Штамм гриба @ продуцент @ -галактозидазы
Изобретение относится к биотехнологии, частности к получению нового продуцента фермента β - галактозидазы. Цель изобретения - выявление штаммапродуцента β - галактозидазы, обеспечивающего ускорение процесса получения фермента и увеличение биосинтеза фермента. Изобретение позволяет получить β - галактозидазу в количестве 55-60 ед/мл культуральной жидкости. Из глубинной культуры предлагаемого продуцента выделенный ферментный препарат может быть применен в молочной и хлебопекарной промышленностях для улучшения качества готовой продукции, а также в медицине при непереносимости молочного сахара-лактозы.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК ag>SUun 150
А1 ш 4 С 12 N 1/14, 9/38
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABT0PGH0MY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ .И ОТКРЫТИЯМ
ОРИ ГННТ СССР
1 .(21) 4326926/31-13 (22) 12. 11.87 (46) 23.09.89. Бюл. У 35 (71) Институт биохимии растений
АН ГССР и Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К.Заболотного (72) Г.И.Квеситадзе, N.M.Ãîìàðòåëè, А.К.Церетели, В.И.Билай, А.Т.цкольный и Т.И.Билай . (53) 663. 15 (088.8),(56) Авторское свидетельство СССР
В 1065476, кл. С 12 N 9/38, 1985.
Авторское свидетельство СССР
У 1440030, кл. С 12 N 9/38, 1987. (54) ШТАИИ ГРИБА РЕ ПСПД.ПИ САЯЕЯСКЯБ - ПРОДУЦКНТЯ-ГАЛАКтОЗИДАЗЫ
Изобретение относится к ферментной промышленности, в частности к получению нового штамма, продуцента
-фермента Р -галактоэидазы, используемой для гидролиза молочного сахара— лактозы, и находит широкое применение в различных отраслях пищевой промышленности.
Цель изобретения - выявление штамма-продуцента Р-галактозидазы, обеспечивакяцего ускорение процесса получения фермента и увеличение биосинтеза Р-галактозидазы.
Предлагаемый штамм Penicill iud
canescens ВКПК Р-376 (ТК-85) получают путем облучения ультрафиолетовыми лучами в дозе 200 Дж/м конидии исходного штамма Penicillium
2 (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению нового продуцента фермента Р -галактози-. дазы. Цель изобретения — выявление штамма-продуцента Р-галактозидазы, обеспечивающего ускорение процесса получения фермента и увеличение биосинтеза фермента. Изобретение позволяет получить Р-галактозидаэу в количестве 55-60 ед/мп культуральной жидкости. Из глубинной культуры предлагаемого продуцента выделенный ферментный препарат может быть применен в молочной и хлебопекарной промышленностях для улучшения качества го-. товой продукции, а также в медицине при непереносимости молочного сахара — лактозы.
canescens Sopp 20171 и обладает указанными свойствами.
Морфологические признаки. Цтамм атоксичен,, быстрорастущий, характеризуется умеренным спороношением на агаризованных .средах (намного меньшее, чем в исходной культуре, характеризукнцейся, как правило, обиль, ° ным спороношением) .
Образование конидий начинается на два дня позже, чем в исходной культуре ° Мицелий хорошо развит, септи» рованный.
Конидиеносцы 450-460 мкм длиной и
3,0-3,5 мкм в диаметре отходят от войлочного мицелия, оболочка слабо шероховатая. Кисточки двухъярусные, растопыренные, состоят иэ веточек (метуль), несущих мутовки фиалид, ме3 150940 тули 13-15 х 2,0-2,8 мкм, стеригмы (фиалиды) 7-8 х 2,5 мкм. Конидии
2,0-2,5 мкм в диаметре, шаровидные, образуются в цепочках.
Культуральные признаки. Штамм хорошо растет на искусственных средах (сусло агаре, картофельно-глюкозном агаре, картофельном агаре) и синтетических агариэованных средах (среда Чапека, Сабуро, Ролена-Тома, агаризованной среде с лактозой) .
На среде Чапека колонии бледноголубовато-серого цвета с умеренным спороношением, с обратной стороны . 15 желтовато-соломенного цвета, на 1215 день приобретают от светло-,до темно-коричневого тона.
Линейный рост колоний на агаризованных средах по дням: среда Чапе- 20 ка: 5-й день 48 мм, 10-й день 70 мм, среда Ролена Тома: 5-й день 35 мм, 10-й день 60 мм, картофельно-глюкоэная среда: 5-й день 40 мм, 10-й день 55 мм, среда Сабуро: 5-й день
30 мм, 10-й день 50 мм, агаризованная среда с лактозои: 5-й день 38 мм, 10-й день 60 мм.
На отрубях растет хорошо. Отношение к углеродному питанию: усваивает 30 лактозу, сахароэу, глюкозу, галактору, мальтозу, фруктозу, арабиноэу, крахмал, инулин, сорбит, маннит и др.
Отношение к азотному питанию. Хорошо усваивает нитратный азот, лучше аммонийный, из органических источников азота ассимилирует пептон, мочевину, кукурузный экстракт и др.
Отношение к кислороду. Облигатный аэроб. 40
Отношение к температуре. Иезофил, оптимальная температура роста 28—
30 С.
Отношение к кислотности среды.
Растет в широких пределах рН 2,0-9,0. 45
При выращивании Penicillium сатт
nescens ТК-85 на комплексных средах, содержащих соевую муку, активность -галактозидазы в культуральной жидкости достигает 55-60 ед/мл..
Для размножения штамма применяют модифицированную среду Чапека с лактозой следующего состава, мас. : лактоза — 3,0; NH
0,1; HgSO< — 0,05; КС1 0,05,кукурузный экстракт 0 5 вода остальное, исходное рН 5,8-6,0.
Питательной средой для ферментации служит среда следующего состава, мас. .: соевая мука 3,0; Na HPO 0,05, 1ЦБО, 0,015, вода остальное, исходное рН 4, 1- 4,2. Активность биосинтезируемой штаммом Р-галактозидазы определяют по методу Киву и Lardy. Кроме высокоактивной Р-галактоэидаэы предлагаемый продуцент образует богатую белком биомассу, не уступает по активности известному штамму Е.coli, кроме активности Р--галакто-. эидазы, равной 60 ед/мл (по лактозе), и удельной активностью 5,5 ед/мг белка, мутант Penicillium canescens ТК-85 в фильтрате культуры содержит / активности других гликозидаз: инвертазы 12-14 .ед/мп, Ы, -галактозидазы 3-4 ед/мл, Р-глюкозидазы 1,5-2 ед/мл. Каждая из этих активностей является довольно высокой и указывает на то, что мутант P. canescens ТК-.S5 являет ся активным продуцентом не только Р-галактоэидазы, но и комплекса гликозидаз, что существенно расширяет спектр использования ферментов (оса" харивания большого количества суб-. стратов, например, в безалкогольной пр омышленн ости) . Предлагаемый мутант не является токсичным нли патогенным, опыты по выращиванию и использованию проведены в полупромьппленных масштабах. Пример 1. Штамм Penicillium сааезсепз ТК-85 поддерживают на агаризованной среде с лактозой, содержащей мас. : лактоза 3,0; NH4NO . 0,2, КН РО О, 1, КС1 О, 1,. IfgSOy 0,05,ку-. курузный экстракт 0,05, агар 2, вода . остальное; исходное рН среды 6,0 ° Глубинное культивирование гриба проводят на жидкой питательной среде, следующего состава, мас.Ж: соевая мука 3,0; Na Культивирование проводят в .колбах емкостью 750 мп на термостатированной качалке, делающей 220 об/мин (уровень аэрации 1,4 г О /л ч) при 30 С в течение 72 ч. Засев питательной среды проводят . 2 -ной суспензией конидий поверхност ной культуры гриба, выращенной в пробирках на скошенном лактозном агаре в течение 12 дней при 28 С. Биомассу отделяют фильтрованием и в фильтрате определяют активность/3— 1509402 Составитель И.Привалова Редактор Н.Гунько Техред, М. Ходанич Корректор С.LleKMap Заказ 5765/22 Тираж 501 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 галактозидазы, используя в качестве субстрата ортонитрофенил-P-D-галактопиранозид. Реакционную смесь, состоящую иэ 0,8 мп фосфатно-цнтратного буфера рН 4,2, содержащего 125 мМ субстрата и 0,02 мл раствора фермента (культуральной жидкости) инкуо t бируют при 30 С в течение 15 мин, затем добавляют 1 мп 1 М Na СО для прекращения реакции. Освободившийся о-нитрофенол определяют при Л =420 нм. Активность биосинтезируемой штаммом Р-галактозидазы равняется 60 ед/мл, что составляет 10000 ед/г препарата. Таким образом, образуемый им,фермент обладает активностью 60 ед/мп. Предлагаемый фермент может быть применен в пищевой промышленности и медицине. Формула изобретения Ытамм гриба Penicillium canescens BKIIM F-376 — продуцент Р-галактозйдазы.
