Штамм бактерий viвriо наrvеyi - продуцент индуцибельной l- орнитин-декарбоксилазы

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения штамма, обладающего более высокой индуцибельной L - орнитиндекарбоксилазной активностью. Цель изобретения - получение нового штамма-продуцента L -орнитиндекарбоксилазы (ОДК), синтезирующего ОДК с наиболее высокой активностью. Штамм VIBRIO HARVEYI ВКМВ-1626D (1175) выделен из моллюска NERITA ALBICILLA в тропическом районе Тихого Океана. Активность индуцибельной L-орнитиндекарбоксилазы: 4,5 ед/мг сухой бактериальной биомассы и 14,7 ед/мг белка. Штамм не патогенный, сохраняет активность при хранении в лиофилизированном состоянии и под вазелиновым маслом. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

PECflYS JIHH (19) SU(II) А1

fsD4 C12N988 2

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

K А BTOPCKOMY СВИ4ЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

flO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4308606/31-13 (22) 27.07.87 (46) 15 ° 07.89. Бюл. N- 26 (71) Вильнюсский государственный университет им.В.Капсукаса и Институт биофизики СО АН СССР (72) А.В.Руэгене, А.Б.Рагавичюс, С-В.Й.Берецкене, А.М.Фиш и Г.А.Примакова (53) 577.18 (088 ° 8) (56) Жеребило О.Е. Некоторые особенности биосинтеэа орнитиндекарбоксилазы Erwinia carotovora 438.

Микробиол, журнал, 1980, сс.42,3,275.

Закревский В.И, Некоторые свойства бактериальной орнитиндекарбоксилазы — Вопросы биохимии и физиологии микроорганизмов. Иэд-во Саратовского ун-та, 1975, вып.3, 105.

Applebaum D., Sabo D ° L., Fischer Е.Н. and Morris D.R. Biodegradative 0rnithine Decorboxylaze of

Escherichia coli Purification, Properties, and Pyridoxal 5, Phosphate Bindin8. Biochemistry, 1975, сс.14, 16, 3675.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению нового штамма, продуцента индуцибельной

L-орнитиндекарбоксилазы.

Цель изобретения — получение нового штамма — продуцента индуцибельной L-орнитиндекарбоксилаэы (ОДК), синтезирующего ОДК с наиболее высокой активностью.

Штамм Vibrio harveyi ВКМВ-1626Д (1175) выделен из моллюска Nerita

2 (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ VIBRIO HARVEYI

ПРОДУЦЕНТ ИНДУЦИБЕЛЬНОЙ Ь-ОРНИТИНДЕКАРБОКСИЛАЗЫ (57) Изобретение относится к биотехнологии и касается получения штамма, обладающего более высокой индуцибельной L-орнитиндекарбоксилаэной активностью.Цель изобретения — получение нового штамма-продуцента Ь-орнитиндекарбоксилазы (ОДК), синтезирующего

ОДК с наиболее высокой активностью.

Штамм Vibrio harveyi ВКМВ-1626 D (1175) выделен из моллюска Nerita

albicilla в тропическом районе Тихого океана. Активность индуцибельной

L-орнитиндекарбоксилазы; 4,5 ед/мг сухой бактериальной биомассы и

14,7 ед/мг белка. Штамм не патогенный, сохраняет активность при хранении в лиофилизированном состоянии и под вазелиновым маслом. 1 табл.

albicilla в тропическом районе

Тихого океана и имеет следующие характеристики.

Морфологические признаки: правильные или слегка изогнутые палочки размером 0,5-0,8 х 1,4-2,6 мкм.

Капсул, эндоспор или микроцист не образуют. Грамотрицательны. В жидкой среде подвижны за счет наличия 1 очехленного полярного жгутика.

14936

Культуральные свойства: на агариэованной среде Егоровой и на питателен. ном агаре из гидролизата кильки с

Э -ным Na01 после 24 ч роста при о, 30 С образуют колонии диаметром

1-2 мм. Колонии желтовато-коричневые, прозрачные, гладкие, блестящие с правильными краями. На агариэованном мясопептонном бульоне с З .-ным NaC1 10 колонии круглые, прозрачные, гладкие, блестящие с ровными краями. Диаметр колонии односуточной культуры — 23 мм.

Физиологические свойства; штамм 15 является факультативным анаэробом.

Оптимальная температура роста 30—

35 С. Культура не растет при 4 С и

45 С. Восстанавливает нитраты до нитритов ° Реакция на оксидазу поло- 20 житепьная. Выделяет хитиназу, амилаэу, липазу, желатиназу. Не способен накапливать поли -оксибутират.

Усваивает глюкозу, фруктоэу, галактоэу, мальтозу, сахарозу, маннит, 25 глицерин. Усваивает пептон, дрожжевой экстракт, а также соли аммония.

Не нуждается в органич ских факторах роста. Содержит 46 мол. ГЦ-пар в ДНК. Хемоорганотроф. Для роста и 30 лю:-инесценции необходимо присутствие в среде ионоч натрия. Оптимальная концентрация хлористого натрия 2-3 ..

Признаки: тамма устойчивы. Штамм не патогенен, Культура хорошо сохраняется на агаризованной средс Егоровой под азелиновым маслом в течение. 2-3 лет (большие сроки для данного штамма пe проверялись).

il р и м е р„ pчя получения биомассы Vibrio harveyi 1175 штамм выращивъзт лабо1аторных колбах емкостью

500 мл, в которыс. наливают 400 мл сред Егоровой следующего сос "aaa, 45 г1„-.. Насt 30; КН. РО 1; N85(. Н,О

О, 5; пептон 10; рь бная вытяжка

69 4

500 мл; водопроводная вода до

1000 мл; L-орнитин НС1 8; рН среды

6+0,2. Инокулят — культура 17-часового возраста в той же среде при о, 30 С в термостате. Засевают среду

5/-ного инокулята °

После 5 ч роста биомассу отделяют центрифугированием при 4000 об/мин, промывают 3/-ным раствором хлористого натрия и заливают 1/15 М фосфатного буфера рН 5,0, охлажденного до о

4 С. В экстракте определяют Ь-орнитиндекарбоксилаэную активность манометрическим методом на аппарате

Варбурга.

3а единицу ОДК активности принимают такое количество фермента, которое при 37 С и рН реакционной смеси 5,0 через 1 мин от субстрата (0,05 м) отщепляет 1 мкмоль СО °

В таблице приведены данные об

Ь-орнитиндекарбоксилаэной активности штамма Vibrio harveyi 1175 и известного ЕзсЬегiohia coli UW 44.

Как видно из таблицы, предлагаемый штамм Vibrio harveyi 1175 отличается от известного в 2,5 раза большей активностью в 1 мл среды ц 1,5 раза большей специфической активностью.

Кроме того, время культивирования сокращается в 2 ч, а температура выращивания снижается íà 7 . Данное преимущество может существенно уменьшить себестоимость ферментного препарата L-орнитиндекарбоксилазы при его изготовлении.Ферментный препарат

L-орнитиндекарбоксилазы может быть использован и при определении Ь-орнитина, а иммобилизированный — для получения путресцина из L-орнитина. ормулаиз обретения

Штамм бактерий Vibrio harveyi.

ВКМ В-1626D — продуцечт индуцибельной Ь-срнитиндекарбоксилазы.

1493669

Рост и L-орнитинлекарбоксилаэная активность штаммов Escherichia coli UW 44 и Vibrio harveyi 1175

ОДК активность

11родолжи тельност

Штамм

Температура роста, С оличесто белка, мг/мл на 1 на 1 мг сухих клеток, культиви культуральной рования, ч д/г жид кости, ед/мл

9,3 0,1

0,93

4 5+О 2 2 5 14 7 0 17

Редактор М„Товтин

Закаэ 4066/28 Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по иэобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Проиэводс"..вень з-иэдате."вский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

Е.coli UW 44 (АТСС 27549)

V.harveyi 1175 (ВКИ В-!626 D) на 1мг белка (специфич. активность) 1

Составитель И.Привалова

Техред А.Кравчук Корректор М.демчик