Способ оценки качества спермы птиц

 

Изобретение относится к области биологии размножения животных и предназначено для лабораторных и клинических исследований в сельском хозяйстве, медицине и ветеринарии.Целью изобретения является повышение точности оценки качества спермы птиц. Способ заключается в окрашивании спермы в среде, содержащей, мас.%:родамин С 0,05-0,20 и малахитовый зеленый 0,15-0,35, анализе мазка под микроскопом и оценке качества спермы по морфологическому состоянию спермиев. Способ позволяет повысить точность оценки за счет дифференциального окрашивания органелл спермиев:акросомы, головки, хвоста. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1470293 А 1 (5D4 А61 D 702

ОГ1ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOIVIV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4297615/30-15 (22) 10.07. 87 (46) 07.04.89. Бюл. № 13 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) Е. М. Белецкий, И. К. Реут и П. Ф. Сурай (53) 636.082.453 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 345919, кл. А 61 D 7/02, 1971.

Изобретение относится к области биологии размножения животных и предназначено для лабораторных клинических исследований в сельском хозяйстве, медицине, ветеринарии, а также может быть использовано в криобиологии.

Целью изобретения является повышение точности оценки качества спермы птиц.

Пример. В питательную среду (фосфатный буфер, 0,05 M с рН 6,6 — 7,2) вводят родамин С и малахитовый зеленый в количествах 1% родамина С в 1-й раствор и 1% малахитового зеленого во 2-й раствор соответственно. Это два основных маточных раствора, которые могут сохраняться продолжительное время (в нашем опыте хранились более 6 мес). Непосредственно перед проведением исследований набирают 0,2 мл маточного раствора родамина С и вносят в чистый флакон, сюда же добавляют 0,3 мл маточного раствора малахитового зеленого и 0,5 мл фосфатного буфера.

На предварительно обезжиренное предметное стекло наносят каплю изучаемого (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА СГ1ЕРMbI ПТИЦ (57) Изобретение относится к области биологии размножения животных и предназначено для лабораторных и клинических исследований в сельском хозяйстве, медицине и ветеринарии. Целью изобретения является повышение точности оценки качества спермы птиц. Способ заключается в окрашивании.спермы в среде, содержащей, мас.%: родамин С 0,05 — 0,20 и малахитовый зеленый 0,15 — 0,35, анализе мазка под микроскопом и оценке качества спермы по морфологическому состоянию спермиев. Способ позволяет повысить точность оценки за счет дифференциального окрашивания органелл спермиев :акросомы, головки, хвоста. 2 табл. образца спермы, добавляют каплю рабочего раствора красителей, аккуратно перемешивают, выдерживают 10 — 15 с и делают мазок.

Препарат сушат в потоке теплого (40 С) воздуха. Он может храниться в таком состоянии до микроскопирования несколько недель, а при необходимости долговременного хранения образец можно заключить в полистирол и хранить в течение нескольких лет.

Препарат рассматривают в микроскопе под иммерсией при увеличении 90)<15 в проходящем свете (1250 раз). В поле зрения учитывают число - (процент) нормальных спермиев без нарушений головок, хвостов и акросом, а также процент спермиев с различными нарушениями морфологии. При этом нормальные спермии имеют зеленоватосинюю головку и малиново-красные акросому и хвост.

При различного рода нарушениях отчетливо можно диагностировать отсутствие акросомы, ее излом, разбухшие головки. бесформенные головки, гигантские и карликовые,1470293

3 формы спермиев, отсутствие хвоста, надлом хвоста, изгиб спермиев в шейке.

Таким образом, окраска спермиев по предлагаемому способу дает возможность диагностировать различные морфологические аномалии спермиев, что значительно повышает точность прогноза оплодотворяющей способности половых клеток. Этот способ удобно использовать при разработке синтетических сред для хранения и криоконсервации спермы, при уточнении режимов эксплуатации самцов, при изучении токсичности различных разбавителей для спермы птиц и др.

Оптимальное соотношение в смеси родамина С и малахитового зеленого определяли следующим образом: в питательную среду вводили различные количества красителей, проводили окраску спермы и оценку ее под микроскопом. По1у !pпные результаты представлены в гибл. 1, Данные, представленные в табл. 1, свидетельствуют о том, что родамин С и малахитовый зеленый можно использовать в пределах 0,05 — 0,20Я и 0,15 — 0,35Я соответственно. При этом оптимальная концентрация родамина С в данной смеси составляет 0,15Я, а малахитового зеленого 0,25®.

Недостаточная концентрация красителей не обеспечивает четкой дифференциации структур спермиев, а избыток того или иного красителя приводит к появлению доминирующей окраски того же цвета, т. е. приводит к потере дифференциации органелл спермиев.

Для сравнительного испытания предлагаемого способа с известным на индейкоферме опытного хозяйства УНИИП «Борки» Харьковской области было сформировано 3 группы индюков по 5 голов, аналогов по живой массе и спермопродукции, с одинаковым процентом окрашенных спермиев по известному методу, находящемуся в пределах 10 — 13оо, но различающихся по количеству поврежденных акросом, определенному по предлагаемому способу.

В первой группе были индюки с минимальным количеством поврежденных акросом 1 — ЗЯ (в среднем 2,25Я).

Во второй группе индюков процент поврежденных акросом находился в пределах

4 — 6о (в среднем 5 62оo).

В третьей группе были индюки, в сперме которых количество поврежденных акросом было наибольшим — 10 — 13Я (в среднем

11,43Я).

Результаты испытаний прсдсгавлены в табл. 2.

При сравнительном испытании способов сперму от самцов получали асканийским спо4 собом и для осеменения индеек использовали объединенный эякулят от 5 самцов из каждой группы. Индеек осеменяли цельной спермой, доза осеменения 0,015 мл, интервал искусственного осеменения — один раз в

7 дней.

Полученные результаты (табл. 2) свидетельствуют о том, что предлагаемый способ позволяет существенно повысить точность оценки качества спермы птиц. Так, во всех

10 трех группах индюков количество окрашенных спермиев по известному методу находилось на одном уровне (10 — 13о",), íî оплодотворяющая способность таких эякулятов значительно отличалась и прямым образом была связана с процентом поврежденных акросом, определенных предлагаемым способом.

Таким образом, предлагаемый способ дает возможность отобрать и выбраковать из стада индюков с повышенным процентом поврежденных акросом спермиев, тем самым noBblcHTb оплодотворяющую способность полиспермных эякулятов оставшихся в стаде самцов.

Окрашивание спермиев по предлагаемому способу позволяет четко дифференцировать все органеллы спермиев. Так, акросомы окрашиваются в малиново-красный цвет, головки, следующие за ними, — в зеленовато-синий цвет, а хвосты спермиев — в малиново-красный цвет, Время, затрачиваемое на приготовление одного мазка, составляет

45 — 55 с. Окраска препарата стабильна и не изменяется при их хранении в ечение

1 — 2 мес, а при заключении препарата в полистирол — более года. Кроме того, экспериментально было установлено, что аналогичным способом окрашиваются спермии петухов, гусаков и селезней, т. е. способ применим для всех 4-х основных видов самцов птиц.

Формула изобретения

Способ оценки качества спермы -,;тиц, включающий смешивание спермы со средой, содержащей красители, изготовление мазка, анализ окрашенных спермиев под микроскопом и оценку качества спермы по морфологическому состоянию спермиев, отлинан>и.„ийся тем, что, с целью повышения точности оценки, в качестве красителей используют смесь родамина С и малахитового зеленого при следующем соотношении ингредиентов, мас. о :

Рода мин С 0,05 — 0,20

Малахитовый зеленый 0,15 — 0,35

Среда Остальное.

1470293

Таблица

Окраска спермиев

Концентрация родамина С, i!

0,201

0,25

0 30 0 35 0 40

7 8 9

005 0,10 0,15

2 3 4

Таблица 2

Группа

Окрашивание спермиев по известному способу, X

Проинкубировано яиц, шт, Оплодотворяющая способность спермиев, X

10-13

10-13

10-13

2,25

5,62

11,43

62

56

1

87, l

83,3

75,0

0,025

0 050

0,075

0,10

0,15

0,20

0,25

0,30

0,35

0,40

Концентрация малахитового зеленого, 7.

Окрашивание спермиев по предлагаемому способу; отсутствие или аномалия акросом 7.

Составитель И. Марченко

Редактор Л. Гратилло Техред И. Верес Корректор Л. Пилипенко

Заказ 1375/5 Тираж 644 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР

1 13035, Москва, )К вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат «Патент», г. Ужгород, ул. Гагарина, 101