Патент ссср 159260

 

Класс А 61k; 301т, 14

М 159260

СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ.

Подписная группа Л3 189

3. И. Галунина и Л. М. Шефтель

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ AKTHBHOCTH

ДИФТЕРИЙНОГО ТОКСИНА ШИКА

Заявлено 20 апреля 1962 г. ",а ¹ 77-1766 31-16 в Комитет по делам нзооретений и открытий ири Совете Чинистров СССР

Оттубликовано в «Бюллетене изобретенчй и говарны. . знаков» ¹ 24 .,а 1063 г.

Известные способы- определения активности дифтсригию о токсина по его цитотоксическому действию на 1л IbTK pA к,!сток недостаточно точны и требуют весьма длительного времени для осуществления.

По описываемому способу, с целью ускорения и повышения точности исследования, исследуемый токсин вносят в культуру фибробластов из эмбриональной ткани человека.

Культуру готовят по общепринятой методике, применяемой при вирусологических исследования. .

Эмбриональную ткань человека измельчают, промывают пасгвором

Хснкса с антибиотиками и оставляют на один день при смпературс

4 — 8еС в питательной среде с антибиотиками. На следующий лень ткань промывают 2 раза фосфатным буферным раствором, а затем подвергают панкреатизации прн комнатной температуре 0,2з,-ныч раствором панкреатина в фосфатном буферном растворе. Отделивп.неся клетки через каждые 10 мин удаляют в центрифужные пробирки и центрифугируют при 500 об/,иин в течение 20,вин. Осадок суспендиру от в питательной среде из расчета 600 000 клеток на 1 .и. . Затем в пробирку вносят 1 лл клеточной взвеси в питательной среде, состоящей из 85в/, раствора Хенкса, 10в/в бычьей сыворотки и 5% аминопептида-2. На каждый миллиметр среды вводят по 100 единиц пеницнлл.ша. Клетки культивируют в стационарном положении при 37"С. Однослойный пласт клеток получают на второй или третий день выращивания.

После заражения культуры фибробластов токсины,i . и а 1л,.фтерийпым токсином) циготоксический эффект прояв. яется сначала в округлении клеток, затем в разрушении клеточного пласта и. наконец, в по.шой дегенерации ткани и отделении ее от стенки пробирки. Срав¹ 159260 нительную активность различных партий токсинов определяют по интенсивности дегенерации за определенный промежуток времени. При достаточной активности токсина результаты опыта можно наблюдать уже через 3 час после начала его проведения. В то же время r ри определении активности токсина Шика, например, HB морских свинках некроз кожи наблюдается лишь через 48 час после внутрикожного введения. При значительной чувствительности предлагаемый способ определения активности дифтерийного токсина, характеризуется также стандартностью, поскольку исключается такой нежелательный фактор, как индивидуальная чувствительность животных. Применение большого количества пробирок с культурой ткани для каждой дозы испытуемого токсина позволяет с наибольшей статистической достоверностью оценивать активность различных серий токсина.

Предлагаемый способ весьма прост, экономичен и обладает большой чувствительностью, что позволяет с успехом использовать его в лабораториях, в которых изучаются свойства диф1ернй1ного токсин».

Предмет изобретения

Способ определения активности дифтерийного токсина Шика по его цитотоксическому действию на культуру клеток, о т л и ч а ю щ и йся тем, что, с целью ускорения и повышения точности исследования, вносят исследуемый токсин в культуру фибробластов пз эмбриональной ткани человека.

Редактор Л. И. Колыбина Техред А. А, Камышникова Корректор P. T. Келембег

Г1одп. к печ. 17/XII — 63 г. Формат бум, 70) 108 /i Объем 0,18 изд. л.

Заказ 3048/10 Тираж 400 Цена 4 коп.

ЦНИИПИ Государственного комитета по делам изобретений и открытий СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4.

Типография, пр. Сапунова, 2.