Способ количественного определения антител к эритроцитам барана

 

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для количественного определения антител. Цель изобретения - сокращение времени анализа и упрощение способа. Гранулированный аэросил обрабатывают эритроцитами барана, инкубируют с исследуемой сывороткой и затем десорбируют белок с поверхности аэросила. Затем определяют концентрацию белка, а количество специфических антител определяют по разнице между количеством белка в комплексе антиген-антитело и количеством белка сорбированных эритроцитов барана. По сравнению с прототипом время определения количества противоэритроцитарных антител сокращается на 23 ч, а также упрощается процедура анализа за счет исключения процедуры центрифугирования.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК,»SU,„15134 (50 4 G 01 N 33/53//543

@ Г 7 ..

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К Д ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 41597/4/28-14 (22) 17.09.86 (46) 07.10.89. Бюл. У 37 (7i) .Винницкий медицинский институт им. Н.И. Пирогова и Специальное конструкторско — технологическое бюро Института физической химии АН УССР (/2) Н ° Б. Луцюк, А.А. Чуйко, Е.В. Тертышная, В.В. Гавура, В.И. Богомаз, И.Ф. Миронюк, Т.Н. Луцюк и П.К. Постовитенко (53) 615 ° 3/3(088 ° 8) (56) Иикробиологияр 1971, К- 39 с. 111 — 114. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ЭРИТРОЦИТАМИ БАРАНА (57) Изобретение относится к иммуноИзобретение относится к области иммунологии и может быть использовано для количественного определения антител и антигенов.

Целью. изобретения является упрощение методов и сокращение времени анализа.

Способ осуществляют следующим образом.

В качестве иммуносорбента используют гранулированный аэросил, способный самопроизвольно адсорбировать на своей поверхности эритроциты барана при оптимальных условиях адсорбции, При этом антитела, содержащиеся в исследуемом растворе, соединяются с этим иммобилизованным антигеном. Количество антител определяют по раз2 логии и может быть использовано для количественного определения антител.

Цель изобретения — сокращение времени анализа и упрощение способа. Гра". нулированный аэросил обрабатывают эритроцитами барана, инкубируют с исследуемой сывороткой и затем десорбируют белок с поверхности аэросила.

Затем определяют концентрацию белка, а количество специфических антител определяют по разнице между количеством белка в комплексе антиген-антитело и количеством белка сорбированных эритроцитов барана. По сравнению с прототипом время определения количества противоэритроцитарных антител сок- Я ращается на 23 ч, а также упрощается процедура анализа за счет исключения процедуры центрифугирования.

С:: ности между количеством белка в комплексе антиген-антител и антигеном, адсорбировавшемся на гранулированном аэросиле с учетом неспецифической сорбции, П р и м е.р. В качестве сорбента

1используют гранулированный аэросил, полученный из аэросила А-300. Гранулы "Аэросилогель", представляющие собой сферические образования диаметром около 2 мм с плотностью 200-230 г/л, размером пор 400-600 А, удельной поверхностью t50 м /г.

Эритроциты барана ..разводят физиологическим раствором и добавлялк в ряд пробирок с гранулированным аэросилом, инкубируют в течение 1 ч. 3атем трехкратно отмывают дистиллированФормула изобретения

Составитель В. Литовченко

Техред Л,0лийнык Корректор N, Васильева

Редактор Н. Бобкова

Заказ 60/б/46 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101

3 1513403 ной водой для удаления гемоглобина, который мешает количественному определению белка. При отмывании дистиллированной водой эритроциты лопаются, гемоглобин выходит из них в раствор.

При этом эритроциты барана и частицы гранулированного азросила обесцвечиваются, что указывает на освобождений адсорбировавшихся эритроцитов от гемо-10 глобина.

0,2 мл 2э%-ного раствора эритроцитов барана добавляют в ряд пробирок, содержащих навеску по 10 мг гранулированного аэросила в каждой, инкубиру 15 ют при рН 4,5-/,О. Далее определяют количество адсорбированных эритроцитов биуретовым методом, после десорбции их б — ным раствором NaOH.

Затем добавляют 0,5 мл исследуе- 20 мой сыворотки к готовому аэросилу с адсорбированными к его поверхности эритроцитами барана.

Для снижения неспецифической сорбции исследуемую сыворотку разводят в

20 раз. Инкубируют в течение 60 мин и отмывают.

Количество антител определяют по разнице между количеством белка в пробирках, содержащих комплекс антиген- 30 антитело, и количеством белка в пробирках с адсорбированным антигеном.

Предложен простой метод количественного определения антител к эритроцитам барана с помощью гранулированного аэросила. Упрощение метода по сравнению с известным заключается в том> что в качестве иммуносорбента используют гранулированный аэросил, который самопроизвольно и прочно ад-. сорбирует антиген — эритроциты барана.

Причем, за исключением фотометрирования, анализ осуществляют в одной пробирке, что.исключает перенос реагентов из одной пробирки в другую с неизбежными при этом потерями .

Метод не требует центрифугирования, которое отнимает много времени и потому весьма прост в исполнении.

Для определения антител к эритроцитам барана с помощью предлагаемого способа затрачивается 1 ч, в тс время как по известному способа затричивается 24 ч.

Способ количественногG определения антител к эритроцитам барана, включающий адсорбцию антигена на твердой подложке, инкубацию исследуемой сыворотки с образованием комплекса антиген-антитело, десорбцию комплекса и антигена с последующим отделением количества белка по разнице между количеством белка в комплексе антиген-антитело и адсорбированным антигеном отличающийся тем, то, с целью сокращения времени анализа и упрощения способа, в качестве

-.íepäoé подложки используют аэроскл.