестериновый коэффициент атерогенности лип спектра

ХС-(с(-ХС) с(-ХС

Содержание с(-ХС составило 1,36 ммоль/л при норме 1,235-1,435 со значениями

Х+Sxl 335+0,051 ммоль/л. Содержание

ХС составило 5 10 ммоль/л при норме

3,909-4,382 со значениями X+Sx4,145 +

"-0,121 ммоль/л. Холестериновый коэфФициент атерогенности липопротеинового спектра 2,75 при норме 1,986—

2.406 со значениями Х»Б 7 х 22,,119966+ 00,107.

5 14675

16 6 ние ХС составило 2,0. 3 ммоль/л (при норме 3,908-4,382 со значениями

Х < S У 4,15+0,121 ммоль/л). Холестериновый коэффициент атерогенности липопротеинового спектра 2,865 (при норме 1,986 2,406 со значениями

Х+ S 72,196 -О,! "7).

Определение атерогенности липопротеинового спектра по известному способу дает показатель 0,62, который практически не отличается от показателя нормы (0,645-0,745 со значениями Х + S х 0,695+ 0,026) .

Определение атерогенности липопротеинового спектра по предлагаемому способу дает следующий результат:

ИА=2,8 при норме 1 240-1,816 со значениями Х + S x 1, 528+ О, 147, Полученный показатель в 1,83 раза превосходит средний показатель нормы, отличаясь на I,О ед.от верхней границы нормы.

Оценивая полученные данные, нельзя не отметить, что если традиционный показатель холестеринового коэфХС-(e(-ХС) фициента атерогенности †††-- -

d -ХС отражающий отношение содержания атерогенных липопротеинов к таковому атиатерогенных ЛП, у данного больного увеличен в 1,3 раза (отличаясь на 0,46 ед. от верхней границы нормы), то показатель, определенный по предлагаемому способу, в 1,83 раза превосходит средний показатель нормы, отличаясь на 1,0 ед. от верхней границы нормы. Следовательно, предлагаемый способ правильно отражает содержание биохимических изменений при сопустствующем атеросклерозе, более чувствителен и точен, чем известный, связанный с определением холестеринового коэффициента атерогенности липопротеинового спектра плазмы.

Известный способ оценки атерогенных нарушений в липопротеиновом спектре плазмы в данном случае оказывается неэффективным.

Пример 3, Больная Е., 70 лет с диагнозом основным: инфильтративный туберкулез легких в фазе распада, БК+, острая // долевая правосторонняя пневмония, и сопутствующим: атеросклероз аорты, коронарных и мозговых сосудов, атеросклеротический кардиосклероз, ЛСН 1-П ст.

Определение атерогенности липопротеинового спектра по известному способу дает показатель 0,59, который весьма мало отличается от показателя нормы (0,645-0,745 со значениями

Х + S У 0,695+0, 026), обнаруживая некоторое превалирование содержания антиатерогенных липопротеинов — ЛПВП у больной с легочной патологией, 10

Определение атерогенности липопротеинового спектра по предлагаемому способу дает следующий результат:ИА=

=1,055 (при норме 1,240-1,816 со значениями Х + S W 1,528+0,147). 15

Оценивая полученные данные, нельзя не обратить внимание на то, что найденный показатель далеко отстоит от критериев обнаружения атеросклероза, который не выявился и при тщательном клиническом исследовании больной, если показатель атерогенности липопротеинового спектра, найденный известным способом, в 1,77 раза меньше среднего показателя нормы, то показатель атерогенности липопротеинового спектра, определенный предлагаемым способом, в 1,448 раза меньше среднего показателя нормы, предлагаемый способ более правильно отражает 30 содержание патохимических изменений

/ в организме больной, чем холестерииавый КА, поскольку при тщательном клинико-экспериментальном исследовании у больной не был выявлен атеросклероз, легочная же патология обычно обусловливает суммарной фракции

a(-липопротеинов.

Пример 2. Больной Р, 57 лет с диагнозом основным: цирротический 4g туберкулез в/дали левого легкого с полостями БК- и сопутствующим: ИБС: стенокардия покоя. Атеросклероз аорты, коронарных и мозговых сосудов, ЛСН 1-11 стадии, 45

Лабораторно фольной исследован до начала лечения. Иэ ординарных унифицированных тестов для суждения об атерогенных нарушениях в липоцротеи" новом спектре плазмы крови были ис- 50 пользованы тесты на содержание e(-ÕÑ, общего холестерина плазмы (ХС) и холестерииовый коэффициент атерогенности (КА) липопротеиновога спектра

ХС-Q -XC) 55

4 -ХС . Содержание et-ХС составило О, 526 ммоль/и (при норме 1,235-1,435 со значениями

Х 1 $ F 1,33520,051 ммоль/л), содержа1467516

Из ординарных унифицированных тес" тов для суждения об атерогенных нарушениях в липопротеиновом спектре плазмы крови были использованы тесты на содержание d-XC, общего холестерина плазмы (ХС) и холестериновый коэффициент атерогенности липопротеинового спектра ХС-g4-XC)

Содержание 1-ХС составило

0,800 ммоль/л (при норме 1,235-1,435 со значениями Х â€” S к 1,335+0,551 ммоль)

/л), содержание ХС составило

3,80 ммоль/л (при норме 3,908-4,382 со значениями Х + Як4,145+0,121 ммоль/.

Холестериновый коэффициент атерогенности липопротеинового спектра

3,75. (при норме 1,986-2,406 со значечиями X+ Я 2,196+ 0,107).

Определение атерогенности липопротеинового спектра по известному способу дает показатель 0,59, ко горый весьма мало отличается от показателя нормы (0,645-0,745 со значениями X +

+S x 0,695+0,026), обнаруживая некото ; рое превалирование содержания антиатерогенных липопротеинов — ЛПВП у больного с сочетанной патологией.

Определение атерогенности липопротеинового спектра по предлагаемому способу дает следующий результат:ИА=40,44 (при норме 1,240-1,816 со значениями Х+Я х1,528+0,147).

Оценивая полученные данные, обращают внимание на следующее: показатель холестеринового коэффициента атерогенности в 1,7 раза (3,75:2,196) превышает средний показатель нормы, подтверждая .атерогенные изменения в организме; найденный предлагаемым способом показатель в 25,5 раза (40,44: 1,528) превышает средний пока- затель нормы, что подтверждает его гораздо более высокую чувствительность по сравнению с предыдущим (традиционным).

Известный способ оценки атерогенных нарушений в липопротеиновом спектре плазмы у данного больного ока50 зался неэффективным.

Пример 4. Больной 67 лет, поступил с диагнозом: ИБС, стенокардия покоя и напряжения. Атерослеротический кардиосклероз. Атероскле55 роз аорты, венечных артерий, Н .

При биохимическом исследовании плазмы крови общепринятыми методами оказалось, что содержание общего холестерина составляет 5,224 ммоль/л, ХС-ЛПВП 0,864 ммоль/л. Показатель холестеринового коэффициента атерогенности липопротеинового спектра.

ХС-((-ХС равен 5,046 (при норме

1,8-3,3 со значениями Х+ S к 2,196 + .+0,107) .

Дополнительно было проведено дискэлектрофоретическое исследование спектра липопротеинов в столбиках полиакриламидного геля.

Затем определяют холестериновый

XC-Я-ХС1 индекс атерогенностиХИА= †-"" †- - )

Ы-ХС равный 34,88 (при норме 3, 253-5, 520 со значениями X + S х 4,227+0, 107), Поскольку полученный показатель оказался больше 19,5, у больного диагностируют атерослероз.

Пример 5. Больной 70 лет поступил с диагнозом: ИБС, стенокар-. дия напряжения (отеросклеротический) и постинфарктный кардиосклероз, инфаркт, атеросклероз венечных артерий, аорты, При биохимическом исследовании плазмы крови общепринятыми методами оказалось, что содержание общего холестерина составляет 5,983 ммоль/л, d-ÕÑ, 0,7481 ммоль/л. Показатель холестеринового коэффициента атерогенности липопротеинового спектра плазмы, найденный известным способом и определенный по формуле

XC Я ХС (с(-ХС) равен 6,997 (при норме 1,8-3,3 со значениями Х" Я х 2, 196+ О, 107) .

Дополнительно было проведено дискэлектрофоретическое исследование спектра липопротеинов в столбиках полиакриламидного геля.

Далее вычисляют холестериновый ин. ХС-((-ХС) декс атерогенности — - - — - - = (-ХС

19,533 (19,5) .

Поскольку полученный показатель равен 19 5 у данного больного диагностируют атеросклероз.

Таким образом, предлагаемый способ более чем в 5 раз чувствительнее известного способа.

Формула изобретения

1. Способ определения атерогенного нарушения липопротеинового спект Составитель С.федоров

Техред И.Верес Корректор M.Макснмишинец

Редактор Н.Тупица

Зак аз 1192/43 Тираж 788 Подписное

ВИИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г . Ужгород, ул . Гагарина, 101

9 1467 ра плазмы крови путем электрофорети- . ческого разделения липопротеинов, определения процентного содержания пре-р-липопротеинов, р -липопротеинов и Ы -липопротеинов с последующим расчетом соотношения суммы пре-р-липопротеинов и / -липопротеинов с с(-липопротеинами, отличающийся тем, что, с целью повьппения точности )p способа за счет повьппения его чувствительности, дополнительно разделяют е-липопротеины на быстро и медленно мигрирующие подфракции, определяют их процентное содержание с последующим расчетом индекса атерогенности по омле

Ф р (а+Ь) ° с

ИА =

В где ИА — индекс атерогенности, а — 2p процентное содержание пре-р-липопротеинов, Ь вЂ” процентное содержание

/З-липопротеинов, с — соотношение между быстро и медленно мигрирующими подфракциями о -липопротеинов, d — 25 процентное содержание медленно миг516 i () рирующей подфракпии а -липопротенлон, и при значении индекса 2,8 и более определяют атерогенное нарушение липопротеинового спектра плазмы крови.

2. Способ по п.!, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения точности определения прн атеросклерозе, дополнительно определяют уровень общего холестерина плазмы крови, холестерина a -липопротеинов и холестерина медленно мигрирующей подфракции 0-липопротеинов с последующим расчетом холестеринового индекса атерогенности по формуле

ХС вЂ” Dt -ХС

ХИА = — — — — — — —, где ХИА — холе0(-XC стериновый индекс атерогенности, ХС— содержание общего холестерина плазмы крови, 4-ХС вЂ” содержание холестерина Ы-липопротеинов и Ы -ХС - содержание холестерина медленно мигрирующей подфракции /-липопротеинов, и при значении индекса 19 5 и более определяют атерогенное нарушение при атеросклерозе.