Способ определения фосфолипидов в крови при массовых обследованиях

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к биохимическому определению содержания фосфолипидов в крови, и может быть использовано для контроля содержания фосфолипидов при массовых обследованиях. Целью изобретения является повышение точности и упрощение способа. Цель достигается тем, что берут 0,1 мл крови на фильтр, экстрагируют раствором едкого натра, минерализуют 57%-ной хлорной кислотой. К минерализату добавляют 1 мл 1%-ной аскорбиной кислоты и 0,3 мл молибденового реактива. После термостатирования молибденовую синь экстрагируют изобутиловым спиртом и затем фотометрируют на фотоэлектроколориметре. Содержание липидного фосфора определяют по калибровочной кривой. Концентрацию фосфолипидов рассчитывают по формуле С=А К /мг%/, где С - концентрация фосфолипидов в сыворотке крови, мг%, А - концентрация фосфора в опытной пробе в мкг/мл, К - коэффициент пересчета концентрации липидного фосфора, содержащегося в крови в концентрацию фосфолипидов в сыворотке крови, мг%.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) (5I)4 0 01 11 33 92

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ П(НТ СССР (2l) 4220009/28-14 (22) 31.03.87 (46) 30 ° !0.89. Бюл. 1с> 40 (71) Пермский государственный мс " йицинский институт (72) А.В. Любимов> F,.Â, Пекщева и А.Е. 111екалев (53) 612.015 (088 ° 8) (56) Методические рекомендации по применению комплексного микрохимического анализа крови. — Л., 1979, с. 11, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ с»ОСФОЛИПИЛОВ

В КРОВИ ПРИ МАГСОВ11Х ОБГЛЕДОВАН11ЯХ (57) Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к биохимическому определению содержания фосфолипидон в крови, и может быть использовано для контроля содержания фосфолипидон при массовых обследованиях. Целью изобретения является повышение точности и упрощение споИзобретение относится к медицине> а именно к биохимическому определению содержания фосфолипидов в крови при массовых обследованиях, Цель изобретения — поньпчение точности и упрощение способа.

Способ осуществляют следуют(им образом.

Для анализа микропипеткой берут

0,1 мл крови и равномерно распределяют по фильтру. ильтры высушивают на воздухе, делают на фильтре необходимь1е пометки карандашом и помещают н эксикатор над твердым сушителем.

Пробы н таком ниде могут храниться

2 соба. Цель достигается тем, что берут 0,1 мл крови на фильтр, экстрагируют раствором едкого натра, минерализуют 577-ной хлорной кислотой, К минерализату добавляют I мл 17,-ной аскорбиновой кислоты и 0,3 мл молибденового реактива. После термостатиронания молибденовую синь экстрагируют изобутиловым спиртом и затем фотометрирунт на фотоэлектроколориметре. Содержание липидного фосфора определяется по калибровочной кривой, Концентрацию фосфолипидов рассчитывают по формуле С=А К мг7.> где С вЂ” концентрация фосфолипидов в с IBopoTKp крови, мг7., А — концентрация фосфора в опытной пробе, мкг/мл; К вЂ” коэффициент пересчета концентрации липидного фосфора, содержашегос.я в крови, в концентрацию фосфолипидов н сыворотке крови, мг7,. в течение многих месяцев. Затем свободные от крови края фильтра обрезают и выбрасывают> а пробу, разрезан- CO ную на мелкие кусочки, помещают н прс — " пробирки и заливают 1,5 мл 0>3 н. раствора едкого натра на сутки. Через сутки 0,5 мл щелочного смыва минерализуют с. 0,1 мл 57",-ного раствора хлорной кислоты н прс бирках г плотнопритертыми пробками при 180 Г до гех пор, пока минерализат не пр«,обретет вид белых или благ,но-желтых крис галлон (=5-6 ч), К минерализату добавляют 1 мл 17-нпгс раствора ас>.србинс— вой кислоты и (1,3 >ч мслиблепов; го!

518801

А .100.25

С = --- — = A 0,704 = А К (мг7! 35

1000 3,55 - "") содержание фосфолипидов в сыворотке крови, мгЕ; содержание фосфора в опытной пробе, определенное по калиб- 40 ровочному графику (мкг/мл); фактор пересчета на 100 мл; фактор пересчета содержания липидного фосфора в фосфолипи45 фактор пересчета мкг в мг; коэффициент пересчета концентрации фосфолипидов в цельной крови в концентрацию фосфолипидов в сыворотке крови, определен экспериментально по соотношению фосфолипидов в цельной крови и в сыворотке, взятых на фильтры у людей и белых крыс.

55 и м е р 1. У практически здоронора, 18 лет, через 12 ч после пищи берут кровь из пальца в где С

IOO25

l0003,55П р вого до приема реактива. Пробы помещают в термостат при 45 С на 30 мин, Образовавшуюся молибденовую синь экстрагируют 2 мл изобутилового спирта тщательно пере1

5 мешав его с содержимым пробирки>и выдерживают в вытяжном шкафу 5 мин.

Окраска изобутилового слоя стабильно сохраняется более 2 ч. Окрашенный слой фотометрируют на приборе

ФЭК йри длине волны 630+10 нм против дистиллированной воды в кювете шириной слоя 3 мм.

Для определения количества липидного фосфора строится калибровочная !

5 кривая. Из стандартного раствора

КН РО готовят несколько разведений в препелах от I П до 500 мкг/мл фосфора. Стандартный раствор готовят растворением 4, 39 г I;II РР,, высушенного до постоянного вега, н 1 литре дистиллированной воды. По 0,1 мл разведений наносят на фильтр, высушивают на воздухе, предварительно обозначив границы "пятна", В дальнейшем обрабатывают фильтр в соответствии с предложенным способом.

После этого строят график зависимости оптической плотности раствора от содержания фосфора, нанесенного на фильтр (мкг/мл), 30

Для определения концентрации фосфолипидов в сыворотке крови (мг7) используют формулу: количестве 0 ип, равномерно наносят на фильтр, Высушенный на воздухе и измельченный фильтр с кровью после обрезания свободных краев заливают. на сутки 1,5 мл 0,3 н. раствора едкого натра. Затем 0 5 мл щелочного смыва минерализуют с 0,1 мл 553-ного раствора хлорной кислоты при

180 С, к минерализату добавляют

1 мл IX-ного раствора аскорбиновой кислоты и 0,3 мл молибденового реактива. 1!осле термостатирования 30 мин при 45 С образовавшуюся молибденовую о, синь экстрагируют 2 мл изобутилового спирта, Окрашенный слой фотометрируют на приборе ФЗК при красном светофильтре против дистиллированной воды в кювете с шириной слоя 3 мм. Концентрацию липидного фосфора в крови определяют по графику зависимо"ти оптической плотности раствора от содержания фосфора, нанесенного на фильтр (мкг/мл). Для определения концентрации фосфолипидов в сыворотке крови пользуются формулой: С = А 0,704 (мг7.), Концентрация фосфолипидов в крови донора С = 263 0>704

I85,15 мгЕ.

Пример 2. У больного Н., 48 лет, поступившего в лечебное учреждение с диагнозом: обострение хронического холецистита, берут кровь из пальца в количестве О, 1 мл, равномерно наносят на фильтр. Высушенный на воздухе и измельченный фильтр с кровью после обрезания свободных краев заливают на сутки 1,5 мл 0,3 н.раствора

Na0H Затем 0,5 мл щелочного смыва минерализуют с 0,1 мл 60Х-ного раствора хлорной кислоты, к минерализату добавляют I мл 17.-ного раствора аскорбиновой кислоты и 0,3 мл молибденового реактива, После термостатирования о

30 мин при 45 С образовавшуюся молибденовую синь экстрагируют 2 мл изобутилового спирта, Окрашенный слой фотометрируют на приборе ФЭК при красном светофильтре против дистиллированной воды в кювете с шириной слоя

3 мм, определяют концентрацию липидного фосфора в крови по графику зависимости оптической плотности раствора от содержания фосфора, нанесенного на фильтр (мкг/мл ). Для определения концентрации фосфолипидов в сыворотке крови используют формулу

С = Ax0,704 (мгЕ).

Способ определения фосфолипидов в крови при массовых обследованиях путем консервации крови на бумажных фильтрах, экстракции, минералиэации е

Составитель В. Иитюаин

Редактор Л, Пчолинская Техред JI. Олийнык Корректор ). Лончаконл

Заказ 6603/52 Тираж 789 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям н открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г.ужгород, ул. Гагарин.,101

5 1518801 6

Концентрация фосфолипидов в крови добавления восстановителя и молибдеС = 915 "0,704 = 643,71 (MrX), нового реактива, экстракции и фотоСпособ позволяет определять фосфо- метрирования экстракта, о т л и ч а липиды с среднеквадратичным отклоне- ю шийся тем что с целью повы5

° 1 нием 2,3 по сравнению с 8,6 в прото- шенин точности и упрощения способа, типе, минерализацию проводят в среде 55607-ной хлорной кислоты> в качестве

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я восстановителя используют 1-27-ный раствор аскорбиновой кислоты, а молибденовый реактив готовят Hs 0,57-ного водного раствора молибденовокислого аммония и 13 н. серной кислоты в соотношении 2:1,