Способ биосинтеза бензилпенициллина
Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству антибиотиков. Цель изобретения - удешевление способа. Продуцент антибиотика Penicillium chrysogenum культивируют в питательной среде в аэробных условиях при перемешивании. В качестве предшественника в процессе ферментации вводят предварительно нейтрализованный щелочной гидролизат цианистого бензила, являющегося промежуточным продуктом синтеза фенилуксусной кислоты. Гидролизат вводят в количестве, обеспечивающем концентрацию солей фенилуксусной кислоты 3,6 - 7,3 ммоль/л ферментационной среды.
Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к производству антибиотиков. Цель изобретения удешевление способа. П р и м е р 1. Щелочной гидролизат цианистого бензила (промежуточный продукт синтеза фенилуксусной кислоты) после предварительной нейтрализации содержащегося в нем избытка едкого натра серной кислотой и разбавления водой 14-15% содержит 4,65% сульфата натрия и имеет водородный показатель 7,0 рН. Полученный раствор стерилизуют в автоклаве при 120оС в течение 40 мин и используют в качестве предшественника. Вегетативный посевной материал продуцента пенициллина Penicillium chrysogenum 9741 "бежевый" с объемной долей влажной биомассы 30% (рН 5,8) вносят асептически в количестве 600 мл в аппарат вместимостью 10 л, содержащий 6,9 л ферментационной среды следующего компонентного состава, мас. Кукурузный экстракт 1,8 Лактоза 10 Глюкоза 1,0 Аммоний азотнокислый 0,8 Соевая мука 1,8 Мел 1,0 Магний сернокислый 0,1 Натрий серноватистокислый 0,8 Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,6 Подсолнечное масло 0,2 Пропинол Б-400 0,02 Вода Остальное рН среды после стерилизации 5,95; Культивирование осуществляется при следующем режиме: температура 24
1оС; работа мешалки, об/мин: от 0 до 12 ч 350, от 13 ч до конца процесса 650, расход воздуха (объем/объем среды в мин): от 0 до 12 (0,7:1,0), от 12 до конца (1,2:1,0). рН культуральной среды поддерживают на уровне 6,3-6,6 посредством дозирования 10%-ных растворов серной кислоты. Уровень аммонийного азота поддерживают в пределах 0,01-0,04% посредством дозирования 18%-го раствора сульфата аммония и 12%-ной аммиачной воды. Через 15 ч культивирования при достижении объемной доли влажной биомассы 25% автоматически дозируют полученный раствор щелочного гидролизата цианистого бензила таким образом, чтобы массовая доля предшественника в культуральной жидкости составляла 0,05-0,10% Через 162 ч культивирования получают 5,2 л культуральной жидкости, содержащей 25000 ед/мл бензилпенициллина и 210 ед/мл пенициллиноподобных веществ. Общий расход рабочего раствора щелочного гидролизата цианистого бензила составляет 450 мл. С учетом съема антибиотика в культуральной жидкости с операции 0,155 мдрд.ед. удельный расход предшественника составляет 0,43 л на 1 млрд.ед. пенициллина в культуральной жидкости. П р и м е р 2. Щелочной гидролизат цианистого бензила после предварительной нейтрализации избытка едкого натра серной кислотой и разбавления водой до массовой доли фенилацетата натрия 16% содержит 0,64% сульфата натрия и имеет рН 5,8. Полученный раствор стерилизуют и используют в качестве предшественника. Вегетативный посевной материал P.chrysogenum Б-2 с объемной долей влажной биомассы 30% и рН 5,85 в количестве 700 мл асептически вносят в 7 л ферментационной среды, приведенной в примере 1. Процесс культивирования продуцента и биосинтеза пенициллина ведут в условиях, приведенных в примере 1. Через 165 ч культивировании получают культуральную жидкость, содержащую 27500 ед/мл бензилпенициллина и 760 ед/мл бензилпенициллинподобных веществ. Съем антибиотика в культуральной жидкости составляет 0,142 млрд.ед. Расход рабочего раствора щелочного гидролизата цианистого бензила составляет 410 мл на операцию, что в пересчете на 1 млрд.ед. бензилпенициллина в культуральной жидкости составляет 0,43 кг. Таким образом, не снижая выхода целевого продукта, использование нового предшественника позволяет заменить чистые препараты солей фенилуксусной кислоты, что удешевляет способ и улучшает условия труда на производстве.
Формула изобретения
СПОСОБ БИОСИНТЕЗА БЕНЗИЛПЕНИЦИЛЛИНА путем ферментации продуцента Penicillium chrysogenum в аэробных условиях в питательной среде с введением по ходу ферментации предшественника антибиотика, отличающийся тем, что, с целью удешевления способа, в качестве предшественника используют гидролизат цианистого бензила, являющийся промежуточным продуктом синтеза фенилуксусной кислоты, в количестве, обеспечивающем концентрацию солей фенилуксусной кислоты 3,6 7,3 моль/л ферментационной среды.MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе
Номер и год публикации бюллетеня: 36-2000
Извещение опубликовано: 27.12.2000
